非小细胞肺癌患者中EGFR与TTF-1表达及与患者预后关系的研究

黄银梅 吴晓文 蔡东林 马宏武

广东省汕头市潮阳区大峰医院肿瘤内科 515154

肺癌是呼吸系统常见恶性肿瘤，依据病理学与生物学特性不同，可分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)两种，其中前者占比超过80%，是肺癌最常见的类型。NSCLC在组织学上包括鳞癌、腺癌、大细胞癌等，多数缺乏神经内分泌特性，对放化疗敏感性差，常规治疗预后欠理想，有数据显示患者5年生存率不足20%[1]，有待寻求新的治疗手段。近年，细胞分子生物学快速发展，基因靶向技术得到重大突破，为NSCLC治疗开辟了新途径。研究发现，不同基因类型与蛋白表达的NSCLC，肿瘤生物学特征不同，预后也存在差异。寻找可以反映肿瘤生物学特征及判断预后的特异性肿瘤标志物，也由此成为现代临床NSCLC治疗研究热点。甲状腺转录因子1(TTF-1)对甲状腺和肺来源的肿瘤具有高选择性，特别是对于肺腺癌具有高度特异性，是近年临床新发现的肿瘤分子标记物[2]。表皮生长因子受体(EGFR)是上皮生长因子EGF信号传导受体，参与调解增殖、分化、存活、迁移等多种细胞活动，EGFR基因突变阳性者对肺癌靶向治疗敏感性高，预后也更为理想[3]。另有报道指出，TTF-1阳性表达的腺癌EGFR突变率(87.5%)明显高于TTF-1阴性表达的腺癌(9.6%)，两者间存在一定相关性[4]。为深入探究NSCLC患者EGFR与TTF-1表达情况及与预后的关系，为临床提供参考，文章择取2016年1月—2017年12月我院收治的191例NSCLC患者展开研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2016年1月—2017年12月为时限，从我院收治肺癌患者中择取191例为研究对象。纳入标准：(1)病理组织学确诊原发性NSCLC，标本来源手术切除、纤支镜活检、CT引导穿刺均可，病理资料齐全；(2)接受EGFR与TTF-1检测，检测前未行放化疗和分子靶向药物治疗；(3)患者签署知情同意书。排除标准：(1)肺转移癌；(2)合并其他恶性肿瘤；(3)中途失访或退出，随访资料缺失。入选病例中，男103例，女88例，年龄43～82岁，中位年龄64岁。病理类型：腺癌109例，鳞癌68例，鳞腺癌10例，其他4例。TNM分期：Ⅰ期40例，Ⅱ期47例，Ⅲ期59例，Ⅳ期45例。细胞分化：低分化96例，中分化37例，高分化58例。

1.2 方法 获取患者新鲜肺癌组织标本，常规制成5μm石蜡切片备用。以免疫组化SABC法检测TTF-1蛋白表达，采用购自武汉博士德公司的鼠抗人TTF-1单克隆抗体(一抗)、即用型SABC(过氧化物酶)试剂盒和DAB显色液。以多重荧光PCR法检测EGFR基因突变，采用厦门艾德生物医药公司生产的人类EGFR突变基因检测试剂盒，主要检测外显子18-21位点基因片段和S768I、T790M突变。检测操作严格遵照试剂说明书要求与实验室标准规程，全程质量控制。请我院病理科2名资深医师共同阅片。结果判读：TTF-1表达于细胞核，呈黄色或棕黄色，以TTF-1阳性表达细胞数占计数总细胞数<5%为阴性(-)，5%～25%为弱阳性(+)，25%～50%为阳性(++)，>50%为强阳性(+++)。以样本外控出现S型扩增曲线且Ct≤34.0为EGFR基因突变阳性。

1.3 观察指标 统计阳性数据，检验EGFR基因突变阳性与TTF-1阳性表达关系。观察EGFR基因突变阳性与TTF-1阳性表达同NSCLC病理的关系。另随访统计患者生存时间(以死亡为终点事件)，观察EGFR、TTF-1不同表达与NSCLC生存时间关系。

1.4 统计学方法 以SPSS21.0软件对数据进行统计分析，计数资料百分数(%)表示，行F检验，Spearman等级相关分析EGFR与TTF-1关系，Kaplan-Meier生存分析法分析EGFR、TTF-1与患者生存时间的关系，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFR与TTF-1阳性率统计 191例NSCLC患者中，EGFR基因突变阳性54例，包括Exon19缺失27例、Exon 21突变22例、其他5例，基因突变阳性率28.27%。TTF-1阳性107例(见图1)，包括弱阳性37例、阳性31例、强阳性39例，阳性表达率56.02%。

a b

2.2 EGFR与TTF-1表达同NSCLC病理的关系 不同病理类型的NSCLC中， EGFR基因突变阳性率有统计学差异(P<0.05)，不同TNM分期与分化程度的NSCLC中，EGFR基因突变阳性率无统计学差异(P>0.05)，不同病理类型、TNM分期与分化程度的NSCLC，TTF-1的阳性表达均有统计学差异(P<0.05)，见表1。

