CXCR1、CXCR2及IL-8在老年社区获得性肺炎患者病情及预后评估中的作用

陈晓斐 徐志豪 董大鹏

(浙江大学医学院附属第二医院呼吸内科，浙江 杭州 310009)

社区获得性肺炎(CAP)患者的预后与多种因素相关，目前多采用肺炎严重指数(PSI)评分评估患者的病情及预后，但老年患者的临床表现常不典型〔1〕。既往研究发现，老年CAP患者病变程度与炎症反应相关，C反应蛋白(CRP)对患者的预后具有提示作用，但CRP为非特异性炎症指标，在外伤、心血管病等多种情况下均可上升〔2〕。白细胞介素(IL)-8通过与其趋化因子受体(CXCR)1及CXCR2结合启动中性粒细胞趋化反应，募集白细胞，引起及加重炎症反应〔3〕。本研究旨在分析IL-8及其受体CXCR1、CXCR2在老年CAP患者病情及预后评估中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2015年6月至2016年6月浙江大学医学院附属第二医院收治的78例老年CAP患者，其中男52例，女26例，年龄61～82〔平均(71.1±9.0)〕岁。纳入标准：(1)符合2006年中华医学会《社区获得性肺炎诊断和治疗指南》标准〔4〕；(2)患者发病时均出现咳嗽、咳痰、发热等呼吸道感染症状；(3)CT显示患者肺部有炎症阴影；(4)患者均自愿参与。排除标准：(1)严重心、肝、肾功能性损伤、中枢神经系统疾病、患有肺部肿瘤，除外慢性肺部疾病如慢性支气管炎及慢性阻塞性肺疾病(COPD)病史、间质性肺炎、哮喘者；(2)合并自身免疫疾病及结缔组织病合并肺部感染者；(3) 合并有精神神经系统疾病，不能配合者。选取50名健康志愿者为对照组，其中男33名，女17名，年龄61～80〔平均(70.9±8.5)〕岁。两组性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2PSI评分 使用PSI评分对患症状进行评价〔5〕，I级患者不需要进行评分，Ⅱ～Ⅴ级患者根据PSI进行评分，项目包括年龄、合并疾病(肿瘤、肝病、充血性心力衰竭、脑血管病及肾病)、体格检查(神志状态、呼吸次数、血压、体温及脉搏)及化验结果(血气分析结果、血尿素氮、血钠、血糖、HCT及胸腔积液)。Ⅱ～Ⅲ级为低风险组(PSI评分≤90)21例，男14例，女7例，平均年龄(67.3±5.2)岁；Ⅳ级为中风险组(PSI评分91～130)34例，男23例，女11例，平均年龄(69.2±4.9)岁；Ⅴ级为高风险组(PSI评分>130)23例，男15例，女8例，平均年龄(76.4±4.3)岁。3组性别差异无统计学意义(P>0.05)，年龄差异有统计学意义(P<0.05)。

1.3检测CXCR1、CXCR2级IL-8水平 CAP组及对照组于清晨经肘静脉抽取空腹血10 ml，分别置2支含肝素(200 IU/ml的无菌eppendorf管和1支洁净的eppendorf管),Perocll非连续密度梯度离心法分离中性粒细胞，普通管常规分离血清备检。血清IL-8水平采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，试剂盒由联科生物技术股份有限公司提供(中国)。制备中性粒细胞单个细胞悬液(1×106/ml)，取100 μl细胞悬液加入抗人CXCR1抗体、抗人CXCR2抗体，抗体由上海瑶韵生物科技有限公司提供，4℃避光孵育30 min，用染色缓冲液洗涤细胞2次，200 μl染色缓冲液重悬后上流式细胞仪FACSCalibur检测，每个样品至少收集1×104以上的细胞，数据采用仪器自带的软件分析处理。

1.4CXCR1、CXCR2及IL-8的mRNA水平检测 使用RPMI1640完全培养液重悬中性粒细胞，以牛鲍氏计数板调浓度至1×106个/ml。移液器取细胞悬液300 μl，提取细胞总RNA。RT-PCR引物及试剂盒由赛默飞世尔(中国)有限公司提供。PCR体系25 μl包括2.5 μl 10×PCR缓冲液(Mg2+)，2 μl dNTP混合物(各10 mmol/L)，0.25 μl TaqDNA聚合酶(5 U/μl)，1 μl上游引物(10 μmol/L)，1 μl上游引物(10 μmol/L)，2 μl cDNA，16.25 μl ddH2O。反应条件 94℃变性5 min，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共30个循环，最后一次延伸持续5 min。取扩增产物5 μl，进行1.5%琼脂糖凝胶(含0.5 g/ml EB)电泳，电压5～6 V/cm 15 min，紫外透射分析仪进行观察，凝胶分析系统扫描摄像定量分析，记录实验结果。

