ELISA对猪尿中沙丁胺醇的测定效果

李建鲲，王 彬，俞成山，刘冬梅

（1.昌吉回族自治州畜产品质量检测中心，新疆 昌吉 831100；2.阜康市动物卫生监督所，新疆 阜康 831500；3.木垒县动物疾控中心，新疆 木垒 831900）

沙丁胺醇（Salbutamol，Sal）是一种苯酚胺类β-肾上腺素兴奋剂类药物，可以促进脂肪降解和蛋白质合成，具有一定的促生长作用，在畜牧养殖中能够提高饲料转化率和瘦肉率，但是沙丁胺醇易在畜禽体内蓄积，会影响甚至危害人们健康，我国农业部2002年发布公告，规定沙丁胺醇等6种β2-肾上腺素受体激动剂兽药禁用，并且在所有食用动物的可食组织中不得检出。

1 材料和方法

1.1 试剂

1.1.1 酶联免疫试剂盒（KA06204H）北京勤邦生物技术公司。

1.1.2 水为符合GB/T 6682规定的二级水。

1.2 仪器设备

（1）酶标分析仪 318C+ 上海沛欧分析仪器

（2）涡旋仪 IKA MS3 basic 德国

（3）离心机 2-16A TOMOS

（4）电热恒温培养箱 DHP-360 永光明医疗仪器厂

1.3 试剂配制

洗涤工作液：用去离子水将20×浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释（1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水）用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃（39.2°F）环境可保存一个月。

1.4 样品制备

取适量新鲜、清亮空白或供试猪尿（如猪尿浑浊必须通过过滤或 3000g以上，室温（20～25℃/68～77°F）离心 10min直至清亮），暂不使用的样本应于-20℃（-4°F）冷冻保存。稀释系数：1

1.5 测定（20～25℃条件下进行操作）

1.5.1 将所需试剂和供试样品回升至室温20～25℃。

1.5.2 编号：将所需数量的孔条插入微孔架，对样品和标准品对应的微孔按序编号，每个标准品和样品做两个平行实验，记录标准和样品的位置。

1.5.3 酶结合物工作液配制：将酶结合物浓缩液用酶结合物稀释液按照1：10体积比进行稀释（1份酶结合物浓缩液加入10份酶结合物稀释液）

1.5.4 加标准品/样品和酶标记物工作液：加标准品/样品20μL到对应的微孔中，然后加入酶结合物工作液80μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃（77°F）避光环境中反应30min。

1.5.5 洗板：小心揭开盖膜板，将孔内液体甩干，加入洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤4～5次，每次间隔10s，倒掉板孔内洗涤液，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用的枪头戳破）。

1.5.6 显色：加入底物液A 50μL/孔，再加入底物液B 50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖膜板盖板后置25℃（77°F）避光环境中反应15min。

1.5.7 测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔的OD值。

1.6 数据处理

1.6.1 利用RIDAWIN软件计算供试样品中沙丁胺醇含量。

1.6.2 测得的沙丁胺醇含量使用EXCEL进行数据分析。

2 结果与分析

结果显示，猪尿中1、2、4和8ng/mL 4个不同浓度沙丁胺醇的添加回收率在86.0%～94.5%，精密度在3.9%～11.6%，当沙丁胺醇添加浓度较低时回收率偏低而相对标准偏差偏高，可能是由于在制备供试液时用较大量程加样器（10～100μL）移取少量高浓度标准品时产生误差，建议在实际操作中采用适当量程的加样器移取测试液，尽量减小误差或避免产生误差。从检测的情况来看，检测结果相对可靠、稳定，能够满足基层检测部门初检筛选要求。

表1 猪尿中不同浓度沙丁胺醇的添加回收率

3 结论与讨论

从样品采集特性和检测方法的适用性角度来看，猪尿便于酶联免疫试剂盒等快检产品检测，且检测方法操作简单，反应灵敏，结果相对稳定、可靠，因此，建议养殖环节基层检测部门采用ELISA法对猪尿进行初检筛选，如此不仅可以提高检测工作效率，同时也会对违法使用沙丁胺醇行为起到一定的震慑作用。