高效液相色谱法在测定食品中胭脂红酸的有效应用

余雪华

摘 要：食品中使用胭脂红酸作为色素的情况较多，为充分有效保障食品安全，需要积极开展胭脂红酸的测定工作，积极使用经过优化的高效液相色谱法，可以实现准确测定的目标。本文主要从利用高效液相色谱法测定食品中胭脂红酸的重要性分析入手，重点按照材料与方法、结果与分析两个方面介绍了高效液相色谱法实际应用的流程和环节，实验证明使用甲醇- 0.02mol/L磷酸二氢铵水溶液作为流动相、使用2mol/L盐酸作为提取溶剂、使用PAX柱实施净化活动，将能够起到良好的测定效果，为有效开展食品中胭脂红酸的测定工作提供一定前提。

关键词：高效液相色谱法;测定;食品;胭脂红酸

胭脂红酸是蒽醌类天然色素，拥有着较为稳定的理化性质，可以被广泛应用在多种行业之中，如医药、食品、化妆品以及纺织品等，是经过FDA允许的可以使用在食品中的天然色素。当前合成色素的使用越来越严格，食品生产过程中对于天然色素的重视程度不断上升，胭脂红酸作为优良安全的天然色素，受到人们的青睐。现阶段多种食品生产及制作过程中都积极使用胭脂红酸这一色素，国内在胭脂红酸的使用方面有着严格的规定，但是在具体检测方法标准方面还存在着一定不足，为有效强化胭脂红酸的测定效果，需要注重有效建立起食品中胭脂红酸的准确测定方法。本文以高效液相色谱法作为重要研究对象，观测其在食品中胭脂红酸的测定情况，希望能够为有效开展胭脂红酸测定工作提供借鉴和参考。

1.利用高效液相色谱法测定食品中胭脂红酸的重要性

合成色素测定过程中有着较为成熟的方法，但是对于胭脂红酸这一天然色素来说，其中拥有着较为复杂的成分，使用常用的分光光度法加以测定，会容易受到多种因素的干扰。因而国内外都在不断开展胭脂红酸测定的研究工作，高效液相色谱法就是其中重要一种，且也得到了较为有效的应用。但是不容忽视的是，食品拥有着十分繁杂的种类，基质也很复杂，现阶段采用的高效液相色谱法在实际测定胭脂红酸方面还有着一定缺陷，包含复杂基质净化效果不佳、前处理操作较为复杂、抗干扰能力较差、会受到人工合成色素的影响等，对此需要注重改进高效液相色谱法应用过程的条件和仪器，针对多种基质净化条件和前处理方法加以对比和分析，获取到更多测定胭脂红酸的基础性数据，便于有效寻找到更好的检测方法，使其达到较高的灵敏度、回收率和简便性。通过科学使用经过优化的高效液相色谱法，将能够针对食品中的胭脂红酸含量加以准确测定，从而有效判断出食品是否保持着安全，进而避免不安全食品流入市场，给人们身心健康造成不良影响。

2.材料与方法

在实际测定食品中胭脂红酸情况的过程中，积极使用高效液相色谱法，可以起到良好效果，为不断改进测量工作，需要在实验中加以验证，选择到更为优良的条件和方法。

2.1仪器

实验活动进行中，选择由睿科仪器有限公司生产的Auto EVA-20Plus全自动平行浓缩仪;由日本岛津生产的LC-2030C高效液相色谱仪;由赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产的SQP电子分析天平;由美国安捷伦生产的Agilent 1260 HPLC-DAD;由日本日立生产的GR22N 离心机;由美国安捷伦Vac Elut 20固相萃取装置等[1]。

2.2试剂

由天津市科密欧化学试剂有限公司生产的磷酸氢二钾、磷酸二氢铵、磷酸氢二钠、磷酸以及乙酸钠，都是属于优级纯的;由赛默飞世尔科技（中国）有限公司生产的乙腈和甲醇，这些属于HPLC级;分别由上海麦克林生化科技有限公司和太仓沪试试剂有限公司生产的乙酸和盐酸，同样都是优级纯的;以及不同规格的萃取柱。

2.3实验方法

2.3.1配置标准溶液

第一，要配置pH6.0乙酸钠缓冲液。这其中需要选择54.6g乙酸钠，将20ml的1mol/L乙酸溶液加入其中，使其达到充分溶解状态之后，加入适量的水，待其稀释到500ml的时候，可以得到乙酸钠缓冲液[2]。第二，配置1.0 mg/ml胭脂红酸储备液，按照要求称取好一定量的胭脂红酸标准品，研究过程中选择11.8mg即可，然后使用事先配置好的pH6.0乙酸钠缓冲液进行溶解，使其达到10ml的时候，将其冷藏并采用避光保存的方式。第三，需要配置好100μg/ml胭脂红酸标准使用液。这其中需要取1.0mg/ml的胭脂红酸储备液，将其使用水进行定容，当其达到10ml状态之后，同样采用冷藏避光的方式加以保存[3]。

