淫羊藿多糖对雏鸡抗氧化功能的影响

李星艳，靳录洋，徐小芳，罗 燕，谷新利

(新疆石河子工程职业技术学院，新疆石河子832000)

淫羊藿是我国传统的补益中药，有坚精骨、益精气、补腰膝、强心力等作用。其主要成分是黄酮类和多糖，目前对淫羊藿属植物的研究多集中在黄酮类成分，而对淫羊藿多糖的研究相对较少[4]。本试验从淫羊藿中提取淫羊藿多糖(EPS)，探讨EPS对雏鸡抗氧化作用的影响，以期为研究开发新药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验药物 淫羊藿购自石河子市医药公司。淫羊藿多糖(EPS)由石河子大学动物科技学院中兽医实验室提取，多糖含量为32.30%。试验中注射剂量均指经过换算实际进入雏鸡体内纯多糖的含量。多糖在注射前用蒸馏水溶解，配成溶液，115 ℃ 30 min高压灭菌，备用。

1.2 试验动物 1日龄健康罗曼雏鸡由石河子市养鸡场提供，临床检查健康。用新疆天康饲料厂生产的雏鸡料进行常规饲养，所有鸡只的饲养方法、饲养条件、环境、饲料品质及饲养管理均一致。

1.3 方法 80只罗曼雏鸡随机分为4组，每组20只。1日龄开始用药，Ⅰ组：皮下注射生理盐水0.2 mL/只，连续注射7 d。Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ组：皮下注射浓度分别为12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL的EPS，0.2 mL/只，连续注射7 d。每组随机抽取10只，在试验第7天心脏采血，第14、21、28、35、42天翅静脉采血，所采血液用3.8%柠檬酸钠溶液抗凝。

1.4 检测项目 测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)的活性、丙二醛(MDA) 含量。所有测定均采用南京建成生物技术有限公司生产的试剂盒，按照其说明书进行操作。

1.5 数据处理 数据用SPSS13.0软件统计，以平均数±标准误(Mean±SE)表示，显著性分析采用方差分析和多重比较。

2 结果与分析

2.1 EPS对SOD活性的影响 试验结果如表1所示，皮下注射EPS，多糖组能不同程度的提高血清中SOD的活性，且在试验第7、14、21、28天有不同程度的提高，第35、42天略有降低。与Ⅰ组相比，Ⅱ、Ⅳ组在试验第14、21、35天时差异显著(P<0.05)，第28天时差异极显著(P<0.01)；Ⅲ组在试验第7、42天时差异显著(P<0.05)，第14、21、28、35天时差异极显著(P<0.01)。

表1 不同浓度的EPS对SOD活性的影响 (U/mL)

注：与Ⅰ组相比，同一列数字后*表示差异显著 (P<0.05)，**表示差异极显著 (P<0.01)； 下表同

2.2 EPS对MDA含量的影响 试验结果如表2所示，皮下注射EPS，多糖组能不同程度的降低血清中MDA的含量，且在试验第7、14、21、28天逐渐减小，第35、42天略有升高。与Ⅰ组相比，Ⅱ组在试验第7、14、21、28天时差异显著(P<0.05)；Ⅲ组在试验第7、35、42天时差异显著(P<0.05)，第14、21、28天时差异极显著(P<0.01)；Ⅳ组在试验第14、21、28天时差异显著(P<0.05)。

表2 不同浓度的EPS对MDA含量的影响 (nmol/mL)

2.3 EPS对GSH-Px活性的影响 试验结果如表3所示，皮下注射EPS，多糖组能不同程度的提高血清中GSH-Px的活性，且在试验第7、14、21、28天有不同程度的提高，第35、42天有所下降。与Ⅰ组相比，Ⅱ组在试验第7、14、35天时差异显著(P<0.05)，第21、28天时差异极显著(P<0.01)；Ⅲ组在试验第35、42天时差异显著(P<0.05)，第7、14、21、28天时差异极显著(P<0.01)；Ⅳ组在试验第7、14、21天时差异显著(P<0.05)，第28天时差异极显著(P<0.01)。

