表达IBDV 鸡源中和抗体的重组NDV 的构建及免疫效果的探究

孙 锐，姜 明，曹玉凯，刘天艳，郭笑辰，孙 旭，周金鑫，王 楠，康 凯，尹杰超，任桂萍,，肖 伟，李德山,

（1. 东北农业大学 生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150030；2. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222002）

鸡传染性法氏囊病（IBD）是由传染性法氏囊病毒（IBDV）引起的急性接触性传染病，给养禽业造成严重的经济损失[1]。疫苗接种是预防IBD 流行的最主要措施。目前应用最为广泛的疫苗主要是减毒疫苗[2]，虽然减毒疫苗免疫原性好，但接种后对法氏囊产生一定破坏作用，损害鸡体免疫系统，从而影响其它疫苗的免疫效果[3]。

为了避免减毒疫苗的毒副作用，特别是在发病后及时治疗，卵黄抗体应运而生，并在国内外得到广泛应用，且早期治疗疗效可达90%以上[4]。由于疫苗接种后不能马上产生抗体，注射卵黄抗体可以填补疫苗接种之后抗体产生之前的空白阶段，使鸡体得到有效保护[5]。然而卵黄抗体在使用过程中也存在一些不可避免的弊端，如可能携带卵源传染病病原[5]，如鸡传染性脑炎、减蛋综合症、禽淋巴白血病、大肠杆菌、支原体、沙门氏菌等病原等，病毒如果灭活不够彻底，将会造成疾病的垂直传播，并且卵黄抗体中含有较多的磷脂及脂肪，注射后易引起鸡体的不适，造成肌肉肿胀、出血、坏死以及应激和过敏反应[6-7]。此外，生产卵黄抗体需要饲养一大批产卵鸡，并要不断维持法氏囊的抗体水平，从卵黄中提取抗体，程序复杂，成本较高，严重限制卵黄抗体的应用。

为解决上述卵黄抗体的瓶颈问题，本研究将基因工程抗体技术和病毒反向遗传操作技术相结合，将具有中和作用的鸡源单克隆抗体插入到新城疫病毒（NDV）LaSota 株基因组中，获得主动免疫与被动免疫相结合的表达IBDV 抗体的重组NDV，并对其免疫保护效果进行了初步探究。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料及实验动物NDV LaSota rClone30株、pNDV 质粒、pT19-VP2-IRES-VP2、prNDV-IB⁃DV（P/M）重组质粒、prTM1-NP、prTM1-P、prTM1-L辅助质粒以及感受态E.coli DH5 株、感受态STBL-2株、BHK-21 细胞、鸡胚成纤维细胞DF-1、IBDV 经典株（BC6/85 株）均由本实验室保存；14 日龄无特定病原体（SPF）鸡、9 日龄～11 日龄SPF 胚胎均购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。

1.2 主要试剂VP2 蛋白（具有IBDV 抗体的中和表位）、IBDV-40 是基因工程全长抗体[5]（通过中和实验证明具有中和IBDV 的抗体，在本实验中作为阳性对照抗体） 均由本实验室保存；dNTP Mixture、Oligo（dT）18、DNA Marker、T4 DNA 连接酶、pMD18-T载体、限制性内切酶、rTaq DNA 聚合酶均购自TaKaRa 公司；DNA 凝胶回收试剂盒购自Axygen 公司；质粒提取试剂盒购自Tiangen 公司；PCR 产物纯化试剂盒购自OMEGA 公司；转染试剂Lipofectmine 2000 购自Invitrogen 公司；鸡传染性法氏囊病精致高免蛋黄抗体购自普莱柯生物工程有限公司；病毒RNA 提取试剂盒购自Promega 公司；In-fusion HD kits 无缝克隆试剂盒购自Clontech 公司；兔抗VP2 的多克隆抗体由本实验室保存；HRP 标记的羊抗鸡IgG 及羊抗兔IgG 均购自Southern Biotech 公司。

