越鞠丸对功能性消化不良模型大鼠血清MTL 水平及胃窦黏膜NO 表达的影响

徐嘉淦 叶 影 龙惠珍

功能性消化不良（functional dyspepsia，FD）是一种常见的功能紊乱的消化系统疾病。FD 发病机制尚不明确，但随着对FD 研究的不断深入，胃肠动力障碍、胃肠激素水平失调以及脑-肠轴功能失调被认为是其病理生理学基础。2017 年中医诊疗共识，将FD分为五型并对应相应方剂，分别为脾虚气滞证（香砂六君子汤）、肝胃不和证（柴胡疏肝散）、脾胃湿热证（连朴饮）、脾胃虚寒证（理中丸）、寒热错杂证（半夏泻心汤）[1]。越鞠丸出自《丹溪心法》，主要组成为苍术、川芎、焦山栀、神曲、连翘、香附。丹溪治郁所强调的是以调中为主，用越鞠丸以开胃肠三焦之郁，从而使胸膈痞闷、胃脘胀痛、嗳腐吞酸、恶心欲吐、饮食积滞等症消失。本研究通过动物实验，观察越鞠丸对FD 大鼠胃内残留率、小肠推进率以及血清胃动素（MTL）水平、胃窦黏膜一氧化氮（NO）含量的影响，探讨其可能的作用机制。

1 实验材料

1.1 实验动物 48 只SPF 级SD 大鼠，雄性，由浙江中医药大学动物实验中心代为采购并饲养于该中心，动物合格证号：SYXK（浙）2016-0148，动物实验室许可证：X1602001。伦理审查编号：ZSLL-2016-135。

1.2 药物与试剂 越鞠丸药物组成：香附、川芎、苍术、栀子、神曲各10g，由浙江省中医院中药房提供。所有药物由浙江中医药大学药理实验室制备，药物加10 倍水后先浸泡1h，再大火煎煮1h，过滤部分药渣，再加入6 倍水煎1h，过滤药渣，把2 次水煎液合并，在旋转蒸发器中浓缩成生药浓度0.45、0.9、1.8g/mL，置4℃冰箱备用。枸橼酸莫沙必利片（江苏豪森药业股份有限公司，规格：5mg/片，批号B14200018378），与蒸馏水比配成浓度0.15mg/mL 的混悬液，置4℃冰箱备用。半固体营养糊[2]：羧甲基纤维素钠（上海申光食用化学品有限公司）5g、奶粉8g、糖4g、淀粉4g、墨汁2mL、蒸馏水125mL 配成，浓度1g/mL，临用前配置使用。血清胃动素（MTL）试剂盒（上海信裕生物科技有限公司，批号XY-E12646）；一氧化氮（NO）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号AOB-1）。

1.3 仪 器 酶标仪（芬兰Labsystems Multiskan MS 公司），玻璃匀浆器（海门市盛泰实验器材厂）；超低温冰箱：日本SANYO MDF-382EAANSS；脱水机、包埋机、病理切片机、冻台、组织摊片机（上海徕卡仪器有限公司）。

2 实验方法

2.1 分组及处理 48 只SPF 级健康雄性SD 大鼠，4周龄，体质量（150±20）g，所有大鼠在室温20℃，安静，光照12h 的环境下，自由进食、饮水，每天定时清洁动物房。适应性饲养3 天后，称重，随机分为空白组、模型组、莫沙必利组、越鞠丸低、中、高剂量组。空白组大鼠予以自由饮水、进食；模型组、莫沙必利组、越鞠丸组按照郭氏夹尾法进行模型制备，每组8 只[3]。越鞠丸低、中、高剂量分别按4.5、9、18g/kg 进行灌胃，各组1 次/天，每次2mL；莫沙必利组予莫沙必利0.3mg/200g，每次2mL，空白组及模型组用生理盐水2mL 代替。均连续灌胃7 天。

2.2 体质量、饮水量、进食量测定 每天上午9:00定时称量各组大鼠体质量，并做记录。每天早8:00 给予各笼大鼠固定数量的固体颗粒饲料（或纯净水），至次日早8:00 测定剩余量。平均1 只大鼠每日进食量（饮水量）=（每日给予大鼠总饲料（饮水量）一次日上午测定剩余量）/单笼大鼠数目。统计测评造模前后大鼠体重改变差值、饮水量差值与进食量差值，以评价大鼠胃肠推动功能情况及造模是否成功，再测定大鼠的胃排空残留率与肠推进率。

2.3 胃内残留率测定 给药第7 天，末次给药后禁食、水24h，每只大鼠用2mL 半固体营养糊灌胃，30min 后麻醉处死动物，眼球取血4mL，同时打开腹腔，取出大鼠胃及小肠。在胃的贲门和幽门处用细线扎紧，取出整个胃，用滤纸擦干，称重。沿胃大弯将胃剪开，置于0.9%Nacl 溶液中充分清洗胃内容物，用滤纸擦干，称重。胃排空残留率=[（胃全重-胃净重）/半固体营养糊质量（2g）]×100%。