表3 不同浓度的EPS对GSH-Px活性的影响 (U/L)

2.4 EPS对CAT活性的影响 试验显示如表4所示，皮下注射EPS，多糖组能不同程度的提高血清中CAT的活性，且在试验第7、14、21、28天都有不同程度的提高，第35、42天逐渐降低。与Ⅰ组相比，Ⅱ、Ⅳ组在试验第7、14、35天时差异显著(P<0.05)，第21、28天时差异极显著(P<0.01)；Ⅲ组在试验第7、42天时差异显著(P<0.05) ，第14、21、28、35天时差异极显著(P<0.01)。

表4 不同浓度的EPS对CAT活性的影响 (U/mL)

2.5 EPS对GR活性的影响 试验结果如表5所示，皮下注射EPS，多糖组能不同程度的提高血清中GR的活性，且在试验第7、14、21、28天都有不同程度的提高，第35、42天逐渐降低。与Ⅰ组相比，Ⅱ组在试验第14、35、42天时差异显著(P<0.05)，第21、28天时差异极显著(P<0.01)；Ⅲ组在试验第7天时差异显著(P<0.05)，第14、21、28、35、42天时差异极显著(P<0.01)；Ⅳ组在试验第14、21、28、35天时差异显著(P<0.05)。

表5 不同浓度的EPS对GR活性的影响 (U/L)

3 讨论

皮下注射不同浓度的EPS后，多糖组血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT的活性均表现升高，在第28天时达到峰值，第35、42天有所下降，而MDA的含量均表现降低，在第28天时降到最低，第35、42天略有升高。本试验结果表明，EPS能明显提高鸡血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT活性，并能明显降低鸡血清中MDA含量。李明[5]、梁亦龙[6]、吴伟[7]等研究也发现多糖具有抗氧化作用，与本试验研究结果一致。提示EPS具有抗氧化活性。

浓度之所以是一个重要因素，是因为清除自由基速率是由其浓度和速率常数决定的。抗氧化剂的活性在生物体内和体外常常有很大区别，造成这种差别的重要原因之一是抗氧化剂和底物在生物膜中所处的微环境与体外不同。决定抗氧化能力的另一主要因素是抗氧化剂引发自由基产生。当抗氧化剂清除自由基时，转换成其他自由基，也可能会发生某些化学反应，这些反应决定了整个体系的抗氧化能力，有时高浓度的抗氧化剂还会起到促氧化作用[8]。本试验结果表明，在试验第7、14、21、28、35、42天时，血清中SOD、GR、GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量均表现为浓度为25 mg/mL的多糖组优于浓度为12.5 mg/mL、50 mg/mL的多糖组。提示EPS的抗氧化活性不是浓度越大越好。 邹佳妤[9]、苏圆圆[10]等研究也发现不同浓度和剂量的多糖抗氧化性能不同，其机理有待进一步研究。

本试验结果表明，皮下注射不同浓度的EPS后，血清中SOD、GSH-Px、CAT的活性以及MDA的含量在第42天时，与对照组相比，浓度为12.5 mg/mL、50 mg/mL组恢复正常，浓度为25 mg/mL组差异显著(P<0.05) ，提示测定血清中SOD、GSH-Px、CAT活性时，浓度为25 mg/mL组应适当延长测定时间；血清中GR的活性在第42天时，与对照组相比，浓度为12.5 mg/mL组差异显著(P<0.05)，25 mg/mL组差异极显著(P<0.01)， 提示测定血清中GR时，浓度为12.5 mg/mL组 、25 mg/mL组应适当延长测定时间。

本试验中，各试验组皮下注射的EPS均为0.2 mL/只，由于浓度不同，即各组所用剂量是不同的。试验结果表明，浓度为25 mg/mL组较浓度为12.5 mg/mL、50 mg/mL组EPS抗氧化活性高，影响因素是剂量还是浓度，有待进一步研究。

4 结论

EPS能使血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)的活性明显升高，使丙二醛(MDA)的含量明显降低。提示淫羊藿多糖作为天然抗氧化剂，具有很好的研究价值与应用前景。