1.3 重组质粒的构建以prNDV-IBDV（P/M）为模板，通过Primer 5 软件设计特异性引物，引物序列见表1。分别采用L（P/M）-（F/R）、L（NP/P）-（F1/R1）引物PCR扩增L基因。采用H（P/M）-（F2/R2）、H（NP/P）-（F3/R3）扩增H 基因。将其克隆至pMD18-T 载体中，将测序正确的质粒分别命名为pMD18-L（P/M）、pMD18-L（NP/P）、pMD18-H（P/M）、pMD18-H（NP/P）。将pNDV 载体和pMD18-H（P/M）质粒分别用Pme I、Sac II 限制酶酶切连接后转化，提取质粒进行鉴定，将测序正确的阳性重组质粒命名为prNDV-H（P/M）（图1A）；重组质粒prNDV-H（NP/P）（图1B）的构建方法同上；将prNDV-H（NP/P）载体和pMD18-L（P/M）质粒分别用Pme I、Sac II 酶切连接后转化，提取质粒进行鉴定，将测序正确的质粒命名为prNDV-H（NP/P）-L（P/M）（图1C）；重组质粒prNDV-L（NP/P）-H（P/M）（图1D）的构建方法参照prNDV-H（NP/P）-L（P/M）；为 了 获 得 重 组 质 粒prNDV-IRES-H-L（P/M），以prNDV-IBDV（P/M）为模板，采用H（F4/R4）扩增H 基因片段，引物序列见表1，将其克隆至pMD18-T 载体上，将测序正确的质粒命名为pMD18-H（F4/R4），将pT19-VP2-IRESVP2 载体和pMD18-H（F4/R4）质粒分别用EcoR I 和Mlu I 酶切连接后转化，将测序正确的重组质粒命名为pT19-VP2-IRES-H（F4/R4）， 将pNDV 载 体 和pMD18-L（P/M）质粒分别用Pme I、Sac II 限制酶酶切连接后转化，提取质粒进行鉴定，将测序正确的阳性重组质粒命名为prNDV-L（P/M），将prNDV-L（P/M）载体用Apa I 和Aat II 酶切后回收纯化载体，pT19-VP2-IRES-H（F4/R4）质粒通过引 物（F5/R5）PCR 扩增IRES-H 基因，将纯化后的载体与纯化后的IRES-H 片段，通过In-fusion HD kits 无缝克隆试剂盒连接转化后，提取质粒鉴定将测序正确的质粒命名为prNDV-IRES-H-L（P/M）（图1E）。

图1 重组NDV 基因组DNA 的构建Fig.1 The construction of recombinant NDV genomic DNA

1.4 重组病毒的拯救采用脂质体转染法，分别将重组质粒prNDV-IRES-H-L（P/M）、prNDV-H（NP/P）-L（P/M）、prNDV-L（NP/P）-H（P/M）、prNDV-H（P/M）、prNDV-H（NP/P）和prTM1-NP、prTM1-P、prTM1-L共转染至六孔板内，细胞密度达到70%～80%的BHK-21 细胞，转染孵育72 h 后，将BHK-21 细胞在-80 ℃反复冻融3 次。将上清液接种到9 日龄～11 日龄的SPF 鸡蛋的尿囊腔中。72 h 后，收集并混合尿囊液后进行血凝（HA）试验。收获HA 试验结果为阳性的尿囊液，将重组病毒分别命名为rNDV-H（NP/P）、rNDV-H（P/M）、rNDV-IRES-H-L（P/M）、rNDVH（NP/P）-L（P/M）、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）。

1.5 重组病毒的RT-PCR 鉴定利用病毒RNA 提取试剂盒从拯救的病毒感染的SPF 鸡卵的尿囊液中提取总RNA，并利用逆转录酶将RNA 逆转录为cD⁃NA。将cDNA 用作模板，利用NP/P-（F6/R6）、P/M-（F7/R7）位点引物通过PCR 反应扩增H 和L 基因，对其进行测序以鉴定插入保真度。

1.6 重组病毒的生物活性检测为了进一步确定重组病毒的生物学活性，分别对重组病毒的HA、TCID50、EID50、鸡胚平均致死时间（MDT）、脑内致病指数（ICPI）[8-9]等生物学指标进行检测。

表1 本实验所用引物Table 1 Primers used in the present study

1.7 重组病毒生长曲线的测定将MOI 0.01病毒感染接种于六孔板内培养至对数生长期的DF-1 细胞，其培养液为DMEM（5%胎牛血清）。37 ℃培养数天，每间隔24 h 收获上清液，分别测定收获上清的TCID50。绘制重组病毒在DF-1 细胞中同步生长曲线。

