跨膜受体蛋白Notch2在肺腺癌组织中的表达变化及意义

张青，刘益飞，张曙，章建国

(南通大学附属医院，江苏南通 226001)

Nocth信号通路是近几年研究的热点，其主要由细胞膜配体、受体和下游分子组成。已有研究证实，Nocth信号通路在肿瘤发生、胚胎发育及血管损伤修复中具有重要作用[1，2]。Notch信号通路中的Notch受体蛋白是目前研究的热点，但其在肺腺癌中的作用鲜见报道。本研究观察了Notch2在肺腺癌组织的表达变化，并探讨其在肺腺癌发生、发展中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料选取南通大学附属医院病理科2010年1月～2011年12月保存的肺腺癌及其配对癌旁正常肺组织(距离肿瘤边缘>2 cm)石蜡标本各130例份，均经HE染色后病理确诊，患者术前均未进行放化疗、中药及免疫治疗等。130例肺腺癌患者中男62例，女68例；年龄41～83岁、平均61岁，<61岁69例、≥61岁61例；肿瘤最大径<3 cm 64例，≥3 cm 66例；分化程度：高分化32例，中分化65例，低分化33例；TNM分期：Ⅰ期45例，Ⅱ期40例，Ⅲ期33例，Ⅳ期12例；有淋巴结转移51例，无淋巴结转移79例。本研究通过医院伦理委员会审核，患者及家属均知情同意。

1.2癌组织及其癌旁组织Notch2蛋白表达检测采用免疫组化法。将癌组织及其癌旁组织石蜡标本经10%中性甲醛固定24 h，常规4 μm厚切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水；抗原修复仪中99 ℃条件下修复22 min，0.3% H2O2阻断内源性过氧化物酶活性，滴加一抗(1∶250)，4 ℃冰箱过夜；次日取出复温，滴加生物素化的兔抗山羊二抗IgG，室温孵育30 min，PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分化，脱水封片。以已知的阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。Notch2阳性染色定位于细胞质，采用半定量积分法对染色结果进行判断，每张切片在高倍镜下随机选取10个视野，每个视野计数200个细胞。根据染色强度为无色或淡黄色、黄色、棕黄色和深黄色分别记为0、1、2、3分，根据每个视野200个细胞中阳性细胞比例为0～25%、26%～50%、51%～75%和>75%分别记为1、2、3、4分。将染色强度与阳性细胞比例得分的乘积作为最终评分，≤6分为阴性，>6分为阳性。由南通大学附属医院病理科两名主治以上医师采用双盲法判断结果。收集130例患者的临床病理参数，术后随访至2016年12月31日，绘制Kaplan-Meier生存曲线，记录患者3年及5年生存率，分析肺腺癌组织Notch2蛋白表达与患者临床病理参数及预后的关系。

2　结果

2.1癌组织及其癌旁组织Notch2阳性表达比较癌组织及其癌旁组织Notch2阳性表达率分别为54.6%(71/130)、36.2%(47/130)，二者比较P<0.05。

2.2癌组织Notch2表达与患者临床病理特征的关系癌组织Notch2阳性表达率与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况有关(P均<0.05)，与患者性别、年龄及肿瘤直径无关(P均>0.05)。见表1。

表1　　　　癌组织Notch2表达与患者临床病理特征的关系[例(%)]

2.3癌组织Notch2表达与患者预后的关系130例肺腺癌患者中位生存时间为46个月。Notch2阳性表达者3年生存率为57.3%、5年生存率为14.1%，Notch2阴性表达者分别为84.7%、40.0%，Notch2阳性表达者3年及5年生存率均低于Notch2阴性表达者(P均<0.05)。

3　讨论

1917年，Notch基因被美国著名遗传学家Thomas首次发现，由于其基因突变可以引起果蝇出现残翅的现象，因此命名为Notch。Notch基因编码的蛋白属为单次Ⅰ型跨膜蛋白，为高度保守的细胞表面受体，分子质量约为300 kb。Notch基因在细胞膜上主要以异二聚体的形式进行表达，通过受体与相应配体结合形成信号通路来调控细胞增殖和凋亡[3]。目前，在哺乳动物体内发现4种Notch受体(Notch 1～Notch 4)及5种相应配体(DLL-1、DLL-3、DLL-4和Jagged-1、Jagged-2)[4]。已有研究证实，Notch信号通路可以在胚胎发育、血细胞形成、肿瘤发生等生理病理过程中发挥重要作用。研究发现，Notch信号通路与其他信号通路不同，不需要第二信使及蛋白激酶的参与，其调节作用主要在细胞分化过程中进行，从而影响组织发生变化。因此，Notch信号通路往往表现为双重性，可以根据肿瘤细胞的不同类型和生长环境的差异发挥促癌或者抑癌基因作用，从而影响肿瘤患者的预后[4～6]。

Notch2是Notch信号通路中重要的受体蛋白，当Notch2受体与其配体结合后，暴露TACE金属蛋白酶切位点，经过酶切作用后释放出胞内域NICD；NICD进入细胞核后与转录抑制因子CSL/CBF1结合，活化Hes等特定基因的转录，从而进行细胞内精确调控，进而影响细胞凋亡、增殖和分化[3,7,8]。Notch2在不同肿瘤中发挥的作用不同。在乳腺癌、胰腺癌、肾透明细胞癌中，Notch2可促进肿瘤细胞侵袭和转移[9～11]；在甲状腺髓样癌、结直肠癌中Notch2起到抑制肿瘤发生、发展的作用[12，13]；在肝细胞癌中Notch2在癌组织及正常肝组织中的表达水平总体一致，没有出现明显差异[14]。Notch2在淋巴瘤组织中的表达情况也存在一定的差异，Notch2在B细胞淋巴瘤及NK/T细胞淋巴瘤中的表达明显高于其他类型的T细胞淋巴瘤[15]。针对这一特殊现象，有学者对大鼠早期肺发育过程中Notch2的作用进行研究，发现Notch2广泛存在于肺泡上皮细胞、间质成纤维细胞及血管内皮细胞，其主要通过调控肺泡上皮细胞和血管内皮细胞增殖来维持肺功能[16]。已有研究证实，Notch2在肺鳞形细胞癌中起到促进癌症发生的作用，但其在肺腺癌中的具体作用鲜见报道。本研究结果显示，肺腺癌组织石蜡标本中Notch2阳性表达率均明显高于癌旁正常肺组织，说明Notch2参与了肺腺癌的发生。本研究结果显示，肺腺癌组织石蜡标本中Notch2阳性表达率与患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况有关，且Notch2阳性表达者3年及5年生存率均低于Notch2阴性表达者，说明Notch2表达升高可能参与了肺腺癌的进展，并提示患者预后不良。

综上所述，肺腺癌组织Notch2表达升高；Notch2表达升高可能参与了肺腺癌的发生、发展，并提示患者预后不良。Notch2在肺腺癌发生的过程中起到促癌基因作用，特异性抑制Notch2蛋白可能成为肺腺癌的一个治疗靶点，但是Notch2的作用机制仍需深入探讨。

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