乳腺癌组织中小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α的表达变化及其意义

施育华，刘小兵，龚建平

(1 盐城市第三人民医院，江苏盐城 224001；2江苏省肿瘤医院)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，是妇女恶性肿瘤死亡的主要原因[1]，因此乳腺癌的早期诊断尤为重要。靶基因在乳腺癌预防、诊断和治疗中的作用是目前研究热点[2]。SGT是一种细小病毒NS1蛋白的结合伴侣，可参与细胞周期调控、蛋白质折叠、蛋白质运输以及蛋白质泛素化等细胞生物过程[3]。SGT能够参与激素受体或其他途径的蛋白质之间的相互作用[4]。SGT与β-淀粉样肽相互作用有关[5]。SGT与细胞有丝分裂有关，在哺乳动物细胞分裂，细胞凋亡和基因调控中发挥作用[6]。小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白α(SGTA)是SGT家族中的重要成员，与SGT具有60%的氨基酸序列同源性。SGTA是一个新的细胞周期调节蛋白，SGTA的过表达与肺癌、肝癌和食管鳞状细胞癌等肿瘤的发生发展及预后有关[7～9]。但目前SGTA在乳腺癌组织中的表达及其意义尚未明确。增殖细胞核抗原(Ki-67)是一种增殖细胞相关的核抗原，目前临床将其作为标记细胞增殖状态的抗原。本研究观察了乳腺癌组织中的表达变化，分析其与临床病理参数及预后的关系，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2002年6月～2012年06月间盐城市第三人民医院和江苏省肿瘤医院收治的90例女性乳腺癌患者，均行肿瘤切除术，术中留取乳腺癌组织及相应癌旁组织(距离癌组织≥5 cm)的石蜡包埋标本。患者中年龄29～78 岁，中位年龄50岁；所有患者在术前均未接受过任何治疗，病理诊断由病理科高级职称专家经双盲法确认，临床病理资料完整。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2 乳腺癌组织及癌旁正常组织SGTA、Ki-67检测 采用免疫组织化学法。取乳腺癌组织、癌旁正常组织将石蜡组织切4 μm片, 4 %甲醛和梯度酒精脱蜡, 0.3 %过氧化氢封闭内源性过氧化物酶的活性。双蒸水冲洗后100 ℃烤箱5 min ,自然冷却；PBS冲洗3遍,加入10 %小牛血清封闭非特异性抗原, PBS冲洗后,滴加多克隆兔抗人SGTA抗体、Ki-67抗体(1∶100，均购自Santa Cruz, USA)，36 ℃孵育120 min，PBS冲洗3遍；滴加生物素抗兔IgG PBS二抗孵育30 min，用PBS缓冲液冲洗3遍；DAB显色，苏木精复染，明胶甘油封片。镜下观察判断。SGTA以乳腺癌细胞质和(或)细胞核(极少数)出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性表达，Ki-67阳性细胞指细胞核染色为淡黄至棕黄色或棕褐色颗粒。每张切片随机选择5个有代表性的高倍视野(×400)，计算阳性细胞百分率。阳性细胞百分率≤32%者为低表达，>32%者为高表达。

1.3 乳腺癌患者生存情况随访 对90例患者进行随访，采用门诊或住院复查与电话随访相结合的方式进行。生存时间按患者手术时间为起始点，以月为单位进行计算。总生存时间(OS)定义为从手术之日开始至死亡或末次随访时间，随访时间为18～120个月，中位随访时间为64个月。

2 结果

乳腺癌组织、癌旁正常组织中SGTA的阳性表达率分别为76.7%(69/90)、35.5%(32/90)，二者比较，P<0.05。乳腺癌组织、癌旁正常组织中Ki-67的阳性表达率分别为80.0%(72/90)、32.2%(29/90)，二者比较，P<0.05。

