染色法快速检测面粉中虫卵技术研究

◎ 庄义捷

（清远市粮食储备库，广东 清远 511500）

面粉是麦类粮食的主要产品及重要中间产品，其加工、检测、储藏是关系民生发展的重要事务。面粉的检测与储藏并没有相应较为完善成熟的方法，以达到高效经济。在面粉的进出口贸易中，面粉中昆虫虫卵的检测是一项判断面粉质量好坏的指标，建立一种快速检测面粉中昆虫虫卵含量的方法是面粉产业中亟待解决的重要问题[1-2]，本课题对染色法快速检测面粉中虫卵进行了深入研究。

1 材料与方法

1.1 供试虫卵

选取面粉中常见害虫赤拟谷盗作为虫卵来源，文献和实践证明赤拟谷盗虫卵不能通过80#筛子。选用单一面粉作为饲料，面粉先经过80#筛子，筛去大于80#筛孔的面粉或面团。挑选体表较为干净的赤拟谷盗进行饲养。经过24 h就可以进行虫卵采集。收集后暂存于培养皿中，待用。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 主要仪器

本研究所用的主要仪器名称、型号和生产厂家见表1。

表1 主要仪器表

1.2.2 主要试剂

本研究所利用的主要试剂名称、型号和生产厂家见表2。

表2 主要试剂表

1.2.3 试剂的配制

硫酸（1∶19）：取5 mL浓硫酸溶于95 mL蒸馏水中。置于玻璃瓶中保存。

0.1%溴甲酚绿：称取溴甲酚绿0.1 g，溶于含有1.45 mL 0.1 mol/L氢氧化钠溶液的蒸馏水溶剂中。置于棕色细口瓶中保存。

0.05%酸性品红：称取0.05 g酸性品红，溶于99.95 mL蒸馏水中。置于棕色细口瓶中保存。

1.3 方法

1.3.1 虫卵的采集和含虫卵的测试样品的准备

人工饲养赤拟谷盗来获取同一时间段产下的虫卵，经筛选后收集到专用容器中，待用。

FDA规定面粉虫体碎片禁售水平为50 g面粉中75个昆虫碎片，因此将7、14、28、56、112粒虫卵分别加入5 g面粉中，作为待检验样品。分析天平称取5 g的面粉放在自封袋中，共称取15个样品，然后分别查取一定数量的害虫虫卵放在称取好的5 g的面粉试样中，混合均匀，每个虫卵浓度准备3个样品，共需要准备15个样品。

1.3.2 试验方法

准确称取5 g小麦粉，并在开始分别加入7、14、28、56、112粒赤拟谷盗的虫卵。完全混合后的面粉样品用80目筛网筛选并收集面粉残留物与虫卵。面粉颗粒包裹的虫卵转移到250 mL烧杯中，并用2～3 mL乙醇润湿，加入5 mL稀硫酸（1∶19）后盖上一培养皿，并保持10 min的蒸气浴。产物通过布氏漏斗低压抽滤。对于每一组，在无吸力的情况下加入10 mL染色剂。2～3 min后，通过轻微的吸力将染色剂透过滤纸。后将滤纸转移到培养皿中，用双目显微镜观察，统计卵数。计算虫卵检测率。

2 结果与分析

经过染色试验后，溴甲酚绿将虫卵染成黄橙色，面粉染成褐绿色，如图1所示。酸性品红将虫卵与面粉染成粉红色，虫卵外观近似透明，面粉相对颜色更深，如图2所示。

图1 溴甲酚绿染色效果图

图2 酸性品红染色效果图

溴甲酚绿染色结果见表3，从表3可以看出，经过染色试验后，检测发现的虫卵数与实际虫卵数有一定差距，均值约为75%。

表3 溴甲酚绿染色结果表

表4 酸性品红染色结果表

3 讨论

两种染色剂效果接近，但都存在一定误差。造成误差的原因可能包括：①虫卵在筛选过程中，卡在网眼或缝隙中，造成试验结果偏低。②虫卵经过稀硫酸的浸泡，并经过10 min的蒸气浴，有部分虫卵破裂，造成结果偏低。③虫卵经过低压抽滤过程，部分虫卵破裂，造成试验结果偏低。

染色法可将虫卵染色，便于进行对比统计，但因为需要经过筛网过滤，对于虫卵直径有较高要求；对于已知害虫种类的，可以精确筛网尺寸，但对于不明确害虫种类的情况下，筛网尺寸不好确定，进而导致检测进行困难或检测结果有较大偏差[3]。染色法可以用于面粉中常见害虫虫卵的检测，但难以普及至全部害虫虫卵的检测。

4 结论

染色法可以将虫卵与面粉染成不同的颜色：溴甲酚绿将虫卵染成黄橙色，面粉染成褐绿色；酸性品红将虫卵染成粉红色，面粉染成深红色。两种染色剂检测结果相近，都具有一定偏差；染色法对于已知害虫种类的检测可以有较为理想的结果，但对于不明确害虫种类的虫卵检测可能因为筛网、虫卵直径偏差导致检测结果有较大偏差。染色法可以用于面粉中常见害虫虫卵的检测，但难以普及至全部害虫虫卵的检测。

[1]吴亚萍.面粉中常见的虫害及潜在虫害的检测[J].现代面粉工业，2010（1）：53-55.

[2]张茂海.浅析全自动酶联免疫分析系统的发展趋势[J].国际检验医学杂志，2011，32（14）：1655-1656.

[3]朱光辉，叶恭银，胡 萃.用磷钨酸还原法测定棕尾别麻蝇幼虫尿酸[C]//城市昆虫学进展—全国第六届城市昆虫学术讨论会论文集，2001.