1.8 重组病毒中H 基因或融合H 和L 基因表达的western blot 检测取纯化后的VP2（1.31 mg/mL）经15% SDS-PAGE 电泳后，用转膜仪将蛋白转至NC膜，分别以MOI 0.1 重组病毒感染的DF-1 细胞收获的上清液以及IBDV-40（1.001 mg/mL）作为一抗，羊抗鸡IgG-HRP（1:7 500）为二抗，利用ECL 发光检测试剂曝光显影，western blot 检测重组病毒中H 基因或融合H 和L 基因的表达情况。

1.9 重组病毒中H 基因或融合H 和L 基因表达的ELISA 检测将IBDV-40（浓 度 为1.001 mg/mL）、rNDV-IRES-H-L（P/M）、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）、rNDV-H（P/M）、rNDV-H（NP/P）、NDV 各100 μL 包被于96 孔板。以兔抗VP2多克隆抗体为一抗（1:6 000），羊抗兔IgG-HRP（1:7 500），采用本实验室建立的ELISA 方法检测。设置只加底物的PBS 组为背景对照、未加VP2 的阴性对照1（MOCK1）和未加兔抗VP2 多克隆抗体的阴性对照2（MOCK2），样品及对照均设置了3 个平行孔。

1.10 IBDV 抗体和NDV 特异性抗体的检测将32只14 日龄的SPF 鸡随机分为4 组，每组8 只，分别是NDV 组、rNDV-H（P/M）组、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）组、空白组。按108EID50剂量的重组病毒免疫实验鸡，于免疫后的1 d、3 d、5 d 抽取鸡血分离血清，通过ELISA 方法检测IBDV 抗体[10]；于免疫后的7 d、14 d、21 d 抽取鸡血分离血清，检测鸡NDV 特异性抗体效价（HI），具体检测方法及步骤参考文献[11-12]。

1.11 重组病毒对感染鸡的免疫保护实验将48 只14 日龄的SPF 鸡随机分为6 组，每组8 只，分别是NDV 组、rNDV-H（P/M）组、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）组、空白组、感染未预防组（感染IBDV BC6/85）、卵黄抗体组。NDV 组、rNDV-H（P/M）组、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）组鸡只按108EID50剂量的重组病毒免疫实验鸡，卵黄抗体组注射1 mg 抗体。空白组用0.9%生理盐水代替，感染未预防组只感染未预防，免疫7 d后，用104EID50剂量的IBDV BC6/85 攻击免疫鸡，每天观察所有的SPF鸡临床症状，感染未预防4 d后，称量每只鸡的体重以及法氏囊重用于囊体比[囊体比=法氏囊重（g）/体重（g）×1 000]，观察法氏囊损伤情况进行评分（标准主要依据各组实验鸡法氏囊的萎缩程度0：没有损伤，1：微弱变化，2：小于25%囊损伤，3：26%～50%的滤泡损伤，4：51%～75%滤泡损伤，5：76%～100%囊损伤），并计算保护率（保护率=法氏囊病理损伤评分为0 和1 的实验鸡个数/该组实验鸡总数×100%），然后对法氏囊进行病理切片分析。

2 结 果

2.1 重组质粒的构建结果构建的重组质粒prNDV-IRES-H-L（P/M）、prNDV-H（NP/P）-L（P/M）、prNDV-L（NP/P）-H（P/M）、prNDV-H（P/M）、prNDV-H（NP/P）通过PCR 或酶切鉴定，获得目的片段，其测序结果显示，H、L 和IRES-H 大小分别为1 770 bp、750 bp 和2 350 bp, 与预期结果一致（图2）。表明上述重组质粒正确构建。