SGTA、Ki-67的表达与乳腺癌临床病理参数的关系见表1。SGTA的表达与乳腺癌的组织分化程度、淋巴结转移及雌激素受体(ER)有关(P均<0.05)，与患者年龄、肿瘤直径、组织学类型、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)及p53等无关(P均>0.05)。Ki-67的表达与乳腺癌的组织分化程度、淋巴结转移及ER有关(P均<0.05)，而与患者年龄、肿瘤直径、组织学类型、p53等无关(P均>0.05)。

乳腺癌组织中SGTA和Ki-67的表达呈正相关(r2=0.356，P=0.003)。

组织分化程度、淋巴结转移、Ki-67高表达及SGTA高表达与患者预后有关(P均<0.05)，而与患者年龄、肿瘤直径、ER、PR、HER2及p53无关(P均>0.05)。多因素分析进一步发现，SGTA和Ki-67影响乳腺癌术后生存时间的危险系数分别为3.303、2.468(P均<0.05)。SGTA高表达者与低表达者的OS分别为51.8月、74.6月,二者比较，P<0.05。 乳腺癌患者OS比较见图1。

表1 SGTA 及Ki-67 的表达与乳腺癌临床病理参数的关系

图1 90例乳腺癌患者生存曲线

3 讨论

在我国乳腺癌已经成为女性恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一[10]。乳腺癌早期诊断率的提高和女性患者生存和预后息息相关。目前临床上有特异性能提高确诊率及改善治疗预后相关的靶向分子极少，虽然近年来乳腺癌的诊断方法有所改善，但早期乳腺癌患者诊断率依然较低，预后仍然很差[11]。

SGT最初被鉴定为病毒蛋白的结合蛋白，通过不同的结构域广泛参与细胞的各种生物进程，进一步产生相互作用。研究发现SGTA为其家族成员，它能够参与激素受体或其他途径蛋白相互作用，如可以与Bag-6/Bat-3等蛋白相互作用并且减少其蛋白水平，从而导致细胞有丝分裂停滞在早中期，进而凋亡[9]。SGTA作为SGT家族中的重要成员，它可以作为雄激素受体共同伴侣之一，在细胞质中，通过维持雄激素受体来限制相关信号通路[16]，参与某些细胞的发展进程[6，12]。SGTA称为有丝分裂触发因子[8]，可能参与肿瘤的进展和转移[13,14]，因而研究其在乳腺癌中的发生发展具有重要的意义。本文通过分析乳腺癌中SGTA表达，探讨其与乳腺癌相关参数及患者预后可能存在的关联。通过免疫组化方法发现SGTA在乳腺癌组织与邻近癌旁组织中的表达有显著性的差异。

Ki-67已被证实是肿瘤细胞增殖活性的标记物[15,16]，Ki-67在乳腺癌组织与邻近癌旁组织中的表达也有显著性的差异，结果提示SGTA与Ki-67的高增值活性可能与乳腺癌的发生发展存在关联，SGTA过度表达可能代表乳腺癌发展的一个重要机制[17,18]。 本研究评估了患者SGTA与Ki-67的表达与临床病理参数之间的关系，结果表明，SGTA与Ki-67表达与组织学分级、ER、淋巴转移与否有关，患者组织学分级越差更容易显示出高活性的SGTA。相关性分析结果显示乳腺癌组织中SGTA的表达与Ki-67呈正相关，提示SGTA可能与肿瘤的增殖有关，SGTA可能通过调控乳腺癌组织中Ki-67表达或介导它们之间的某种通路发生作用。临床病理参数与生存状况的关系研究表明，组织分化程度，淋巴结转移，Ki-67高表达及SGTA高表达与患者预后相关，且SGTA和Ki-67的危险系数分别达到3.303、2.468，SGTA高表达乳腺癌患者OS低于SGTA低表达者。提示SGTA和Ki-67对乳腺癌的侵润转移有重要的作用。

综上所述，乳腺癌组织中SGTA高表达，SGTA参与了乳腺癌的发生、发展。SGTA是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。SGTA可能成为乳腺癌一个新的靶向检测指标，但其具体作用机制以及对患者预后的影响尚需进一步临床验证。

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