Meta分析法研究亚麻籽对蛋黄中多不饱和脂肪酸的影响

岳巧娴， 黄晨轩， Chola Cosmas， 许颖珏，

锡建中1， 陈 辉1， 许利军3， 王德贺1， 郝二英1， 周荣艳1*

（1．河北农业大学动物科技学院，河北保定 071000；2．河北农业大学商学院，河北保定 071000；3．保定市畜牧工作站，河北保定 071000）

亚麻籽、鱼油、藻类等是畜禽产品中n-3多不饱和脂肪酸（PUFA）的主要饲料添加原料（Fraeye等，2012），但鱼油的稳定性差，长期使用会使动物性产品产生腥臭味，而亚麻籽具有较好的稳定性（赵丽娜等，2007）。沈勇等（2012）试验证实蛋鸡日粮中添加粉碎亚麻籽后能改变蛋黄中n-3系列多不饱和脂肪酸的组成，使蛋黄中DHA含量升高，EPA含量降低。吴灵英等（2004）研究表明蛋鸡日粮中添加亚麻籽能显著提高鸡蛋中n-3PUFA的含量，可用于生产富含DHA为主的鸡蛋。本研究通过对已发表的文献进行Meta分析，综合判断蛋鸡日粮中添加亚麻籽对蛋黄中多不饱和脂肪酸富集水平的影响，为生产实践中亚麻籽添加剂量提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 文献来源 本研究通过在中国知网、维普、万方、谷歌学术、Pubmed等数据库检索，检索关键词有亚麻籽（flaxseed）、蛋黄（egg yolks）、多不饱和脂肪酸 （polyunsaturated fatty acid）、荟萃分析（meta analysis）等，并查阅相关的文献综述及其参考文献，以期获得更多的信息。

1.2 纳入标准 （1）研究设计为随机对照研究；（2）研究对象为产蛋鸡；（3）有研究开展或发表的年限；（4）干预措施为在蛋鸡日粮中补充亚麻籽，且补充剂量为5%、10%及15%；（5）各研究对样本大小有明确规定；（6）蛋黄多不饱和脂肪酸含量的指标为 LA、ALA、AA、DHA、总 n-3PUFA、总 n-6PUFA的含量和n-6PUFA/n-3PUFA的比例，并且在研究中给出了试验指标的数值或均值以及标准差或标准误。

1.3 排除标准 （1）亚麻籽与其他富含亚麻酸的物质联合使用；（2）综述文献、无对照文献和重复报告的文献；（3）数据不全或数据无法利用的文献；（4）无法提供均值和标准差；（5）统计方法错误且无法修正。

1.4 统计学分析 利用Stata14.0软件的Meta-Analysis进行统计分析。在进行Meta分析前，对数据进行异质性检验，用I2值反映多个研究之间的异质性程度。当多个研究的异质性检验I2＜50%、P＞0.05时，则说明各研究间有同质性，使用固定效应模型；若多个研究的异质性检验I2＞50%、P＜0.05时则存在异质性，使用随机应模型。本研究为计量资料，计算标准均数差（SMD）及95%置信区间 （95%CI）； 用 IBM SPSS Statistics 21.0混合线性模型来分析各研究间的异质性来源 ， 分 别 以 ALA、DHA、AA、LA、n-3PUFA、n-6PUFA以及n-6PUFA/n-3PUFA的比例为因变量，以亚麻籽添加剂量和蛋鸡产蛋周龄为固定因子，以蛋鸡品种和亚麻籽添加形式为随机因子，以试验周期为协变量，结果以“均值±标准误”表示，再对各研究进行敏感性分析。

2 结果与分析

2.1 纳入文献的特征 数据库里共搜集到48篇相关文章，其中英文文献20篇，中文文献28篇。按上述“1.2”纳入和“1.3”排除标准筛选后，共有8篇文献21项随机对照研究纳入本次Meta分析（表1），其中英文文献4篇，中文文献4篇。被纳入的文献均发表于1995—2017年，互相之间没有重复。

2.2 M eta分析结果

2.2.1 添加亚麻籽对蛋黄中ALA、DHA、LA和总n-3PUFA的影响 共有14项研究报告了添加亚麻籽对蛋黄中ALA的影响，但其存在高度的异质性（I2=98.7%），因此用随机效应模型进行合并分析。由图1a可以看出，合并SMD值及95%CI为17.51（13.34，21.69），P ＜ 0.05，表明蛋鸡日粮中添加亚麻籽显著提高了蛋黄中亚麻酸的含量。

