2017—2019 年惠水县高致病性禽流感H5和H7亚型免疫抗体检测分析

马卫红，杨志艳，赵福琼，杨 茜，陈大虎，陈启青，犹银俊，欧德渊

(1.贵州省惠水县动物疫病预防控制中心，贵州 惠水 550600； 2.黔南布依族苗族自治州动物疫病预防控制中心，贵州 都匀 558000； 3.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025)

禽流感(Avian Influenza，AI)是由A 型流感病毒引起的1 种急性禽类传染病[1]。 目前禽流感病毒根据 HA 和 NA 抗原可划分为 18 个 HA 亚型和11 个NA 亚型，其中高致病性禽流感以 H5、H7 亚型为主[2，3]。 高致病禽流感不仅可造成家禽大量死亡，也给人类带来严重威胁[4]。 世界动物卫生组织(OIE)将高致病禽流感列为必须报告的动物传染病，我国将其列为一类动物疫病。 为了掌握惠水县主要饲养家禽高致病禽流感的免疫情况，县动物疫病预防控制中心于2017—2019 年对鸡、鸭进行免疫抗体检测，为进一步做好我县高致病禽流感的防控工作提供参考。

1 材料与方法

1.1 禽血清样品来源惠水县家禽养殖主要以鸡、鸭为主，鹅很少(暂未统计)，养殖形式为养殖场、合作社和散养户。 2017 年9 月以前主要免疫H5 亚型禽流感灭活疫苗，之后用H5+H7 亚型禽流感灭活疫苗免疫。2017—2019 年以抽检的方式随机采集鸡、鸭血液制备血清进行H5、H7 免疫抗体检测。 见表1、表2。

表1 鸡血清样品来源

表2 鸭血清样品来源

1.2 主要试剂H5、H7 亚型禽流感病毒血凝抑制试验抗原，H5、H7 亚型禽流感病毒阳性血清和阴性血清，均购自哈尔滨维科生物有限公司。

1.3 检测方法采集未免疫公鸡血液，制备体积分数为1%红细胞悬液。

1.3.1 血凝试验(HA)在微量反应板的1 ～16 孔均加入生理盐水 25 μL，吸取抗原 25 μL 加入第1 孔，混匀，从第 1 孔吸取混液 25 μL 加入第 2 孔，混匀后吸取25 μL 加入第3 孔，如此进行倍比稀释至第 15 孔。 从第 15 孔吸取 25 μL 弃之，每孔均加入1%鸡红细胞悬液25 μL，在室温(20～25 ℃)下静置40 min 后观察结果。

1.3.2 血凝抑制试验(HI)根据HA 结果，以完全血凝的抗原最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4 即为含4 HAU 的抗原稀释倍数，配制4 HAU的抗原。 在微量反应板的1 ～11 孔加入生理盐水 25 μL，第 12 孔加入生理盐水 50 μL，吸取血清 25 μL 加入第 1 孔内，充分混匀后吸 25 μL于第 2 孔，依次倍比稀释至第 10 孔。 从第10 孔吸取 25 μL 弃去，1 ～ 11 孔均加入 4 HAU 抗原液25 μL，室温静置30 min，每孔加入1%鸡红细胞悬液25 μL 混匀，振荡混匀，室温(20 ～25 ℃)下静置40 min 后观察结果。 根据 GB/T 18936—2003 高致病性禽流感诊断技术(HA 和HI 试验)判断，HI≥24为抗体阳性，免疫合格。

2 结果

2.1 2017—2019 年 H5、H7 亚型禽流感免疫抗体总体情况(1)H5 抗体：2017 年鸡、鸭总体阳性率为68.35%，小于国家规定≥70%的要求，主要是鸭的抗体水平比较低，为不合格；2018、2019 年分别为85.08%、95.11%，抗体达到规定要求。 (2)H7 抗体：2017 年鸡、鸭总体阳性率为 21.36%，不合格；2018、2019 年分别为 72.85%、88.20%，达到规定要求。 此外，H5、H7 抗体水平有逐年升高的趋势。 见表3。

表3 2017—2019 年鸡鸭H5、H7 亚型禽流感免疫抗体总体情况

2.2 2017—2019 年鸡鸭 H5、H7 亚型禽流感免疫抗体分别情况(1)H5 抗体：鸡抗体检测均合格(分别为 70.90%、91.82%、92.75%)；鸭 2017 年抗体检测不合格(61.43%)，2017、2018 年合格(分别为75.08%、97.56%)。 (2)H7 抗体：2017 年鸡和鸭的抗体检测均不合格(分别为29.33%、0.00%)，2017、2018 年均合格(鸡分别为73.14%、93.40%，鸭分别为72.43%、82.78%)。 总体上鸡的 H7 抗体水平高于鸭，H5 抗体水平高于 H7。 见图1。

3 讨论与小结

3.1 抗体检测是判断是否感染病毒或反映免疫情况的重要指标，血凝抑制试验是监测禽流感抗体的常用方法之一[5]。 从检测结果看，惠水县鸡、鸭禽流感免疫抗体水平逐年升高，说明对家禽的免疫越来越重视，养殖者的疫病防控意识提高。 从2017 年9 月以后，我县按动物疫病防控的要求对H5、H7 亚型禽流感进行强制免疫。 从总体上看，H5 亚型的免疫情况要比H7 亚型好，原因是H5 亚型高致病性禽流感病毒对我国养禽业的危害较大，养殖者的重视程度高[4]。 而H7 亚型疫苗上市比较晚，免疫较为滞后。

3.2 对鸡、鸭免疫抗体进行比较发现鸡的抗体水平要高于鸭。 分析原因可能是鸭对禽流感的抗性远大于鸡[6]，不易发病，养殖者不重视对鸭禽流感的免疫，而鸡的养殖规模比较大，养殖技术及条件比较成熟，养殖者重视程度高。 水禽被认为是禽流感的自然贮存库[7]。 近年来惠水县养鸭规模不断扩大，对禽流感施行强制免疫，2019 年惠水县鸡、鸭的H5、H7 亚型抗体水平都比较高，均达到国家要求的免疫标准。

3.3 在免疫过程中由于疫苗类型、免疫对象、养殖条件等原因，造成免疫抗体差异较大。 免疫效果的持续监测是当前高致病性禽流感免疫防控工作中的重点[8]。 下一步动物防疫部门应加大监管力度，加强禽流感的强制免疫工作，通过培训宣传，帮助养殖者树立科学养殖观，提高疫病防控意识，做到防患于未然。 免疫不合格者及时进行补免，同时发挥村级防疫员的作用，及时保证疫苗及消毒物资的配备，及时指导养殖者做好消毒及免疫工作，保证养禽业的健康发展。