图2 重组质粒中目的片段的PCR 或酶切鉴定Fig.2 PCR or restriction enzyme analysis of prNDVs

2.2 重组病毒的拯救分别将prNDV-IRES-H-L（P/M）、prNDV-H（NP/P）-L（P/M）、prNDV-L（NP/P）-H（P/M）、prNDV-H（P/M）和prNDV-H（NP/P）通过反向遗传操作系统从cDNA 水平拯救出具有感染性的重组病毒粒子。HA 实验和HI 实验分析显示同样呈现阳性，不同鸡胚的HA 效价介于28～211。收获的阳性尿囊液作为重组NDV rNDV-IRES-H-L（P/M）、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）、 rNDV-L（NP/P）-H（P/M）、rNDV-H（P/M）和rNDV-H（NP/P）的F1 代。

2.3 重组病毒的RT-PCR 鉴定利用病毒RNA 提取试剂盒提取重组病毒RNA。以NDV 为阴性对照，用基因组的上游和下游引物对重组病毒中插入的相应片段进行RT-PCR 扩增。结果显示重组病毒均能够扩增出相应目的片段，经琼脂糖凝胶电泳分析，片段大小与预期相符（图3）。对扩增产物进行序列测定，测序结果正确（数据未显示）。

2.4 重组病毒生物学特性的检测对NDV和5种重组病毒（第4 代）进行了HA、TCID50、EID50、MDT、ICPI等实验，结果显示，与亲本NDV 相比，重组病毒的HA，EID50及TCID50滴度均未见明显差异（表2），表明重组病毒依旧保持了其亲本病毒的感染能力和生物学特性；MDT 结果显示重组病毒的平均致死时间均大于120 h（>120 均属于弱毒株），表明重组病毒均属于弱毒株范围；更重要的毒力指标ICPI 则进一步显示重组病毒的ICPI 值均为0。以上结果表明，重组病毒不仅保持了其亲本NDV 的感染能力而且还保持了其弱毒株的生物学特性。

图3 重组NDV 外源基因的RT-PCR 鉴定Fig.3 Identification of the exogenous genes in the recombinant vial genomes by RT-PCR

表2 病毒滴度和毒力的比较Table 2 Comparations of virus titer and pathogenicity

2.5 重组病毒生长曲线的测定将5 种重组病毒及亲本病毒分别按MOI 0.01 感染DF-1 单层细胞，每间隔24 h收集样品检测TCID50（图4）。结果显示重组病毒rNDV-IRES-H-L（P/M）、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）、rNDV-H（P/M）、rNDV-H（NP/P）与NDV 亲本病毒株生长特性基本一致，表明外源基因的插入对病毒的复制能力无显著影响。

2.6 重组病毒中H 基因或融合H 和L 基因表达的western blot 检测结果Western blot 测检重组病毒中H 基因或融合H 和L 基因的表达，结果显示IB⁃DV-40、rNDV-IRES-H-L（P/M）、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）、rNDV-H（P/M）、rNDV-H（NP/P）均能与VP2 蛋白结合，而NDV 则不能与VP2 蛋白结合（图5）。表明rNDV-IRES-H-（P/M）、rNDV-IRES-L-H（P/M）、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）、rNDV-H（P/M）、rNDVH（NP/P）中H 基因或融合H 和L 基因正确表达，且rNDV-L（NP/P）-H（P/M）中融合H 和L 基因和rNDVH（P/M）中H 基因表达量高。

图4 重组病毒在DF-1 细胞复制动力学曲线Fig.4 The growth curve of recombinant viruses in DF-1 cells

图5 Western blot 检测外源基因的表达Fig.5 The expression of foreign gene detected by western blot

2.7 重组病毒中H 基因或融合H 和L 基因表达的ELISA 检测结果采用ELISA 法检测重组病毒中H基因或融合H 和L 基因的表达，结果显示，NDV（OD450nm=0.177），NDV-IRES-H-L（P/M）（OD450nm=0.577）、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）（OD450nm=0.589）、 rNDV-L（NP/P）-H（P/M）（OD450nm=0.858）、rNDV-H（P/M）（OD450nm=0.793）、rNDV-H（NP/P）（OD450nm=0.650）。分析可得，NDV-IRES-H-L（P/M）、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）、rNDV-H（P/M）、rNDV-H（NP/P）中外源基因的表达量与NDV 相比差异极显著（p<0.01）（图6）。表 明rNDV-H（P/M）中H 基 因 和rNDV-L（NP/P）-H（P/M）中融合H和L基因表达量高。