共有14项研究报告了添加亚麻籽对蛋黄中DHA的影响，用随机效应模型合并分析 （I2=95.6%），由图1b可以看出，合并SMD值及95%CI为 5.39（4.22，6.55），P ＜ 0.05，表明蛋黄中 DHA 的含量在蛋鸡日粮中添加亚麻籽组显著高于对照组。

表1 纳入Meta分析文献

共有10项研究报告了添加亚麻籽对蛋黄中LA含量的影响，由图1c可知，各研究间异质性明显（I2=94.5%），其合并SMD值及 95%CI为 0.42（-0.39，1.23），无统计学差异（P ＞ 0.05），表明蛋鸡日粮中添加亚麻籽未能提高蛋黄中LA含量。

共有19项研究指出了日粮中添加亚麻籽对蛋黄中总n-3PUFA含量的影响，由图1d可知，各研究间异质性明显（I2=98.8%），其合并SMD值及95%CI为 8.86（7.59，10.14），有统计学差异（P ＜0.05），表明日粮中添加亚麻籽显著提高了蛋黄中总n-3PUFA含量。

2.2.2 添加亚麻籽对蛋黄中AA、总n-6PUFA和n-6PUFA/n-3PUFA的影响 共有11项研究报告了添加亚麻籽的日粮相对于普通日粮的蛋黄中的AA的影响，由图2a知，各研究间异质性明显（I2=94.9%），其合并 SMD 值及 95%CI为-1.62（-2.54，-0.70），有统计学差异（P ＜ 0.05），表明蛋鸡日粮中添加亚麻籽显著降低了蛋黄中AA含量。

共有12项研究报告说明日粮中添加亚麻籽对总n-6PUFA含量的影响，由图2c可知，各研究间异质性明显（I2=97.3%），其合并SMD值及95%CI 为-0.44 （-0.97，0.08）， 无统计学差异 （P=0.098），表明蛋鸡日粮中添加亚麻籽未能降低蛋黄中总n-6PUFA含量。

共有12项研究指出日粮中添加亚麻籽对蛋黄中n-6PUFA/n-3PUFA的影响。由图2c可以看出，各研究间异质性明显（I2=99.0%），其合并SMD值及 95%CI为-5.22（-6.62，-3.82），有统计学差异（P＜0.05），表明蛋鸡日粮中添加亚麻籽显著降低了蛋黄中n-6PUFA/n-3PUFA。

图1 日粮中添加亚麻籽效应的标准化均值差和95%置信区间森林图

图2 日粮中添加亚麻籽效应的标准化均值差和95%置信区间森林图

2.3 异质性来源分析 混合线性模型的结果如表2所示，不同指标的异质性来源不同。其中DHA和n-3PUFA的主要异质性来源为亚麻籽的添加剂量，DHA随亚麻籽剂量的增加而显著升高（P＜0.05），而蛋黄中n-3PUFA的富集在亚麻籽添加15%时为最优，且显著高于5%的添加量（P＜0.05）。 ALA、LA、AA 和 n-6PUFA/n-3PUFA 的异质性来源为亚麻籽添加剂量和蛋鸡产蛋周龄，其中ALA的富集在添加量为10%时显著高于5%水平的添加量（P＜0.05），与15%添加量的差异不显著（P＞0.05），蛋鸡产蛋周龄为24周时ALA富集量最多 （P＜0.05）；LA的富集在添加量为5%时显著低于15%（P＜0.05），但与10%添加量的差异不显著（P＞0.05），蛋鸡产蛋周龄在23周时显著低于其他几个时期 （P＜0.05）；AA的含量为5%和15%添加量的显著低于10%的添加量 （P＜0.05），22周和23周的富集水平差异不显著 （P＞0.05），但显著低于21周和24周龄的蛋鸡；n-6PUFA/n-3PUFA的比例10%和15%的添加量显著低于5%的添加量，而10%和15%的差异不显著（P＞0.05），21周龄时富集水平显著低于24周 （P＜0.05），但与23周无显著差异（P＞0.05）。n-6PUFA异质性来源于添加剂量和蛋鸡产蛋周龄都无关。

