丹参酮IIA 对跟腱损伤模型大鼠肌腱粘连的预防作用

马飞霞 卢 荟

常规手术修复肌腱后有较高比例的患者将发生肌腱粘连，严重影响患者肢体功能恢复，甚至部分症状严重者需再次接受松解手术。由于缺乏有效的预防粘连的方法，粘连再发的概率仍高达60%[1]。研究表明，丹参酮IIA 可以通过TGF-β/Smad 蛋白通路，抑制胶原的表达，从而减少腹腔脏器纤维化的形成[2-3]。本研究建立跟腱损伤模型大鼠，在研究丹参酮IIA对肌腱粘连的预防作用及对肌腱愈合的影响。

1 实验材料

1.1 实验动物 12 周龄清洁级健康Sprague-Dawley（SD）大鼠20 只，雄性，初始体质量350～400g，由浙江省医学科学院提供，合格证号：SCXK（浙）2014-0001，浙江大学医学院附属第一医院实验动物伦理委员会审查批号2017-169，喂养方式及环境：普通饲料，自由饮水，温度（22±3）℃，湿度（45±10）%。

1.2 药物与试剂 丹参酮IIA 磺酸钠注射液（上海第一生化和制药有限公司，规格：2mL：10mg，批号130408）；硫酸青霉素/链霉素混合液（批号15140-122，规格：100mL，美国gibco 公司）；生理盐水；碘伏；75%酒精等。

1.3 主要仪器与设备 倒置显微镜（Nikon，型号：TS2）；4℃药品保存柜（PanaSonic，型号：MPR-514）；-20℃冰箱（Hair）；电子天平；一次性无菌移液管等。

2 实验方法

2.1 模型建立及分组给药 将20 只大鼠编号，按随机数表法分为观察组和对照组，各10 只。用戊巴比妥（50mg/kg）常规腹腔注射麻醉大鼠，自动剃毛机剔除大鼠左后肢毛发后用碘伏消毒3 次，75%酒精消毒1 次。左下肢踝部后方切开2cm 皮肤，采用改良的Rothkopf 和Perterson 实验性损伤法致跟腱损伤。彻底止血，用5-0prolene 缝线行改良Kessler’s 法重建跟腱。实验组大鼠跟腱表面及周围组织注射0.2mL丹参酮IIA 磺酸钠注射液，对照组大鼠注射0.2mL生理盐水，后缝合腱鞘及皮肤。术后常规肌肉注射青霉素预防感染。下肢夹板固定3 周。第6 周处死大鼠，切取跟腱，-20℃保存备用。

2.2 大体解剖观察 根据Tang 等[4]的肌腱粘连评分标准对观察组和对照组大鼠肌腱粘连情况分级，其中粘连评分0 分表示无粘连，1～2 分表示轻度粘连，3～4 分表示中度粘连，5～6 分表示重度粘连。

2.3 组织学观察 取4%多聚甲醛固定组织，脱钙脱水，石蜡包埋切片，切片厚度5μm，行HE 染色和马松三色法染色后观察成纤维细胞、胶原纤维的排列情况、炎性细胞浸润情况及肌腱和腱周组织的粘连情况。

2.4 统计学方法 应用SPSS 17.0 和Graph Pad Prism 7.0 软件进行数据处理。数据用平均值±标准差（±s）表示，组间比较采用t 检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 丹参酮IIA 对大鼠肌腱愈合的影响 观察组及模型对照组大鼠肌腱均顺利愈合，未观察到肌腱断裂及局部感染、明显畸形等情况，说明丹参酮IIA 对肌腱愈合无负面影响。

3.2 丹参酮IIA 对大鼠肌腱粘连影响的大体评价观察组肌腱轻度粘连3 个，中度粘连7 个，重度粘连0 个；模型对照组轻度粘连1 个，中度粘连6 个，重度粘连3 个。两组粘连评分比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

3.3 丹参酮IIA 对大鼠肌腱粘连影响的组织学评价观察组大鼠肌腱表面较光滑，部分样本可见粘连组织附着，但肌腱粘连范围较少且粘连程度较轻，肌腱与腱周组织间隙清楚，肌腱周围肉芽组织轻度增生，炎性细胞浸润较少，肌腱损伤处胶原纤维和成纤维细胞增加，但排列较规则。对照组大鼠腱周组织发出条索样粘连组织附着于肌腱断端，肌腱与腱周组织间隙存在，肌腱周围肉芽组织增生，可见明显炎性细胞浸润。肌腱损伤处胶原纤维和成纤维细胞显著增加，且排列明显不规则。见插页图1-2。

表1 两组大鼠肌腱粘连评分（只）

图1 观察组和对照组组织学对比

图2 观察组和对照组组织学对比（马松三色法染色，×100）

4 讨论

肌腱粘连作为肌腱断裂修复术后常见的并发症，其主要原因包括解剖因素、局部软组织条件、手术操作过程和后期康复训练情况等。肌腱愈合包括两种过程，即内源性和外源性愈合，其中外源性愈合过度是引起肌腱粘连的主要原因，在外源性愈合过程中，成纤维细胞向肌腱损伤处生长，同时局部的炎性渗出和肌腱本身的增殖愈合均为造成肌腱粘连的主要原因[5]。

丹参酮IIA 是丹参酮中的主要有效成分之一，占丹参干重的0.02%～0.32%，可参与机体多种生化反应，具有抗炎、抑制细胞凋亡、降低氧自由基等生物作用[6]。本研究发现，无论从大体解剖还是组织学观察方面，对肌腱损伤大鼠局部运用丹参酮IIA 可减少肌腱损伤处炎性细胞浸润，减少胶原纤维和成纤维细胞增生，从而减轻肌腱修复术后粘连。

综上所述，应用丹参酮IIA 可预防肌腱损伤修复术后肌腱粘连的发生，具体作用机制有待后续进一步研究。