慢性心力衰竭患者血清Lp-PLA2、sSema4D的表达及临床意义

徐娟娟，沈正军，倪斌，徐成胜

慢性心力衰竭(chronic heart failure，CHF)是心肌病、冠心病、心瓣膜病等心血管疾病的严重和终末阶段，由于CHF患者心肌受损，造成心肌结构和功能的变化，最后导致心室泵血或充盈功能低下[1]。随着社会的发展和人们生活方式的改变，近年来CHF的发病率呈现出升高和年轻化趋势[2]。心室重构是CHF发生、发展主要的病理基础，近年来研究证实，心肌内炎性反应对于心室重构和慢性心力衰竭进程有促进作用[3]。脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2，Lp-PLA2)可通过激活炎性细胞因子参与到机体炎性反应过程中，是心血管特异性炎性标志物，也可作为心血管事件的独立预测因子[4]。重组蛋白质类信号4D(semaphorin 4D，Sema4D)在血小板和T细胞表面高表达，患者机体炎性细胞、血小板等大量活化，Sema4D从细胞表面脱落入血为可溶性Sema4D(sSema4D)[5]。sSema4D可参与到细胞迁移、血栓形成、新血管生成、组织胶原纤维化形成等过程中，其水平可在一定程度上反映CHF患者的病情[6]。现观察CHF患者血清Lp-PLA2、sSema4D水平变化，并分析其与心室重构的关系，以期为临床CHF的诊断和治疗提供参考，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2018年4月—2019年4月黄冈市中心医院治疗的CHF患者112例作为研究组，男61例，女51例，年龄46～78(62.72±5.84)岁；病程0.7～9.0(4.89±1.64)年；原发病：冠心病45例，心房颤动34例，扩张型心肌病33例；诱因：心肌缺血24例，心律失常21例，劳累及情绪激动31例，呼吸道感染26例，电解质紊乱10例；NYHA分级：Ⅱ级31例，Ⅲ级52例，Ⅳ级29例。另选取同期在医院进行健康检查的健康者60例作为健康对照组，男33例，女27例，年龄45～75(62.43±5.72)岁。2组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准通过，全部研究对象及家属均知情同意并签署同意书。

1.2 病例选择标准 (1)纳入标准：①患者均符合“中国心力衰竭诊断和治疗指南2014”中关于CHF的诊断标准[7]；②NYHA心功能分级Ⅱ～Ⅳ级[8]；③年龄≥45岁。(2)排除标准：①合并恶性肿瘤者；②合并急性感染或自身免疫性疾病者；③有心脏病家族史；④缩窄性心肌炎、心包炎；⑤肥厚或限制性心肌病；⑥重度瓣膜狭窄或关闭不全；⑦严重肝、肾功能不全或需要机械通气者。

1.3 检测指标与方法

1.3.1 血清Lp-PLA2、sSema4D水平检测：研究组于确诊后次日(治疗前)、健康对照组于体检当日，清晨空腹抽取2组人员肘静脉血5 ml，离心取上清液置于EP管，放置于-80℃冰箱中保存待测。采用酶联免疫吸附法检测血清Lp-PLA2、sSema4D水平，操作严格按照试剂盒(上海鑫乐生物科技有限公司)说明书进行。设立8个标准孔，按要求加入标本稀释液与标准品混匀，建立标准曲线。待测样品用样品稀释液稀释5倍，然后加样于酶标板孔底部，晃动混匀，封板膜封板后37℃条件下温育30 min。充分洗涤后加入酶标试剂后相同条件下再次温育。再次洗涤后加显色剂混匀后避光显色15 min。加终止液后依序测定各孔吸光度(OD)值，根据标准曲线和OD值计算样品中的血清Lp-PLA2、sSema4D水平。

1.3.2 超声心动图检测：2组均于血液采集当日行超声心动图检查。采用Philips IE33型彩色多普勒超声诊断仪(购自北京东方迈润医疗器械有限公司)，探头频率4～5 Hz，取横位四腔心切面，M型彩色多普勒于左心室腱索水平为标准测量区，分别检测左心房内径(left atrial diameter，LAD)、右心室内径(right ventricular diameter，RVD)、左心舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)及左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening，LVFS)。

2 结 果

2.1 2组血清Lp-PLA2、sSema4D水平比较 研究组血清Lp-PLA2、sSema4D水平高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 2组血清Lp-PLA2、sSema4D水平比较

2.2 2组超声心动图指标比较 研究组LAD、RVD、LVEDD大于健康对照组，而LVEF、LVFS小于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，见表2。

2.3 不同NYHA心功能分级患者血清Lp-PLA2、sSema4D水平比较 随着NYHA分级的升高，研究组患者血清Lp-PLA2、sSema4D水平明显上升，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表3。

2.4 不同NYHA心功能分级CHF患者超声心动图指标比较 随着NYHA分级的升高，研究组患者LAD、RVD、LVEDD明显增大，而LVEF、LVFS明显下降，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表4。