2.4 敏感性分析 为了观察权重最大的研究对合并SMD的影响，分别去除 ALA、DHA、LA、AA、n-3PUFA、n-6PUFA、n-6PUFA/n-3PUFA 中的权重最大者后，SMD及95%CI分别为18.93（14.41，23.44）、5.77（4.46，7.09）、0.56（-0.30， 1.42）、-1.52 （-2.53， -0.50）、9.63 （8.16，11.11）、 -0.45（-1.05，0.15）和-5.61（-7.18，-4.03）。 去除权重最大者后，各指标的合并SMD没有明显变化，说明各个指标的敏感性都较低。

表2 异质性来源分析

3 讨论

在目前的亚麻籽影响蛋黄中多不饱和脂肪酸富集的研究中，可能由于各项研究的研究样本数、生长阶段、生长环境、饲料营养水平等不同导致研究结果不一致。本研究对以往的研究数据进行了总体Meta分析，结果表明：ALA、DHA和n-3PUFA等富集水平在添加亚麻籽的条件下都有显著提高，AA和n-6PUFA/n-3PUFA水平显著降低，而n-6PUFA和LA的水平在试验组和对照组之间没有显著差异。

由于亚麻籽中富含丰富的α-亚麻酸，沉积在体内的α-亚麻酸在一系列酶的作用下，经碳链延长和去饱和作用转化成DHA。Ebeid等（2008）证明提高日粮中n-3PUFA的含量能显著提高蛋黄中n-3PUFA的含量，并显著降低n-6PUFA的含量。Bean等（2002）发现饲喂含亚麻籽的日粮能显著提高蛋黄沉积DHA和ALA的能力，而邓波等（2017）的试验同样表明，普通日粮中添加10%亚麻籽使蛋黄中DHA和ALA沉积为主，这与本试验的研究结果一致。图1a显示吴灵英等（2004）的试验中ALA的富集水平高于其他研究，可能是由于该研究中添加了针对亚麻籽抗营养因子的添加剂，从而减缓了胶质和生氰糖苷等抗营养因子的作用，提高ALA的富集水平。图1b、d和图2b显示 Asad Sultan 等（2015）研究中，蛋黄中 DHA、n-3PUFA及n-6PUFA的富集水平与其他研究相比差异较为明显，可能是由于该试验添加剔除杂质并晒干的亚麻籽，增加了亚麻籽的添加质量。图2c显示王利华等 （2002）的试验n-6PUFA/n-3PUFA明显低于其他研究，可能原因为该研究基础日粮添加了12%的小麦麸，n-6PUFA/n-3PUFA的初始水平较低。赵丽娜（2008）研究表明在试验前三周，n-3PUFA的富集在饲喂含亚麻籽饲料的前三周呈线性增长，三周以后趋于稳定。沈勇等（2012）同样表明，饲喂含有10%亚麻籽日粮后蛋黄中DHA沉积量呈现迅速提高的趋势，随饲喂时间的延长对DHA的蓄积能力逐渐减弱。吴永保等（2015）试验显示，添加亚麻籽极显著提高了蛋黄中n-3PUFA的含量，极显著降低了n-6PUFA的含量和n-6PUFA/n-3PUFA的比例。Bean等（2003）证明饲粮中添加亚麻籽，产白壳蛋和褐壳蛋的鸡的蛋黄中n-3PUFA水平都显著提高。Asad等（2015）研究表蛋鸡日粮中添加10%亚麻籽，蛋黄中多不饱和脂肪酸的富集水平与添加15%剂量没有差异，但显著高于添加量为5%，与本试验的研究结果一致。本试验结果显示LA、DHA和n-3PUFA的沉积随蛋鸡产蛋周龄的增加而减少，其可能因素为产蛋量与多不饱和脂肪酸的沉积呈反向相关。但孙菡聪等（2009）研究发现，北京油鸡和白来航鸡蛋黄中多不饱和脂肪酸的富集规律为初产期小于产蛋后期，产蛋后期小于产蛋中期，即随着产蛋周龄的增加多不饱和脂肪酸的沉积规律为先升高后降低。这可能是因为本研究中蛋鸡产蛋周龄间隔不明显导致本研究与前人研究结果有偏差。

4 结论

从总体上来说，蛋鸡日粮中添加亚麻籽能提高蛋黄中ALA、DHA和n-3PUFA的富集水平，降低AA和n-6PUFA/n-3PUFA的水平，但蛋黄中富集多不饱和脂肪酸的水平受亚麻籽添加剂量和蛋鸡产蛋周龄的影响，添加10%亚麻籽有利于蛋黄富集n-3PUFA，降低n-6/n-3的比例，产蛋前期的富集水平优于产蛋后期。