不同产地中药木瓜的质量评价

孙 慧，贾文丽，伊星绮，张 蕾，冯 帅，顾正位

(山东中医药大学 药学院，山东 济南 250355)

木瓜，始载于《名医别录》，为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实。国内存在5个木瓜野生种，包括皱皮木瓜、西藏木瓜、木瓜海棠、光皮木瓜及日本木瓜[1]。而皱皮木瓜被指定为木瓜的药用植物来源，临床常用[2-3]。其外形多呈长圆形，晒干后的皱皮木瓜外表 呈紫红或红棕色，外表遍布不规则深皱纹，因而得名皱皮木瓜。《本草图经》记载:“木瓜处处有之，而宣城者为佳”，自古以来便以安徽宣城的木瓜为道地药材[4]，但实际上，皱皮木瓜目前以栽培为主，主产于山东、湖北、湖南、四川、安徽、浙江、云南等地，不同产地皱皮木瓜化学成分含量及其活性有所不同[5]。

研究发现，木瓜主要含三萜类、有机酸类、糖类、鞣质类、氨基酸类、黄酮类、皂苷类、维生素类等成分[6-7]。其活性成分齐墩果酸以单体或皂苷形式存在于木瓜中，具有消炎，增强免疫力，降低转氨酶，保肝，降血脂，降血糖，还具有抗衰老，抗突变，清除自由基的作用。熊果酸具有抑菌，抗肿瘤，安定和降压等功效[8-10]。本实验对不同产地的木瓜进行质量评价,旨在反映目前市面上木瓜药材的品质。

1 仪器与试药

1.1 样品材料

所有供试样本经山东中医药大学中药鉴定教研室李峰教授鉴定，见表1。

表1 供试样品

表1(续)

1.2 仪器与试剂

仪器：日立高效液相色谱仪(ORGANIZER)，ZORBAX SB-C18(Agilent)柱，超声波清洗机(型号：XO-5200D，南京先欧仪器制造有限公司)，电子分析天平(FA2004)，粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司)，马弗炉(MF-2.5-10A，上海笃特科学仪器有限公司)。

试药：无水乙醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司，批号20170410)，甲醇(色谱纯，山东禹王实业有限公司，批号20170213036)， 娃哈哈纯净水，齐墩果酸和熊果酸对照品(购自中国食品药品检定研究院(供含量测定用), 批号110709-200304)。

2 方法与结果

2.1 水分测定

药材中水分过量会使药材易变质霉烂，对有效成分也会产生一定的影响，因此控制药材中水分含有量对保证中药的质量有重要意义[11]。取供试品粉末2.0 g，按照2015年版药典规定的水分含量测定方法(通则0832第二法)进行水分含量测定，计算供试品中含水量(%)。实验结果见表2。

表2 14个不同种类与品种木瓜的水分、总灰分、浸出物含量

分析数据可知所测得的14种木瓜，均符合药典中对水分测定的标准，不超过15%。进一步分析发现，产地为北方的木瓜含水量少，产地为南方的木瓜含水量多。查阅南北气候资料，可知气候差异是影响木瓜含水量的因素之一。

2.2 总灰分测定

取供试品2.0 g，按照2015年版药典规定的总灰分含量测定方法(通则2302)进行总灰分含量测定，所有药材样品的总灰分含量都符合药典要求(不得过5.0%)。结果见表2。

2.3 浸出物测定

取供试品约2 g，照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，均符合药典中对浸出物测定的标准，不少于15%。结果见表2。

2.4 HPLC测定熊果酸与齐墩果酸

2.4.1 对照品溶液配制

精密称取齐墩果酸和熊果酸标准品10 mg，加甲醇溶解，超声5 min，容甁至10 mL。0.45 μm微孔滤膜即得对照品溶液。

2.4.2 供试品溶液配制

将干燥木瓜用粉碎机粉碎，过60目筛，精密称取样品0.5 g ，置于50 mL具塞三角瓶中，移液管精密量取甲醇25 mL，超声处理30 min，冷却，摇匀，过滤到25 mL容量瓶定容，取续滤液，过0.45 μm的微孔滤膜，得供试品溶液。