2.8 NDV 特异性抗体效价的检测为测定表达量高的重组病毒在鸡体内产生NDV 特异性抗体的情况，于免疫后的7 d、14 d、21 d 抽取鸡血，测定（HI），结果显示，NDV 组、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）组和rNDV-H（P/M）组的整体抗体水平在14 d 达到最高，21 d 略有下降，但高于7 d 的平均HI 抗体效价；在免疫14 d 和21 d 后，NDV 组、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）组和rNDV-H（P/M）组的HI 抗体效价均达到保护临界值（4log2），HI抗体效价与PBS组成差异极显著（p<0.01）（图7），表明重组病毒能够有效刺激SPF鸡产生NDV特异性抗体且达到一定的保护效果。

图6 ELISA 检测外源基因的表达Fig.6 The expression of foreign genes detected by ELISA

图7 免疫鸡体内NDV 特异性抗体水平变化情况（log2）Fig.7 The levels of NDV-specific antibodies in immunized chickens(log2)

2.9 IBDV 特异性抗体效价的检测为测定重组病毒在鸡体内产生IBDV 特异性抗体的情况，于免疫后1 d、3 d、5 d 抽取鸡血分离血清，通过ELISA 测定鸡体内产生IBDV 特异性抗体的效价，结果显示，免疫第1 d、3 d、5 d rNDV-L（NP/P）-H（P/M）组OD450nm值 分 别 为0.211、0.441、0.439；rNDV-H（P/M）组OD450nm值分别为0.210、0.436、0.393；NDV 组OD450nm值 分 别 为0.090、0.093、0.089。rNDV-H（P/M）组和rNDV-L（NP/P）-H（P/M）组在免疫后第2 d OD450nm值开始升高，且在3 d～5 d 抗体水平持续上升；而NDV 组OD450nm值未有显著变化。分析可得rNDV-L（NP/P）-H（P/M）组和rNDV-H（P/M）组抗体效价与NDV 组相比差异极显著（p<0.01）（图8）。表明重组病毒能在SPF 鸡体内产生IBDV 抗体。

2.10 重组病毒对感染鸡的免疫保护实验结果利用重组病毒对感染IBDV BC6/85 株鸡只进行免疫保护实验后，各组实验鸡的囊体比、法氏囊损伤评分及保护率结果如表3 所示，结果显示rNDV-H（P/M）组、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）组的囊体比分别为（1.72±0.34）和（2.09±0.21），与NDV 组和感染未预防组的囊体比（0.83±0.34）和（0.85±0.43）相比明显升高；同时对各组实验鸡法氏囊的病理损伤程度进行评分，结果表明感染未预防组和NDV 组实验鸡IBD的感染率为100%，其它组保护率顺序为正常组>rNDV-H（P/M）>卵黄抗体>rNDV-L（NP/P）-H（P/M）表3。取感染后鸡法氏囊组织制作病理切片，HE染色结果显示，空白组无明显变化。rNDV-H（P/M）组、rNDV-H（NP/P）-L（P/M）组和卵黄抗体组法氏囊损伤程度明显比感染未预防组和NDV 组轻。感染未预防组和NDV 组法氏囊淋巴结体积缩小，皮质髓质大量淋巴细胞凋亡，腔内大量可见炎症细胞及变性坏死细胞。rNDV-H（NP/P）-L（P/M）组和卵黄抗体组部分区域出现炎症细胞及变性坏死细胞；相比rNDV-H（NP/P）-L（P/M）组和卵黄抗体组，rNDV-H（P/M）组法氏囊损伤程度比rNDV-H（NP/P）-L（P/M）组和卵黄抗体组轻（图9）。表明rNDV-H（P/M）的保护效果好。

图8 ELISA 检测免疫鸡体内IBDV 抗体Fig.8 The detection of anti-IBDV antibody in immunized chickens by ELISA

表3 各组实验鸡抵抗IBDV(BC6/85 株)感染的保护效力Table 3 Protection efficacy of different treatment against IBDV(BC6/85 strain)challenge in chickens

