血清颗粒溶素对鼻咽癌的诊断价值研究

高娟 彭裕萍 张昌明 柳林整 申江江

我国南部地区鼻咽癌（nasopharyngeal,NPC）发病率相对较高，且由于早期NPC缺乏特异性临床表现，与鼻咽炎（nasopharyngitis，NPT）表现相似，常常误诊[1]。目前临床诊断NPC主要依靠病理学和CT检查，但是病理学检查需要有创的组织活检，CT检查在NPC早期无明显特异性[2]。因此，NPC的早期诊断难度较大。NPC的发病与EB病毒感染有关，因此检测血清抗EB病毒衣壳免疫球蛋白A（EBV-VCA-IgA）[3]和EB病毒核糖核酸（EBV DNA）[4]等生物标志物可用于疑似NPC患者的早期初步筛查。颗粒溶素（Granulysin，GNLY）是一种促细胞溶解颗粒蛋白，主要由细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞分泌[5]。GNLY主要发挥细胞毒性（促进细胞溶解）和促炎作用，可参与机体的排异反应，具有抗菌性和抗肿瘤性[6]。有研究认为GNLY可作为病毒感染的生物标志物[7]，也有研究指出肿瘤（乳腺癌[8]和胃癌[9]）患者存在GNLY异常表达的情况。基于此，本研究综合分析NPC患者血清GNLY水平的变化，探讨GNLY对NPC的诊断价值，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 连续纳入2016年1月至2017年3月榆林市第一医院收治住院的NPC患者109例（NPC组），均经病理学检查确诊，纳入标准：（1）年龄18～80 岁；（2）无合并其它恶性肿瘤；（3）非孕产妇；（4）无严重肝肾功能不全；（5）无合并其他部位感染。另择同期收治的NPT患者68例设为NPT组，包括扁桃体炎26例、急慢性咽炎25例、鼻前庭囊肿17例；非NPC、非NPT的体检者60例作为对照组。3组受检者一般资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。本研究经医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

表1 3组患者一般资料比较

1.2 血清NPC标志物、GNLY水平检测 3组患者均空腹抽取肘静脉血约12ml，于4℃下离心20min（3 000r/min），留取上清液置于-80℃冰箱中冻存。选择血清EBV DNA和EBV-VCA-IgA作为NPC标志物，其中EBV DNA采用荧光定量PCR法检测，EBV-VCA-IgA、GNLY采用酶联免疫吸附试验检测。EBV-VCA-IgA滴度超过1∶40为阳性，EBV DNA滴度超过1×103拷贝/ml为阳性。

1.3 观察指标 观察并比较3组受检者血清NPC标志物（EBV DNA、EBV-VCA-IgA）阳性率及GNLY水平；比较不同临床特征NPC患者血清GNLY水平；比较血清GNLY、EBV-VCA-IgA对鼻咽部病变患者NPC的诊断价值。

1.4 统计学处理 应用SPSS 22.0统计软件；计量资料以表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验；计数资料以频数和构成比表示，组间比较采用χ2检验；采用ROC曲线分析血清GNLY、VCAIgA对鼻咽部病变患者NPC的诊断价值；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组受检者血清NPC标志物阳性率、GNLY水平比较 见表2。

由表2可见，3组受检者血清NPC标志物阳性率、GNLY水平比较均有统计学差异（均P＜0.05）。NPC组患者血清EBV DNA阳性率、EBV-VCA-IgA阳性率均高于NPT组与对照组（均P＜0.05），血清GNLY水平低于NPT组与对照组（P＜0.05）。NPT组患者血清EBVVCA-IgA阳性率、血清GNLY水平均高于对照组（均P＜0.05）。

表2 3组受检者血清NPC标志物阳性率、GNLY水平比较

2.2 不同临床特征NPC患者血清GNLY水平比较 见表3。

由表3可见，血清GNLY水平与NPC患者性别、年龄和有无远处转移均无明显关系（均P＞0.05）。TNM分期Ⅳ期患者血清GNLY水平明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者（均 P＜0.05），T3～T4期患者高于 T1～T2期患者 （P＜0.05），N3期患者高于 N0期患者（P＜0.05）。

2.3 血清GNLY、EBV-VCA-IgA对鼻咽部病变患者NPC的诊断价值比较 见表4。

由表4可见，血清GNLY水平对鼻咽部病变患者NPC的诊断价值高于EBV-VCA-IgA。以血清GNLY水平≤9.64ng/ml为界时，血清GNLY水平对鼻咽部病变患者NPC的诊断灵敏度为0.852，特异度为0.797。

表3 不同临床特征NPC患者血清GNLY水平比较（n=109）

表4 血清GNLY、EBV-VCA-IgA对鼻咽部病变患者NPC的诊断价值比较（n=177）

3 讨论

GNLY是一种重要的肿瘤免疫细胞因子，其水平可反映肿瘤患者的免疫应答状态。GNLY参与细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞对于肿瘤细胞的免疫应答反应[10]。有研究发现，肿瘤患者血清GNLY水平明显下降，NK细胞功能抑制和数量减少，提示患者处于免疫抑制状态[11]。本研究选择NPC患者为研究对象，结果发现NPC组患者血清GNLY水平明显低于NPT组与对照组。

本研究结果亦发现，血清GNLY水平对鼻咽部病变患者NPC的诊断价值高于EBV-VCA-IgA。以血清GNLY水平≤9.64ng/ml为界时，血清GNLY水平对鼻咽部病变患者NPC的诊断灵敏度为0.852，特异度为0.797。这提示，对于鼻咽部病变患者，血清GNLY水平检测有助于区别良恶性病变。GNLY作为细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞细胞质颗粒中的天然抗菌肽，早期研究多集中于GNLY的杀菌作用，如结合杆菌等[12]，而后逐步发现GNLY具有抗肿瘤作用。如Alwasaby等[13]学者发现重组GNLY可以促进体外实验中的肝癌细胞凋亡，而体内实验发现重组GNLY可以明显提高肿瘤组织中浸润的NK细胞数量，激活一系列凋亡通路，抑制肿瘤细胞过度增殖。本研究结果提示，NPC患者血清GNLY水平下降，肿瘤免疫应答能力减弱。

本研究还发现，虽然NPC组患者血清GNLY水平低于对照组，而随着TMN分期的不断加重，NPC组患者的血清GNLY水平也是不断升高的。通过对TMN分期单项指标分析发现，T3～T4期患者高于 T1～T2期患者（P＜0.05），N3期患者高于 N0期患者（P＜0.05）。这提示 NPC患者血清GNLY水平与肿瘤浸润程度和淋巴结转移存在一定关系。进展期的NPC患者相对较高水平的血清GNLY可能与肿瘤后期补体途径的不断激活NK细胞有关，这提示患者体内保护性的抗肿瘤免疫反应程度逐步提高。在NPC的病理生理过程中，体内EBV相关细胞毒性T淋巴细胞和肿瘤相关细胞毒性T淋巴细胞水平被抑制，但是NK细胞被补体途径激活[14]。因此可以猜测NPC患者体内随着病情进展逐步升高的血清GNLY水平主要来源于NK细胞，但尚需进一步实验研究证实。

综上所述，NPC患者血清GNLY水平异常降低，血清GNLY水平检测有助于判断鼻咽部的良恶性病变。