注射用替莫唑胺的制备及质量研究

赵砚荣　郭杰

[摘要]目的 探讨生产高质量及稳定的注射用替莫唑胺处方及制备工艺。方法 通过枸橼酸用量确定注射用替莫唑胺处方，通过配液温度、活性炭用量和冻干工艺的考察，确定注射用替莫唑胺的制备工艺。结果 最佳处方为替莫唑胺（100 mg），甘露醇（600 mg），枸橼酸（100 mg），聚山梨酯-80（120 mg），枸橼酸钠（235 mg），盐酸（160 mg）。配制温度控制在25℃以下，药液采用盐酸调节pH值至3.0～4.5，同时存放于15℃以下;最佳冻干工艺为制品在-40℃，预冻3 h;导热油升温至0℃，保温64～80 h;导热油升温至15℃，保温18～24 h;最终制品在35℃，保温6～12 h。高效液相色谱法检测141101、141102、141103样品的含量分别为101.1%、100.8%、100.6%。141101和141103样品在12个月长期试验、加速试验考察期间，本品在市售包装下，有关物质略有增加，水分结果略有增大，但均在限度范围内，其他各考察指标均没有明显变化;141102样品在12个月长期试验、加速试验考察期间，市售包装下，水分有所增加，但均在限度范圍内，其他各考察指标均没有明显变化。结论 以本品处方及工艺制备的替莫唑胺制剂，质量稳定，重复性好，可行性佳，适于工业化生产。

[关键词]替莫唑胺;制备工艺;配液温度;脱炭工艺;冻干工艺;质量研究

[中图分类号] R979.1          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-4721（2019）10（c）-0035-04

[Abstract] Objective To explore the formulation and preparation process of Temozolomide for injection with high quality and stability. Methods The formulation of Temozolomide for injection was determined by the amount of citric acid. The preparation process of temozolomide for injection was determined by investigating the temperature of liquid mixing， the amount of activated carbon removal and the freeze-drying process. Results The best prescriptions were Temozolomide （100 mg）， Mannitol （600 mg）， citric acid （100 mg）， polysorbide-80 （120 mg）， sodium citrate （235 mg）， hydrochloric acid （160 mg）. The preparation temperature was controlled below 25℃， and the pH value of the liquid was adjusted to 3.0-4.5 by hydrochloric acid， and stored below 15℃ at the same time. The optimum freeze-drying process was that the product was pre-frozen for 3 hours at -40℃. The heat conducting oil was heated to 0℃ for 64-80 hours. The heat conducting oil was heated to 15℃ for 18-24 hours. The final product was kept at 35℃ for 6-12 hours. The contents of 141101， 141102 and 141103 samples were 101.1%， 100.8% and 100.6% respectively by high performance liquid chromatography. During the 12 months long-term test and accelerated test of 141101 and 141103 samples， the related substances increased slightly and the moisture content increased slightly under the market packaging， but all of them were within the limits， and the other indexes did not change significantly. During the 12 months long-term test and accelerated test， the moisture content of 141102 samples increased under the commercial packaging， but all of them were within the limit， and other inspection indexes did not change significantly. Conclusion The Temozolomide preparation prepared by the prescription and technology of this product has stable quality， good repeatability and good feasibility， which is suitable for industrial production.

[Key words] Temozolomide; Preparation process; The temperature of liquid; Carbon removal process; Freeze-drying process; Study of quality

替莫唑胺是一种新型的烷化剂类抗肿瘤药物，具有较宽的抗肿瘤谱，可口服，易于透过血脑屏障[1]、安全、与其他药物没有叠加毒性、可用于对亚硝基脲耐药的患者，目前认为脱氧核糖核酸（DNA）甲基化和错配修复失败是替莫唑胺细胞毒性的主要作用机制[2-4]。替莫唑胺由先灵葆雅公司开发，1998年首先在欧盟上市，1999年经美国食品药品管理局（FDA）批准在美国上市[5]。主要用于治疗新诊断的多形性胶质母细胞瘤，开始与放疗联合治疗，随后作为辅助治疗;同时用于常规治疗后复发或进展的多形性胶质母细胞瘤或间变性星形细胞瘤[6-7]。作为治疗脑胶质瘤的一线药物，替莫唑胺口服制剂存在恶心、呕吐等副作用[8-9]，易导致药物吸收不全。注射剂具有剂量准确，起效快等特点，适用于不便口服的患者。因此，开发替莫唑胺注射剂十分必要。本研究通过处方筛选、制备工艺研究，确定注射用替莫唑胺的处方和制备工艺，并对注射用替莫唑胺的质量进行考察，为注射用替莫唑胺的开发和大生产提供研究基础和依据，现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器与设备

GYHH12型液体灌装加塞机（上海新旭发制药机械有限公司），PZL10型轧盖机（南京博健科技有限公司），LYO-10型冷冻干燥机（上海东富龙科技有限公司），Ultimate 3000高效液相色谱仪[赛默飞世尔科技（中国）有限公司]，Aglient 1260高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司），XP56电子分析天平（0.001 mg）[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]，CPA225D电子分析天平（0.01 mg）[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]。