2.3.2前处理

做好样品的前处理工作，是开展实验活动的重要基础，这是有效发挥高效液相色谱法测定食品中胭脂红酸的有效手段。

第一，做好提取工作。按照精确到0.01g的要求，准确称取好样品，取5.0g即可，将其放置在三角瓶之中，将20ml的2mol/L盐酸加入到三角瓶中，使其在沸水浴状态中开展30mim的提取工作，为有效强化提取的充分性，需要注重开展5～6次的振摇活动，当其取出来恢复到正常室温之后，就可以把其转移到50ml的离心管之中。在离心操作之后，50ml比色管中将能够容纳全部的上清液，如果样品没有达到既定的离心效果，可以使用玻璃滤纸进行处理[4]。为提升提取效果，需要注重开展重复提取工作，这其中需要再次借助于盐酸和10min的离心操作，转速应该保持在4000r/min。

第二，净化。开展净化活动过程中，首先要使用5ml甲醇活化混合阴离子交换柱，为实现良好的水平衡，需要加入其中5.0ml的水，将5.0ml的提取液加以准确取出，使其达到過柱的状态;其次，针对固相萃取柱进行有效淋洗，使用5.0ml的水就可以达到良好效果，并对其进行抽干处理;再者，需要开展洗脱，将洗脱液加以有效收集，这其中主要使用5 ml的2%磷酸甲醇溶液，在此基础上使用40℃氮加以吹干，将其定容到1.0ml的状态中;最后，将净化处理好的样品加以过滤，并将其放置在样品瓶中，为后续采用高效液相色谱法开展测定工作提供前提。

第三，确定好色谱条件。对于色谱柱来说，主要是采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，其大小为250 mm×4.6 mm。而在具体流动相方面，主要是划分为两个部分，首先，A是甲醇;其次，B是0.02 mol/l磷酸二氢铵。实际开展洗脱操作的过程中，情况如下表1所示。

3.结果与分析

在利用高效液相色谱法开展食品中胭脂红酸测定实验的过程中，能够发现该方法拥有一定优势，但是不容忽视的是，其中还存在着一些需要不断改进和优化的地方。

第一，在优化色谱条件方面。首先，要能够合理选择到流动相。实际测定胭脂红酸的过程中，多数情况下所选择到的流动相都是甲醇-磷酸盐水溶液或者甲醇-甲酸水溶液等，通过实验开展分别研究活动，按照不同观测点开展细致观测活动，能够发现这些流动相都拥有着较好的洗脱效果，在等度洗脱时峰形状态良好，而在梯度洗脱时也具备着小杂峰状态，尤其是甲醇-甲酸水溶液，效果最佳。但是需要注意到，这些流动相实验活动中都属于较低的pH值状态，想要胭脂红酸和常用的食品合成色素达到彻底分离，还存在着一定不足，因而积极使用甲醇- 0.02mol/L磷酸二氢铵水溶液可以起到良好效果。其次，在选择检测波长方面。在测定食品中胭脂红酸的环节中，需要考量到人工合成色素的影响，将检测波长控制在280nm时可以达到最佳效果。

第二，在优化前处理条件方面。需要针对胭脂红酸样品的提取工作加以高度重视，2mol/L盐酸在提取活动进行中，相较于一般常用的提取溶剂，净化效果良好，且能够将杂质带来的干扰降低到最小限度，并针对峰形进行有效改善。同时还需要针对净化条件进行有效优化，研究活动进行中发现积极使用PAX柱实施净化活动，将能够使得基质净化保持着更为平稳的基线状态，且峰形保持着良好的对称效果，出现杂质峰的几率也较低。

4.结束语

高效液相色谱法在测定食品中胭脂红酸方面发挥着积极作用，为有效提升准确测定效果，需要注重开展不断优化和改进工作，重点优化其色谱条件和前处理条件方面。本次研究活动进行中，选择合适的仪器、设备，设定好相应的测定条件，明确高效液相色谱法在实际测定食品中胭脂红酸的应用效果，发现该方法应用环节还存在着一定不足，要能够合理确定好各项优化条件，使用甲醇- 0.02mol/L磷酸二氢铵水溶液作为流动相、使用2mol/L盐酸作为提取溶剂、将检测波长控制在280nm、使用PAX柱实施净化活动，可以起到很大程度的改善作用。在经过优化处理的高效液相色谱法下，将能够准确测定好食品中的胭脂紅酸含量情况，充分保障食品安全与健康。

参考文献：

[1]李灿明， 柏建国， 刘桂果，等. 高效液相色谱法同时测定功能饮料中烟酰胺、咖啡因、维生素B6、柠檬黄、胭脂红和苯甲酸的含量[J]. 化学分析计量， 2017， 26（2）：79-81.

[2]陈营寿，刘唤明，高平，等. 高效液相色谱法测定食品中胭脂红酸[J]. 食品安全质量检测学报， 2018， 9（23）：6221-6228.

[3]李林， 武术兰， 王震. 食品中合成着色剂的测定方法研究——高效液相色谱法[J]. 现代农业科技， 2017（17）：253-254.

[4]薛昆鹏，金雪锋，屠炳芳，等. 改进固相萃取-高效液相色谱法同时测定食品中7种合成着色剂[J]. 食品安全质量检测学报， 2018， 9（23）：165-172.