2.5 血清Lp-PLA2、sSema4D与超声心动图指标的相关性 Pearson相关分析显示，研究组患者血清Lp-PLA2、sSema4D水平与LAD、RVD、LVEDD均呈正相关(P<0.01)，而与LVEF、LVFS呈负相关(P<0.01)，见表5。

表3 不同NYHA心功能分级患者血清Lp-PLA2、sSema4D水平比较

3 讨 论

心室重构是CHF发生的重要病理生理机制，其主要表现包括心肌纤维化和心肌细胞代偿性肥大[9]。心室重构的主要表现为呼吸困难、水肿等，临床对其诊断主要依靠超声心动图，但诊断结果缺乏特异性。研究表明[10]，炎性反应贯穿于心室重构的过程中，心肌内炎性反应可通过促凋亡基因蛋白Bax激活凋亡相关通路，进一步促进CHF患者的心室重构进程。Lp-PLA2是一种血小板活化因子乙酰水解酶，由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成[11]。作为一种新发现的心血管特异性炎性反应标志物，近年来有较多关于Lp-PLA2的研究。Yang等[12]观察531例冠心病患者发现，血浆Lp-PLA2浓度与冠心病的发生密切相关。李智慧等[13]发现LP-PLA2与心力衰竭发生密切相关，且其水平随着患者病情加重逐渐升高。Sema4D是一种Ⅰ型跨膜蛋白分子，Xiang等[14]研究发现sSema4D与房颤患者LAD相关，并认为其可能参与左心房重构。

表2 2组超声心动图指标比较

表4 不同NYHA心功能分级患者超声心动图指标比较

表5 研究组患者血清Lp-PLA2、sSema4D与超声心动图指标的相关性

本研究中，与健康对照组比较，CHF患者血清Lp-PLA2、sSema4D水平明显较高，提示Lp-PLA2、sSema4D在CHF发生、发展中起到重要作用。Lp-PLA2主要通过炎性反应参与到CHF的病情进展中，Lp-PLA2在人体中主要以与脂蛋白颗粒结合的形式存在，一方面，Lp-PLA2可使氧化型低密度脂蛋白分解为氧化脂肪酸和溶血卵磷蛋白，进一步刺激细胞因子和黏附因子释放，促使单核细胞在血管内膜下集聚并向巨噬细胞转变，而这些巨噬细胞吞噬氧化型低密度脂蛋白后可转变为泡沫细胞，参与到动脉粥样硬化斑块形成的过程中[15]；另一方面，在动脉粥样硬化斑块部位的Lp-PLA2通过水解氧化型低密度脂蛋白产生的氧化脂肪酸和溶血卵磷蛋白还将损伤血管内皮细胞，并促使内皮细胞合成和分泌血小板源性生长因子、细胞黏附因子、表皮生长因子等，从而加剧患者机体的炎性反应，进一步推动CHF病情进展，造成患者心功能恶化[16]。CHF患者机体炎性反应加剧的同时，血小板、炎性因子等大量活化，促使Sema4D从细胞表面脱落入血，从而导致血清Sema4D水平升高。匡龙等[17]的研究认为，sSema4D与血栓形成及动脉粥样硬化性疾病密切相关，是不良心血管事件发生的危险因素，提示sSema4D水平的升高可能与CHF的发生发展有关。

本研究还发现患者血清Lp-PLA2、sSema4D水平随着NYHA分级的升高而上升，提示Lp-PLA2、sSema4D的表达水平可以反映CHF患者的心功能变化情况。而超声心动图检查结果也发现，随着NYHA分级的升高，CHF患者LAD、RVD、LVEDD明显增大，而LVEF、LVFS明显下降，说明随着CHF病情进展，患者的心室重构越明显。贾二娟[18]对116例冠心病患者进行研究发现，随着心功能恶化，患者Lp-PLA2水平明显升高。唐俊燕等[19]选取86例扩张型心肌病患者进行研究，发现sSema4D与基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的表达呈正相关，认为血清sSema4D可能通过MMP-14参与到心室重构的过程中，其结果与本研究相符。Pearson相关分析结果也进一步证实，CHF患者血清Lp-PLA2、sSema4D表达水平与心室重构存在相关性。临床研究表明[20-21]，部分心血管疾病患者治疗后心功能可以得到一定的恢复，同时患者血清Lp-PLA2、sSema4D表达水平也有一定的降低，提示Lp-PLA2、sSema4D或可成为CHF治疗的新靶点，但关于sSema4D对心室重构的影响机制仍然有待进一步的研究。

综上所述，随着CHF患者心功能的恶化血清Lp-PLA2、sSema4D水平升高，并与LAD、RVD、LVEDD、LVEF、LVFS有较强的相关性，其可能通过影响心室重构参与到CHF的发生、发展中。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

徐娟娟：提出研究思路，实施研究过程，论文撰写；沈正军：设计研究方案，分析试验数据，论文审核；倪斌：实施研究过程，资料搜集整理，论文修改；徐成胜：进行统计学分析