2.4.3 色谱条件

色谱柱 Agilent ZORBAX SB-C18柱(mm*mm)；流动相 甲醇∶水=85∶15；柱温 25℃；流速 0.6 mL/min；检测波长 210 nm；进样量 20 μL，此方法分离效果较好。

2.4.4 线性关系的考察

精密吸取齐墩果酸和熊果酸标准品溶液母液0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8 mL分别置于 1 mL定容瓶里，稀释定容。进样量为20 μL，以对照品浓度为横坐标(x)，色谱峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线。结果见图1、图2。

图1 熊果酸标准曲线

图2 齐墩果酸标准曲线

2.4.5 精密度实验

取齐墩果酸和熊果酸对照品混合溶液按“2.4.3”方法进样，连续进样5次。测得齐墩果酸峰面积积分平均值，RSD<1%，熊果酸峰面积积分平均值，RSD<1%，表明仪器精密度良好。

2.4.6 重复性实验

等量取5份同一种供试品按“2.4.2”方法制备供试品溶液，按“2.4.3”方法进入色谱仪测得齐墩果酸和熊果酸的RSD<3%说明该方法重复性良好。

2.4.7 稳定性实验

吸取同一供试品溶液，室温下分别于0，1，4，8，12，16，20，24 h，按照“2.4.3”方法测定齐墩果酸与熊果酸峰面积，计算RSD<3%，说明稳定性能良好。

2.4.8 加样回收实验

精密称取同一批次木瓜粉末0.50 g， 按照“2.4.2”相下方法制备6 份溶液，分别加入等量的齐墩果酸、熊果酸，进样量20 μL，按照上述条件进入高效液相色谱仪，以测量的峰面积计算RSD。结果显示熊果酸和齐墩果酸的平均回收率分别为100.2%、100.0%；RSD分别为0.9%、1.1%(n=6)。

2.4.9 熊果酸与齐墩果酸含量

供试品测定齐墩果酸和熊果酸的含量见表3，14份木瓜药材均符合药典规定。

表3 14个不同种类与品种木瓜齐墩果酸和熊果酸的含量

3 讨论与总结

查阅制约木瓜扩大发展的资料中发现，市场中木瓜质量参差不齐，质量差异较大是制约木瓜发展的因素之一，因此本实验在水分，灰分，浸出物，齐墩果酸与熊果酸等方面对14批不同产地的木瓜药材进行测定。实验发现水分具有地域性差异，北方产地的木瓜含水量相对少一些，南方产地的木瓜含水量相对多一些。相对于灰分，浸出物则没有明显的规律变化。但这14批正品木瓜在水分，灰分，浸出物，齐墩果酸与熊果酸含量方面都符合药典的要求。

目前已知的用于木瓜齐墩果酸的提取方法主要有五种，分别为：乙醇/酯溶剂提取法、超声波提取法、微波提取法、索氏提取法、冷浸提取法。本文采用纯甲醇提取熊果酸和齐墩果酸，实验比较了不同浓度的乙醇、甲醇等提取溶剂, 结果纯甲醇提取的样品色谱峰形对称, 基线稳定, 因此选择纯甲醇作为提取溶剂。参考2015年版《中国药典》有关木瓜高效液相的部分可知，药典中采用流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(265∶35∶0.1∶0.05)，检测波长为210 nm，柱温为16～18℃的条件，由于三乙胺对色谱柱会产生不可逆的影响，有损色谱柱的寿命，所以本文有关高效液相的实验没有使用药典中所规定的流动相。通过考察陈亮[11]、孟瑞丽[12]、赵亮[13]、李维霞[14]、侯广月[15]等人有关高效液相的流动相条件以及在实验中不断的摸索和对实验条件的不断改进，最终采用流动相为水∶甲醇=18∶85的条件，该方法简便快捷，线性范围宽，分离效果较好，数据准确可靠，符合色谱定量分析的要求。

现有的研究也提出：不同产地皱皮木瓜主要化学成分熊果酸含量及抗氧化活性以及 α-葡萄糖苷酶的抑制活性等方面存在差异，与本研究结果相符[16]。所以本实验对木瓜基础生药学特征进行研究，为建立不同产地木瓜药材的质量标准提供了可靠的实验依据，对临床使用木瓜中药材具有一定的参考价值，以期对木瓜的更深入研究提供基础支持。