1.5统计学方法 应用SPSS21.0统计软件进行t检验或单因素方差分析、χ2检验及Pearson相关性分析。

2 结 果

2.1CAP患者PSI评分比较 低、中、高风险组PSI评分〔(65.2±17.9)、(114.2±24.5)、(153.2±21.6)分〕差异有统计学意义(F=7.885，P<0.05)。

2.2各组血CXCR1、CXCR2及IL-8水平比较 各组IL-8、CXCR1及CXCR2水平差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组血IL-8、CXCR1及CXCR2水平比较

与对照组比较：1)P<0.05；下表同

2.3各组CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA水平比较 各组IL-8、CXCR1及CXCR2 mRNA差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组IL-8、CXCR1及CXCR2 mRNA水平比较

2.4PSI与CXCR1、CXCR2及IL-8的相关性 校正性别及年龄后，PSI与血CXCR1、CXCR2及IL-8水平呈正相关(r=0.413，0.395，0.304；均P<0.05)；与CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA呈正相关(r=0.581，0.559，0.604；均P<0.05)。

3 讨 论

随着年龄的增长及免疫力的下降，老年CAP患者的症状、体征及影像学检查结果常不典型。PSI是目前临床上常用的评价CAP患者预后的方式，Ⅰ级患者年龄较轻，且未合并并发症，不需要进一步进行评分；Ⅱ～Ⅲ级患者死亡风险低于3%，仅需要门诊进行观察；Ⅳ级患者死亡风险可达9%，需要住院；Ⅴ级患者需要长期院内管理〔6〕。本研究结果提示，高龄(≥75岁)是CAP患者预后不良的独立危险因素，患者一般状态较差且合并疾病较多。

CXCR1及CXCR2属于G蛋白耦联受体，在氨基酸序列高度相似。CXCR主要表达于中性粒细胞表面，在健康人体内表达水平较低〔7〕。IL-8为CXCR1及CXCR2的共同配体，结合受体后激活下游通路诱导中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞等炎性细胞游走至病变部位，介导炎症反应。活化的炎性细胞分泌溶菌酶、超氧化物等，包裹及杀灭病原体，发挥抗感染作用。但在存在严重感染时，大量的中性粒细胞产生的细胞因子可能造成组织损伤；同时，中性粒细胞活化增加局部组织耗氧量，加重氧化应激反应，产生大量氧自由基，加重机体损伤〔8〕。既往研究中，CXCR1及CXCR2的拮抗剂能够有效抑制LPS诱导小鼠肺炎模型的炎性反应，降低死亡率〔9〕。

PSI主要临床表现对CAP患者的病情及预后进行评估，容易受到与评估者及受试者相关的多种因素的影响。IL-8及其配体能够更为准确客观，且与PSI相关性良好，适合作为评估CAP患者预后及病情评估的辅助检查指标。

4 参考文献

1周 忠,陈 佳,谢小馨,等.白细胞不升高社区获得性肺炎的临床特征与危险因素〔J〕.中国老年学杂志,2016;36(20):5079-82.

2凡 敏,梁宗安,胡丽佳,等.降钙素、D-二聚体、C 反应蛋白与重症社区获得性肺炎病情、预后判断的相关性研究〔J〕.中国实验诊断学,2015;19(4):563-6.

3魏 晶,李 伟,邵万平,等.CXCR1/CXCR2拮抗剂G31P抗中性粒细胞介导的炎症作用研究〔J〕.中华微生物学和免疫学杂志,2010;30(5):483-6.

4邓伟吾.社区获得性肺炎诊断和治疗指南〔C〕.上海：中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编,2001：276-9.

5丁艳艳,张永祥.病情程度评估在社区获得性肺炎患者中的应用价值〔J〕.国际呼吸杂志,2015;35(24):1854-6.

6但 勇,覃双全.PSI评分和CURB-65评分对社区获得性肺炎患者病情及预后的对比研究〔J〕.中国当代医药,2012;19(21):29-30.

7陈张博.CXCR1/CXCR2受体拮抗剂iP10C57BL/6小鼠克雷伯杆菌肺炎的抑制作用〔D〕.大连：大连医科大学,2011.

8徐绍娟,胡爱民.细菌性肺炎患者IL-6及IL-8及C反应蛋白的测定及其意义〔J〕.中国微生态学杂志,2015;27(6):702-3.

9邵万平.CXCR1/CXCR2受体拮抗剂-G31P对豚鼠肺炎克雷伯杆菌肺炎的抑制作用〔D〕.大连：大连医科大学,2010.