2.4 小肠推进率测定 取出胃后，仔细分离肠系膜，将幽门至回盲部的一段肠管剪下，将肠管不加牵引平铺于平板白纸上测量小肠长度和墨汁在小肠中的移行距离，小肠推进率=（墨汁在小肠中的移行距离/小肠总长度）×100%。

2.5 实验室指标检测（1）血清胃动素测定：眼球取血4mL，置于4℃下离心机，以3000r/min 离心10min，分离血浆储藏于-80℃超低温冰箱保存，采取上清液按照大鼠胃动素（MTL）酶联免疫分析检测步骤检测血清中MTL 含量。（2）胃窦NO 检测：取出大鼠胃窦组织，用滤纸擦干，剪取部分，加入9 倍体积的生理盐水，用玻璃匀浆器匀浆，再用2000r/min 的离心15min，取上清液保存于-80℃超低温冰箱，按照硝酸还原酶法测定大鼠胃窦组织NO 含量。

2.6 统计学方法 应用SPSS 20.0 软件统计创建数据库进行统计分析，计量资料采用均数±标准差（±s）表示，采用单因素方差分析（One-Way ANOVA），当方差齐时用LSD 法，不齐时选用Dunnett’s T3 检验。P＜0.05 时差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 一般情况 按照郭氏夹尾法造模，不断夹大鼠尾部，激怒之后的大鼠前肢抬高并站立，相互撕打对峙，并不断发出“呼呼”的呼气声。造模后3 天发现其总进食、饮水量减少，有部分大鼠出现焦虑、易怒、易惊；第5 天部分大鼠出现活动减少，打架反应迟缓；第7 天大多数大鼠出现消瘦，毛发枯黄毛躁，脱落明显，对外界刺激显得紧张焦虑，与FD 大鼠模型表现基本相符。

3.2 各组大鼠体质量及饮食量、饮水量比较 造模后，模型组大鼠出现体质量、饮水量、进食量下降；药物治疗后，各治疗组大鼠体质量并未出现明显改变；但越鞠丸组均出现进食量、饮水量明显增加。

3.3 各组大鼠胃内残留率及小肠推进率比较 与空白组大鼠比较，模型组大鼠胃内残留率增高明显，小肠推进率显著降低，差异有统计学性（P＜0.05）；与模型组大鼠比较，莫沙必利组、越鞠丸中、高组大鼠胃内残留率均降低（P＜0.05），莫沙必利组、越鞠丸低、中、高组大鼠肠推进率均升高（P＜0.05），见表1。

表1 各组大鼠胃内残留率、小肠推进率比较（%，±s）

表1 各组大鼠胃内残留率、小肠推进率比较（%，±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05；空白组、模型组：生理盐水灌胃；莫沙必利组：莫沙必利0.3mg/200g 灌胃；越鞠丸低、中、高剂量组分别按4.5、9、18g/kg 灌胃；FD：功能性消化不良

3.4 各组大鼠血MTL 含量、胃窦组织NO 水平比较与空白组比较，模型组大鼠血MTL 显著降低，胃窦组织NO 含量显著增加（P 均＜0.05）。与模型组比较，莫沙必利组、越鞠丸中、高剂量组大鼠血清MTL均增加、胃窦组织NO 含量均减少（P 均＜0.05）。越鞠丸高剂量组胃窦组织NO 含量与莫沙必利组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。越鞠丸中、高剂量组血MTL 与莫沙必利组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 各组大鼠胃窦NO、血MTL 含量比较（±s）

表2 各组大鼠胃窦NO、血MTL 含量比较（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05；空白组、模型组：生理盐水灌胃；莫沙必利组：莫沙必利0.3mg/200g 灌胃；越鞠丸低、中、高剂量组分别按4.5、9、18g/kg 灌胃；FD：功能性消化不良；NO：一氧化氮；MTL：胃动素

4 讨论

MTL 主要存在于胃肠道及中枢神经组织中，可控制胃肠道动力，调节胃收缩活动，其主要作用于胃肠道、胆管和oddis 括约肌等[4]。研究表明，MTL 可刺激胃肠道MMCⅢ期的收缩，为消化间期激素[5]。与胃肠运动功能的关系十分密切[6]。

NO 是抑制性神经递质，在胃肠活动以及其他许多疾病中起着重要作用。在肠神经系统中通过一氧化氮合酶（NOS）作用生成的NO 可松弛胃肠道平滑肌，其对胃肠道运动具有抑制作用[7]。

本研究中，模型组与空白组比较，胃内残留量明显增加，小肠推进率明显下降，同时模型组大鼠血清MTL 水平下降，胃窦黏膜NO 水平升高，提示FD 发病与血清MTL、NO 水平，胃肠运动障碍密切相关。越鞠丸组胃内残留率下降，小肠推进率升高，同时能增加血清MTL 分泌，下调NO 含量，其增强胃肠推动能力的作用机制可能与此相关。同时在越鞠丸低、中、高三组中，中剂量与高剂量效果较好，说明中药在用量上亦存在量效关系。