人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及超声造影成像

胡 蓉，买迪努尔·阿不来提，冯文霞

（新疆医科大学第一附属医院妇产超声科 新疆 乌鲁木齐 830054）

成功建立卵巢癌动物模型，是进一步研究卵巢癌的生长、转移及靶向治疗的实验基础。本研究采用人卵巢癌SKOV3 悬浮细胞液皮下注射接种法构建裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型，并用超声造影动态观察不同生长期内裸鼠皮下成瘤情况[1]。

1 材料与方法

我院2018年12月购买6 ～8 周龄雌性裸鼠55 只，5 只用于耗损，重量18 ～22g；取人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3 培养、传代，将生长活跃、处于对数生长期细胞，调整浓度至 5×107个/ml，逐一于裸鼠右下肢背部经皮下接种细胞混悬液0.2ml，观察动物一般情况，依次在移植后的第10 天、第20 天、第30 天、第40 天、第50 天，随机抽取10 只裸鼠进行超声造影检查；使用百胜MyLab90 彩色超声仪，探头频率9 ～12MHz，二维超声了解移植瘤的大小、形态、血流及内部回声情况，于最佳切面，超声仪调至对比脉冲序列造影模式，每只裸鼠由尾静脉注入0.2ml 声诺维混悬液，进一步观察瘤体造影剂灌注情况。所有在体研究结束后处死动物，解剖瘤体、HE 染色行瘤体切片病理检查。

2 结果

2.1 人卵巢癌移植瘤模型一般情况

2 只造模失败，余造模成功。瘤体体积随时间逐渐增大，10 天组裸鼠背部接种点表皮可见米粒样瘤体凸起；移植瘤生长至20 ～30 天，于接种点皮下已明显可见瘤体，表面未见任何破溃，40 ～50 天组部分瘤体出现坏死，呈红色或黑色结痂，其中50 天组部分表面破溃严重，裸鼠恶病质表现，体重明显下降。

2.2 移植瘤超声造影成像

二维超声测量移植瘤在体瘤体平均直径见表1。瘤体呈类圆形或菜花样外凸的低回声区，回声不均匀，其内可见无回声区分布，彩色多普勒超声显示瘤体周边及内部可见点条状血流信号分布；超声造影：造影剂从瘤体中央向周边呈树枝状快速强化，呈不均匀强化，无回声区内未见造影剂灌注。

表 不同时间组瘤体生长直径（±s，cm）

表 不同时间组瘤体生长直径（±s，cm）

时间 10 天组 20 天组 30 天组 40 天组 50 天组 P瘤体平均直径（cm） 0.27±0.08 0.92±0.23 1.4±0.45 1.6±0.66 2.3±1.9 ＜0.05

2.3 解剖后，部分移植瘤与周边组织粘连，剥离较困难。瘤体剖面呈鱼肉状，色灰白。50 天组部分瘤体中央区域坏死液，部分侵入裸鼠大腿肌肉深部，并可见胸腹水生成。HE 染色后光学显微镜观察肿瘤细胞丰富，排列密集，细胞异型性明显，畸形核和核分裂相多见，核大深染，细胞核质比例明显增大。细胞内可见大量空泡，少数细胞核固缩，裂解，偶见凋亡细胞。肿瘤组织内有较多坏死组织和炎症细胞浸润。

3 讨论

卵巢癌动物模型保瘤了卵巢癌本身的生长特性，是临床上用于研究人卵巢癌生物学特征、治疗评价、寻找靶点的重要实验基础。本研究中有2 只裸鼠移植失败，可能是因为接种的太深，或是由于肿瘤细胞没有及时接种出现细胞分布不均所致。建立理想的卵巢癌研究模型，将有助于对卵巢癌生物学行为的研究，获得更可靠的卵巢癌诊断和治疗的实验研究数据[2-3]。目前，卵巢癌模型有体外卵巢癌研究模型，该方法获得的模型时间有限，不利于长时间研究；另外在体动物模型的制备主要包括诱发性肿瘤模型和移植性肿瘤模型，后者包括皮下注射法、腹腔注射法和原位移植瘤模型[4-5]。

本研究采用了皮下注射接种法，同时运用超声造影监测模型，可以在体实时探查肿瘤的生长情况，包括肿瘤的大小、内部血供、坏死情况，并且与病理结果保持一致。该方法操作简便，动态实时监测，为后续的卵巢癌的在体研究提供了可靠的实验工具。