1.2试药

替莫唑胺（江苏奥赛康药业有限公司，批号：140801），枸橼酸（湖南华日制药有限公司，批号：20140701），替莫唑胺对照品（江苏奥赛康药业有限公司，批号：140701），替莫唑胺杂质A工作标准品（江苏奥赛康药业有限公司，批号：20140802），替莫唑胺杂质B工作标准品（江苏奥赛康药业有限公司，批号：2014091801），替莫唑胺杂质C工作标准品（江苏奥赛康药业有限公司，批号：S14091101），替莫唑胺杂质D工作标准品（北京百灵威科技有限公司，批号：0024785），甲醇（强生科技有限公司，批号：L840P51、L840P57），己烷磺酸钠（上海凌峰化学试剂有限公司，批号：2012022），冰醋酸（南京化学试剂有限公司，批号：13052310738、13090311396），二甲基亚砜（南京化学试剂有限公司，批号：150709360E）。

2方法与结果

2.1处方筛选的考察

根据TEMODARR说明书显示制剂成品每瓶含替莫唑胺（100 mg），甘露醇（600 mg），L-苏氨酸（160 mg），聚山梨酯-80（120 mg），枸橼酸钠（235 mg），盐酸（160 mg）。其中L-苏氨酸受美国Schering-Plough制药公司专利[10]保护，因此实验中选用常规辅料枸橼酸[11]代替L-苏氨酸，按处方配制药液，采用盐酸调节pH值至3.0～4.5，灌装后进行冻干，考察性状、pH值、复溶时间和有关物质等指标。

处方中加入L-苏氨酸、枸橼酸制备的样品外观均为白色疏松块状物，冻干前后pH值均未发生明显变化;处方中枸橼酸用量为100 mg时，成品复溶时间短、有关物质限度低及增长趋势较缓（表1）。

2.2制备工艺的研究

2.2.1配液温度的确定  替莫唑胺溶液在低温和酸性条件下稳定性良好;在碱性或高温条件下不稳定[12-13]，因此本研究对酸性条件、不同温度下的药液进行稳定性考察。考察温度为40、25、15℃，考察指标为pH值、有关物质及主药溶解时间。温度越高主药溶解时间越短，温度越低药液的有关物质增长慢、稳定性好。因此，配制温度控制在25℃以下，放置温度控制在15℃以下，保证大生产时主药溶解时间和药液的稳定性（表2）。

2.2.2脱炭工艺的考察  注射剂在配制时通常加入0.01%～0.50%的活性炭，以达到吸附热原、杂质和色素的作用，同时活性炭也会吸附主药，在研究过程中要关注活性炭对药液含量的影响和对细菌内毒素指标的控制[14-16]。本研究在药液中加入0.05%、0.10%、0.30%（W/V）的活性炭，搅拌15、30 min后进行过滤，考察药液的性状、pH值、含量及细菌内毒素。药液中加入不同用量活性炭处理后，外观及pH值无明显变化，但药液含量随活性炭用量的增加而降低，工艺中不采用脱炭工艺，安全性方面采取加强对本品原辅料细菌内毒素的控制（表3）。

2.2.3冻干工艺考察  本品在进行冻干工艺研究时参照了专利CN100346784C中提供的冻干工艺，同时在冻干曲线的制定上充分考虑处方组成、装量、容器及冻干机的性能，对冻干曲线三个階段的关键参数及冻干制品冻融问题进行分析[17-19]，分别设计3种冻干工艺，考察制品的关键指标。冻干曲线3制备的注射用替莫唑胺质量最佳，因此本品的冻干工艺为：制品-40℃，预冻3 h;导热油升温至0℃，保温64～80 h;导热油升温至15℃，保温18～24 h;最终制品35℃，保温6～12 h出箱（表4）。

2.3质量研究

2.3.1含量测定  高效液相的色谱条件与系统适用性采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-己烷磺酸钠溶液（取己烷磺酸钠0.94 g，加0.5%冰醋酸溶液溶解并稀释为960 ml，混匀，40∶960）为流动相;检测波长为270 nm;柱温30℃。理论板数按替莫唑胺峰计算≥6000。精密称取适量的本品内容物，用流动相溶解并定量稀释制成每1毫升中约含替莫唑胺0.1 mg的溶液，精密量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图;另取替莫唑胺对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算。工艺验证141101、141102、141103样品的含量分别为101.1%、100.8%、100.6%。

2.3.2稳定性考察  本品模拟上市包装，对141101、141102、141103样品开展了（25±2）℃、相对湿度（RH）（60±5）%条件下的加速试验和2～8℃条件下的长期试验，考察样品性状、pH值、有关物质和含量等指标。141101样品在12个月长期试验、加速试验考察期间，市售包装下，水分和有关物质有所增加，但均在限度范围内，其他各考察指标均没有明显变化;141102样品在12个月长期试验、加速试验考察期间，市售包装下，水分有所增加，但均在限度范围内，其他各考察指标均没有明显变化;141103样品在12个月长期试验、加速试验考察期间，市售包装下，水分和有关物质有所增加，但均在限度范围内，其他各考察指标均没有明显变化（表5～10）。

3讨论

通过枸橼酸用量筛选，确定注射用替莫唑胺的处方;通过考察配液温度、活性炭用量和冻干工艺，确定本品的制备工艺。根据确定的处方和工艺制备工艺验证样品并进行检测，研究结果显示，制备的注射用替莫唑胺在12个月稳定性试验中质量稳定可靠，证实注射用替莫唑胺的处方及制备工艺良好，可行性佳，适于工业化生产。

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（收稿日期：2018-10-12  本文编辑：刘克明）