4%吡丙醚·氟虫腈微囊悬浮-悬浮剂的高效液相色谱分析方法

黄燕羽，王 勤，戴梅玉，石伟山，周桂东

（江苏艾津农化有限责任公司，南京 211511）

吡丙醚（pyriproxyfen）是一种保幼激素类似物杀虫剂，能抑制昆虫成熟。其对烟粉虱、介壳虫、小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、梨黄木虱、蓟马等有较好的防治效果，同时对公共卫生领域中的蚊、蝇等害虫也具有较好的防治效果[1-2]。氟虫腈（fipronil）是一种新型苯基吡唑类高效、广谱杀虫剂，对蚜虫、飞虱具有较好的杀虫活性，具有触杀、胃毒和内吸作用，可用于水稻、棉花、玉米、蔬菜及果树等多种作物的害虫防治。关于吡丙醚单剂和氟虫腈单剂的液相色谱检测方法均有报道[3-4]，但是二者复配制剂在同一条件下的分析方法目前尚未见报道。本文建立了在同一液相色谱条件下分离测定吡丙醚和氟虫腈的方法，为该复配制剂在同一条件下分离测定提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

LC-20AD高效液相色谱仪（自动进样器），Labsolutions岛津液相色谱工作站，日本岛津公司；SPD-M20A紫外-可见检测器；色谱柱：Shim-pack VP-ODS C18不锈钢柱（250 mm×4.6 mm）；KH7200E超声波清洗器；有机过滤器（微膜孔径0.45 μm）。

DMF（分析纯），乙腈（色谱纯）；二次蒸馏水；吡丙醚标准品（质量分数不小于98.5%）、氟虫腈标准品（质量分数不小于98.5%），上海市农药研究所；4%吡丙醚·氟虫腈微囊悬浮-悬浮剂（其中吡丙醚1%、氟虫腈3%），江苏艾津农化有限责任公司。

1.2 液相色谱操作条件

流动相：乙腈＋水（体积比75∶25）；柱温：室温；流量：1.2 mL/min；检测波长：278 nm；进样体积：10 μL；保留时间：氟虫腈约为3.98 min，吡丙醚约为8.44 min。

上述液相色谱操作条件是典型的操作参数，可以根据不同的仪器特点和温度条件，对给定的操作参数进行适当的调整，以获得最佳效果。典型的吡丙醚和氟虫腈标准品和4%吡丙醚·氟虫腈微囊悬浮-悬浮剂样品高效液相色谱图见图1、图2。

图1 吡丙醚和氟虫腈标准品高效液相色谱图

图2 4%吡丙醚·氟虫腈微囊悬浮-悬浮剂样品高效液相色谱图

1.3 测定步骤

1.3.1 标准样品的配制

称取吡丙醚标准品0.05 g（精确至0.000 1 g）、氟虫腈标准品0.15 g（精确至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，用DMF超声溶解，冷却至室温，用DMF定容至刻度，摇匀，记为A溶液。

从A溶液中吸取10 mL溶液置于100 mL容量瓶中，用DMF定容至刻度，即为吡丙醚、氟虫腈标样溶液。

1.3.2 试样溶液的配制

称取4%吡丙醚·氟虫腈微囊悬浮-悬浮剂0.50 g（精确至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，用DMF超声溶解，冷却至室温，用DMF定容至刻度，摇匀，过滤待测。

1.3.3 测定

按上述液相色谱检测条件，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算每针相对响应值的重复性，待相邻两针相对响应值的变化小于1%以后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.3.4 计算

将测得的两针试样溶液和两针标样溶液中吡丙醚（或氟虫腈）峰面积分别进行平均。试样中吡丙醚（或氟虫腈）的质量分数w（%）按式（1）计算。

式中：A1为标样溶液中吡丙醚（或氟虫腈）峰面积的平均值，mAU·s；A2为试样溶液中吡丙醚（或氟虫腈）峰面积的平均值，mAU·s；m1为吡丙醚（或氟虫腈）标准品的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标准品中吡丙醚（或氟虫腈）的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

为使两种组分能有效分离，并且分析时间相对合适，峰形尖锐，保留时间适中，根据吡丙醚和氟虫腈的结构和性质，对不同配比的乙腈和水流动相进行筛选。结果表明，流动相为乙腈＋水（体积比75∶25），流速1.2 mL/min，氟虫腈的保留时间约为3.98 min，吡丙醚的保留时间约为8.44 min。

2.2 检测波长的选择

利用紫外-可见检测器对吡丙醚和氟虫腈溶液在190～360 nm范围内进行扫描。氟虫腈和吡丙醚的紫外吸收谱图分别见图3、图4。在278 nm波长时，氟虫腈和吡丙醚均有较理想的吸收，且吸收比例合适，各种杂质不影响氟虫腈和吡丙醚的测定，因此选择278 nm作为检测4%吡丙醚·氟虫腈微囊悬浮-悬浮剂方法的最佳吸收波长。

图3 氟虫腈紫外吸收谱图

图4 吡丙醚紫外吸收谱图

2.3 分析方法的线性关系曲线

称取吡丙醚标样0.05 g、氟虫腈标样0.15 g（均精确至0.000 1 g）于100 mL容量瓶中，用DMF溶解并稀释至刻度作为母液。用移液管分别移取4、7、10、13、16、19 mL于6个100 mL容量瓶中，用DMF稀释至刻度，共配制6种不同质量浓度的标样溶液。待仪器稳定后，分别进同样体积的标样，进行测定。以氟虫腈、吡丙醚的质量浓度为横坐标，以相对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线（图5、图6）。方法线性关系良好。氟虫腈和吡丙醚线性方程分别为y=6×106x＋3 799.8和y=7×106x＋1 175.8，相关系数均为0.999 9。

图5 氟虫腈标准曲线

图6 吡丙醚标准曲线

2.4 分析方法的精密度

从同一样品中称取5个试样，在上述色谱条件下进行分析，测得氟虫腈、吡丙醚的标准偏差均为0.01，变异系数分别为0.32%、0.87%（表1）。

表1 分析方法的精密度试验结果

2.5 分析方法的准确度

称取5个已知含量的试样于100 mL容量瓶中，分别加入1.3.1中配制的吡丙醚、氟虫腈标准品溶液A 5 mL，用DMF超声溶解，冷却至室温，用DMF定容至刻度，摇匀，测定本方法中氟虫腈和吡丙醚的加标回收率。经测定，氟虫腈的回收率为99.49%～99.71%，平均回收率为99.57%；吡丙醚的回收率为99.52%～100.60%，平均回收率为100.02%。试验结果见表2。

表2 分析方法的准确度试验结果

3 结 论

用高效液相色谱法对4%吡丙醚·氟虫腈微囊悬浮-悬浮剂进行了定性定量分析，结果表明，所采用的方法准确度和精密度较高，线性关系较好，具有简便、快速、准确及分离效果好的优点，能作为吡丙醚、氟虫腈复配制剂的分析测定方法。