蒲公英水提物对断奶仔猪免疫功能和血清抗氧化功能的效应试验

王 留，王向国，柴西超

（商丘职业技术学院，河南 商丘 476100）

蒲公英为多年生菊科草本植物，其干燥全草常作为一种传统的临床常用中草药，具有清热、利尿、消肿、解毒等作用。蒲公英化学成分复杂，主要含有总黄酮、绿原酸、咖啡酸、生物碱、多糖等化合物，具有抗菌消炎、免疫调节、清除自由基、抗氧化、抗应激、抗肿瘤等多种生物学功能[1-5]。蒲公英在我国有广泛的地域分布，在东北、华北、华中、华东地区有丰富的原料来源，是一种高效无毒、价格低廉的绿色饲料添加剂，具有很高的研究开发和推广应用价值。本试验在断奶仔猪饮水中分别添加3 g/L、6 g/L蒲公英水提物，通过测定断奶仔猪血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）以及血清总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量，评价蒲公英水提物对断奶仔猪免疫功能和抗氧化功能的影响，为蒲公英水提物在养猪生产应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

真空采血管；台式冷冻离心机，湖南赫西仪器装备有限公司；722型可见光分光光度计，上海科研仪器有限公司；酶标仪，上海拜格科技公司。总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）检测试剂盒，购于南京建成生物工程公司。白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒，购于上海蓝基生物科技有限公司。蒲公英水提物，商丘职业技术学院动物药理实验室制备，详见参考文献[6]。

1.2 试验分组与处理

30头35日龄健康、体重相近的杜长大三元杂种仔猪随机分成空白对照组、试验1组、试验2组，每组10头，各组均饲喂基础饲粮。试验期间，试验1、2组饮水中分别添加终浓度为3 g/L、6 g/L的蒲公英水提物，自由饮水；空白对照组正常饮水。试验期35 d。试验于2018年7月10日至8月14日在商丘宏鑫养猪场进行，断奶仔猪采用高架保育床饲养，按该场年度保健计划与免疫程序进行保健与免疫。

1.3 样品采集与处理

试验结束时，用不含抗凝剂的真空采血管每头猪耳静脉采血5 mL，室温静置3 h自然凝固，3 000 r/min离心5 min分离血清，-20℃冻存，用于血清免疫因子和抗氧化功能指标的测定。

1.4 指标检测

1.4.1 血清免疫因子检测 血清IL-1β、IL-2、IL-6采用ELISA检测试剂盒测定，操作过程严格按照试剂盒说明书进行。

1.4.2 血清抗氧化功能指标检测 T-AOC采用化学比色法测定，GSH-Px活性采用二硫代二硝基苯甲酸法测定，超氧化物SOD活性采用化学比色法测定，CAT活性采用紫外吸收法测定，MDA含量采用硫代巴比妥法测定，操作过程严格按照检测试剂盒说明书进行。

1.5 数据处理

试验采用SPSS 20.0统计分析软件进行单因素方差分析，用LSD法进行多重比较，试验数据用平均值±标准差表示，以P＜0.05作为差异显著性判定标准。

2 结果

2.1 蒲公英水提物对断奶仔猪血清免疫因子的影响

血清免疫因子检测结果见表1，试验结果显示，饮水中添加蒲公英水提物的断奶仔猪血清中免疫因子含量与空白对照组相比呈整体升高趋势。试验1、2组血清中IL-1β和IL-6含量与空白对照组相比差异显著（P＜0.05），试验1组血清中IL-2含量与空白对照组相比差异不显著（P＞0.05），试验2组血清中IL-2含量与空白对照组相比差异显著（P＜0.05）。

表1 蒲公英水提物对断奶仔猪血清免疫因子的影响

2.2 蒲公英水提物对断奶仔猪抗氧化功能的影响

蒲公英水提物对断奶仔猪抗氧化功能指标的影响见表2。饮水中添加蒲公英水提物能够相对提高断奶仔猪血清中 T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT 活性和降低血清MDA含量。试验1、2组血清中GSH-Px活性和MDA含量与空白对照组相比差异显著（P＜0.05），试验 1组血清中 T-AOC、SOD、CAT 活性与空白对照组相比差异不显著（P＞0.05），试验2组血清中T-AOC、SOD、CAT活性与空白对照组相比差异显著（P＜0.05）。