图9 各组部分法氏囊HE 结果Fig.9 HE staining of bursal of Fabricius in each group

3 讨 论

本研究对所构建的重组病毒免疫效果进行了探究，在NDV 抗体水平方面，HI 结果显示重组病毒均能在免疫后的14 d 达到保护临界值，说明该病毒具有预防NDV 的作用。近年来，抗体药物的研究和发展非常迅速[13-14]，在过去的30 年间，有30 多种免疫球蛋白及其衍生物作为抗体药物用于癌症、自身免疫病和传染病等的诊断、预防及治疗。同时，用于治疗人类各种疾病的抗体药物已有报道[15-16]，然而重组抗体用于动物病方面的研究还没有报道。特别是具有本动物源的治疗性抗体在兽医研究领域仍是空白，原因主要是制作成本高不便于应用。为了克服这一难题，本研究选用DNV 作为载体结合基因工程抗体和反向遗传操作技术构建了表达本动物源抗体的病毒，由于NDV 易感于鸡胚、便于应用、且成本较低，克服了成本高所带来的问题。但是由于抗体分子量较大，为表达高水平量的抗体带来了难题，为了克服这一难题，Carnero 等人证明，当HIV gag 基因位于整个NDV 病毒基因组的不同转录位置时，P 和M 基因之间为HIV gag 基因的最佳插入位点[17]。张振宇等人证明通过IRES 携带外源基因的方式将RFP 基因分别插入到NDV 载体NP、P、M、F、HN 基因内部时，IRES-RFP 位于NDV 载体NP 基因内部作为第2 个阅读框时RFP 表达量最高[18]。2019 年苏明雪等人通过比较rNDV-EGFP（NP/P）、rNDVEGFP（P/M）、 rNDV-EGFP（M/F）和rNDV-EGFP（F/HN）的表达量，证明NP/P 位点是外源基因最佳插入位点[19]。然而NDV 表达抗体时，抗体插入位点的最佳方式尚不清楚。所以本研究进行了不同的表达设计，构建并拯救了5 种表达鸡源IBDV 抗体的重组病毒，通过体内和体外两方面检测了IBDV 鸡源抗体的表达，体外实验western blot 和ELISA 检测结果证明抗体表达，体内试验结果表明在免疫后的第3 d成功检测到IBDV 抗体。为了进一步探究病毒对于IBDV 的免疫效果，利用表达量高的重组病毒对人工感染IBDV（BC6/85 株）的SPF 鸡进行免疫保护实验，结果表明rNDV-L（NP/P）-H（P/M）、rNDV-H（P/M）和卵黄抗体免疫组法氏囊损伤程度明显好于感染未预防组和NDV 免疫组，并对各组法氏囊损伤程度进行评分，结果显示rNDV-H（P/M）组实验鸡的保护率为75%，rNDV-L（NP/P）-H（P/M）组实验鸡的保护率为50%，卵黄抗体组实验鸡的保护率为62.5%，以上研究结果表明rNDV-H（P/M）、rNDV-L（NP/P）-H（P/M）和卵黄抗体均能有效减轻IBDV 对法氏囊淋巴滤泡的损伤作用，具有预防IBD 的效果，且rNDV-H（P/M）免疫组效果要好于rNDV-L（NP/P）-H（P/M）和卵黄抗体组。

本研究所获得的重组病毒解决了卵黄抗体在使用过程中存在的一些弊端，如可能携带卵源传染病病原，并且其含有较多的磷脂及脂肪，注射易引起机体不适，此外提取程序复杂成本较高。通过主动免疫和被动免疫结合的优点，成功解决了疫苗毒力强所带来的问题。如使用后会引起法氏囊组织损伤，导致免疫抑制，毒力返强和散毒等生物安全风险[20]。同时也解决了暂时没有有效疫苗的传染病如非洲猪瘟等[21]。通过病毒载体表达同源抗体，易于鸡胚扩大生产，工艺简单，成本较低，解决了兽医领域由于成本高不能应用治疗性抗体的问题。

综上所述，NDV 载体表达的鸡源重组抗体，具有成本低，生产工艺简单，质量可控等优点，同时这类重组病毒能够弥补卵黄抗体等的缺点，并且可以达到一针两治的效果，具有很大的应用前景，有望成为替代卵黄抗体预防和治疗IBD 的本动物源重组抗体生物制剂，同时也为基因工程抗体和病毒反向遗传操作技术的发展提供了巨大的推动力。