表1 EGFR与TTF-1表达同NSCLC病理的关系[n(%)]

2.3 EGFR与TTF-1表达相关性 EGFR与TTF-1在NSCLC中的表达情况见表2，经Spearman等级相关分析，EGFR基因突变与TTF-1表达呈正相关(r=0.497，P=0.001)。

表2 EGFR与TTF-1在NSCLC中的表达情况

2.4 EGFR和TTF-1与患者生存时间的关系 Kaplan-Meier法绘制生存曲线，计算相关关系，结果显示EGFR基因突变不同类型患者、TTF-1不同表达患者的生存时间有统计学差异，见表3。

表3 EGFR和TTF-1与患者生存时间的关系

3 讨论

TTF-1是由氨基酸组成的多肽，属于NKX2转录因子家族成员，由染色体14q13的单一点位基因编码，主要表达于甲状腺，另见于肺、脑等组织。在肺组织中，TTF-1选择性表达于支气管细胞和Ⅱ型上皮细胞中，可以激活表面活性物质A、B、C基因转录活性，控制clara细胞分泌肺特异蛋白基因，在促进肺发育、维持肺组织形态功能正常中具有重要作用[5]。现代研究发现，TTF-1与肺癌的发生和进展有关，可能是驱动肺癌表达的核心蛋白。有报道指出，TTF-1在肺腺癌组织中呈特异性高表达，阳性率达75%以上，但在肺鳞癌中几乎不表达，可以为肺腺癌与肺鳞癌的鉴别诊断提供依据[6]。本研究中，腺癌患者TTF-1阳性表达(88.99%)亦显著高于鳞癌(2.94%)，与文献报道相符。有学者以免疫组化法检测原发性肺腺癌标本TTF-1，结果显示TTF-1阳性率与肿瘤分化程度呈正相关[7]。另也有关于TTF-1蛋白表达与肺癌TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移存在相关性的报道。另有一项研究证实，TTF-1高表达肺癌患者中位生存率明显高于TTF-1无表达和低表达者，可作为肺癌生存预后评价指标[8]。本研究结果显示，不同TNM分期与分化程度的患者，TTF-1表达也存在统计学差异，TTF-1阳性表达者，中位生存时间更长。由此可以看出，临床分期越晚、细胞分化越差的NSCLC，TTF-1阳性表达率越低，患者生存时间越短，提示TTF-1表达缺失可能预示NSCLC高侵袭性，预后不良。

EGFR是一种络氨酸激酶型受体，属于ErBb家族成员，可以通过结合表皮生长因子(EGF)启动细胞核内信号导转，参与细胞生长分裂。但受遗传、辐射、空气污染、长期吸烟等因素影响，EGFR一旦发生基因突变，会疯狂表达EGFR蛋白，导致细胞膜表面过多EGF受体与EGF结合，造成细胞异常生长、增殖和分裂，最终引发癌症[9]。NSCLC患者EGFR阳性表达率可达60%～80%，且不同病理类型的肿瘤组织持续性表达水平存在差异，而对于NSCLC患者EGFR基因突变率，文献报道的差异较大，但阳性者普遍以外显子19缺失和外显子21突变最为常见，占比分别约45%和40%。明确EGFR基因有无突变及突变类型，是NSCLC靶向治疗重要前提和依据。有报道指出，EGFR基因突变在NSCLC中的检出率高于SCLC，但不同病理类型、TNM分期与分化程度的NSCLC基因突变率基本相当[10]。本研究中，不同病理类型NSCLC基因突变阳性率有统计学差异，与文献报道结论不符，考虑可能与病例选择偏倚有关，有待进一步证实。有报道指出，TTF-1阳性表达可以很好地预测EGFR基因突变，灵敏度达92%[11]。有学者研究发现，TTF-1过表达与EGFR基因突变存在一致性，NSCLC患者中TTF-1与EGFR同时阳性者占比超过85%[12]。本研究显示，EGFR基因突变与TTF-1表达呈正相关，与文献报道结论相符。另有研究发现，EGFR基因突变的NSCLC患者化疗有效率高于阴性患者，指出可将其作为肺癌预后独立预测因子。本研究经Kaplan-Meier分析发现，不同EGFR基因突变类型患者的预后也存在差异，19号外显子缺失的NSCLC患者生存时间更长，考虑与不同基因突变患者靶向药物治疗敏感度与耐药性不同有关，具体有待深入研究。

综上所述，EGFR与TTF-1表达可以在一定程度上反映非小细胞肺癌病理特征及预后情况，联合应用可以更好地指导本病临床诊疗，为患者预后评估提供依据。