表2 蒲公英水提物对断奶仔猪抗氧化功能指标的影响

3 讨论分析

3.1 蒲公英水提物对断奶仔猪免疫功能的影响

动物的免疫功能依赖于动物机体免疫系统内免疫细胞、免疫因子的正常运转。白细胞介素是机体内一类具有免疫调节功能的免疫因子，参与机体免疫细胞之间的信息传递，对机体的特异性免疫应答发挥重要的调控作用[7]。IL-1又称为淋巴细胞刺激因子，主要由活化的单核-巨噬细胞产生，有IL-1α和IL-1β两种分子形式。局部低浓度的IL-1β主要发挥免疫调节作用。IL-1β与抗原协同作用促进CD4+T细胞活化和白细胞介素-2受体（IL-2R）表达，促进B细胞生长分化和抗体分泌，促进单核-巨噬细胞等抗原提呈细胞的抗原递呈能力，与IL-2或干扰素协同增强自然杀伤细胞（NK细胞）活性[8]。IL-2又称T细胞生长因子，主要由活化的T细胞产生，以自分泌和旁分泌方式发挥免疫调节效应。IL-2通过自分泌途径促进CD4+T细胞生长，通过旁分泌途径促进CD8+T细胞生长。IL-2刺激NK细胞增殖，增强NK细胞杀伤活性及产生细胞因子，诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（LAK细胞）产生；促进B细胞增殖和分泌抗体；激活巨噬细胞[8]。IL-6由活化的T细胞、B细胞、单核-巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞以及成纤维细胞等多种细胞所产生。IL-6能够刺激B细胞活化增殖，分泌抗体；刺激T细胞增殖及细胞毒性T细胞（CTL）活化；刺激肝细胞合成急性期蛋白，参与炎症反应；促进血细胞发育[8]。综上所述，IL-1β、IL-2、IL-6不仅参与机体的免疫应答反应，同时对免疫应答的过程起着重要的调控作用。

蒲公英含有的多糖类物质具有调节免疫的功能，吴小丽等研究显示蒲公英提取物能够提高小鼠的免疫功能[9]，王留等试验表明蒲公英水提物能够调整肉仔鸡体液免疫和细胞免疫，提高机体的整体免疫功能[6]。本试验通过检测断奶仔猪血清中IL-1β、IL-2、IL-6等免疫因子的水平评价蒲公英水提物对断奶仔猪免疫功能的影响，结果显示，与空白对照组相比，饮水中添加3～6 g/L蒲公英水提物能够显著提高血清中IL-1β、IL-2、IL-6等免疫因子的水平，说明蒲公英水提物能够调节断奶仔猪的免疫状态，提高机体的整体免疫功能。

3.2 蒲公英水提物对断奶仔猪抗氧化功能的影响

T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT 是机体内主要的抗氧化酶类，其含量的变化反映机体抗氧化功能的改变，常作为评价机体抗氧化功能的临床检测指标。蒲公英含有丰富的绿原酸、黄酮、多糖类化学物质，绿原酸是一种缩酚酸，属酚类化合物，可以清除体内自由基，从而减轻机体的氧化应激损伤。钟洁等研究发现，蒲公英糖蛋白对羟自由基（-OH）具有很好的清除能力，并且清除作用与浓度呈正相关[10]。王珅等试验显示，肉仔鸡饮水中添加5 g/L蒲公英多糖能够显著增加血清SOD和降低MDA含量[11]。本试验通过检测断奶仔猪血清中 T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT、MDA等指标，评价蒲公英水提物对断奶仔猪抗氧化功能的影响，结果表明，与空白对照组相比，饮水中添加3～6 g/L蒲公英水提物能够显著提高断奶仔猪血清中 T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活性，降低血清MDA含量，说明蒲公英水提物能够调整断奶仔猪的氧化-抗氧化系统，提高机体的整体免疫功能。