某地区不同食源性大肠杆菌耐药性检测分析

谭琳琳 孔军

[摘要]目的：检测分析某地区不同食源性大肠杆菌耐药性。方法：2018年至2019年采集某地区农贸市场、各大超市肉品、蔬菜、乳制品、即食食品样品396份，分离出大肠杆菌阳性样品126份，阳性率为31.8%。结果：126株大肠杆菌对四环素、氨苄西林、萘啶酮酸的耐药性较高，分别为44.4%、39.7%、38.1%。肉品、蔬菜分离株对四环素的耐药性较高，分别为57.1%、52.9%;乳制品分离株对氨苄西林的耐药性较高，为26.7%;即食食品分离株对各抗生素的耐药性最低，为0。耐药菌株中，sul2耐药基因检出率最高，addB耐药基因检出率最低，分别为75.0%、19.2%。结论：某地区食源性大肠杆菌具有较为严重的多重耐药性。

[关键词]食源性大肠杆菌;耐药性;肉品;蔬菜;乳制品;即食食品

[中图分类号]R155.3

[文献标识码]A

[文章编号]2096-5249（2021）23-0205-02

大肠杆菌属于一种条件致病菌，是食品粪便与水源污染指示菌，也是人与动物肠道共生菌，周生菌毛与鞭毛，又称革兰氏阴性无芽孢杆菌，一些大肠杆菌能够将肠毒素产生，引发婴儿与幼畜严重腹泻[1]。本研究检测分析了某地区不同食源性大肠杆菌耐药性。

1材料与方法

1.1材料（1）菌株：2018年至2019年采集某地区农贸市场、各大超市肉品、蔬菜、乳制品、即食食品样品396份，分离出大肠杆菌阳性样品126份，阳性率为31.8%。（2）药敏纸片和培养基：庆大霉素、阿米卡星、链霉素等氨基糖苷类，四环素等四环素类，氯霉素等氯霉素类，环丙沙星、左氧氟沙星、萘啶酮酸等喹诺酮类，复方新诺明等磺胺类，氨苄西林、头孢他啶、哌拉西林、头孢噻肟、亚胺培南、阿莫西林等β-内酰胺类，红霉素等大环内酯类，多粘菌素B等多粘菌素类;药敏纸片：购买杭州天和微生物试剂有限公司生产的抗生素药敏纸片;培养基：购买青岛海博生物技术有限公司生产的MH琼脂培养基、EC培养基、LB琼脂培养基、EMB培养基、LST培养基。（3）仪器和设备：购买苏州安泰空气技术有限公司生产的SW-CJ型净化工作台，上海弘芯电子科技有限公司生产的LabTech自动高压灭菌锅，上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产的SPX-250B-Z型生化培养箱、HPX-9272MBE型电热培养箱，上海领德仪器有限公司生产的BCD-268E型低温冷藏箱，北京市六一仪器厂生产的DYY-BC型电泳仪。

1.2方法

1.2.1菌株分离在225ml0.85%生理盐水中放入25g样品，均质后用移液枪将1ml均质液吸取出来，在LST肉汤管中放置，在37°C的温度下培养2d，将产气的LST管挑出来，将100μl菌液吸取出来，在EC肉汤管中放置，在44°C的温度下培养2d。将菌液从产气EC管中挑取出来，在37°C的温度下划线培养于EMB培养基中18～24h，将具有金属光泽的单一菌落挑出来。

1.2.2生化试验与PCR检测（1）生化试验：采用IMVIC试验生化鉴定大肠杆菌，包括枸橼酸盐试验、甲基红试验、VP试验、吲哚试验，大肠杆菌对其结果为-、+、-、-或-、+、-、+。（2）PCR检测：将阳性对照菌株设定为石河子大学动物科学院微生物学院实验室提供的大肠杆菌ATCC25922，采用PCR技术对所挑选出的菌株携带uidA情况进行检测。uidA基因上游引物序列为5’-CGATTCCGTTTCAGGGTT-3’，下游引物序列为5’-TTTCTGATAGGACCGAGCAT-3’，扩增片段为194bp。PCR扩增反应体系：引物F、R、10×buffer、dNTP、Taq酶、去离子水、E.coliDNA模板分别1μl、1μl、2.5μl、2μl、0.5μl、17μl、1μl，共25μl。PCR扩增条件：在94°C、94°C、60°C、72°C温度下分别预变性、变性、退火、延伸10min、1min、1min、1min，35个循环，最后在72°C的温度下延伸10min。

1.2.3药敏试验用灭菌棉签在整个平板铺满稀释好的菌液，待平板干后，用无菌镊子在平板上贴各种药片，将3张药片贴在每个平板上，在37°C培养箱中放置贴好药片的平板18～20h。将质控菌株设置为大肠杆菌ATCC25922，药敏试验过程中运用世界卫生组织（WHO）推荐的K-B法。对试验均对某一抗菌药物或抗生素敏感性及敏感程度进行判定时依据抑菌环存在情况及环的大小，对大肠杆菌对抗菌药物或抗生素的耐药性进行判定时依据CLSI标准。

1.2.4耐药基因检测PCR鉴定分离株的tetA、tetB、strA、strB、aadAla、aadB、blaTEM、floR、sul2等9种耐药基因。基因比对时依据GenBank及文献上公布的序列，将9种耐药基因相关引物设计出来。耐药基因的PCR引物序列：tetA、tetB、strA、strB、aadA1a、aadB、blaTEM、floR、sul2的上游引物分别为5’-GCTACATCCTGCTTGCCTTC-3’、5’-TTGGTTAGGGGCAAGTTTTG-3’、5’-CCTGGTGATAACGGCAATTC-3’、5’-ATCGTCAAGGGATTGAAACC-3’、5’-AACGACCTTTTGGAAACTTCGG-3’、5’-GGGCGCGTCATGGAGGAGTT-3’、5’-TTGGGTGCACGACTGGGT-3’、5’-CACGTTGAGCCTCTATAT-3’、5’-GCGCTCAAGGCAGATGGCATT-3’，下游引物分别为5’-CATAGATCGCCGTGAAGAGG-3’、5’-GTAATGGGCCAATAACACCG-3’、5’-CCAATCGCAGATAGAAGGC-3’、5’-GGATCGTAGAACATATTGGC-3’、5’-TTCGCTCATCGCCAGCCCAG-3’、5’-TATCGCGACCTGAAAGCGGC-3’、5’-TAATTGTTGCCGGGAAGC-3’、5’-ATGCAGAAGTAGAACGCG-3’、5’-GCGTTTGATACCGGCACCCGT-3’，扩增片段分别为210bp、659bp、546bp、509bp、352bp、329bp、503bp、868bp、285bp。

2结果

2.1不同来源大肠杆菌的耐药性分析126株大肠杆菌对四环素、氨苄西林、萘啶酮酸的耐药性较高，分别为44.4%、39.7%、38.1%。肉品、蔬菜分离株对四环素的耐药性较高，分别为57.1%、52.9%;乳制品分离株对氨苄西林的耐药性较高，为26.7%;即食食品分离株对各抗生素的耐药性最低，为0。见表1。

2.2PCR检测结果分析耐药菌株中，sul2耐药基因检出率最高，addB耐药基因检出率最低，分別为75.0%、19.2%。见表2。

3讨论

本研究结果表明，126株大肠杆菌对四环素、氨苄西林、萘啶酮酸的耐药性较高，分别为44.4%、39.7%、38.1%。肉品、蔬菜分离株对四环素的耐药性较高，分别为57.1%、52.9%;乳制品分离株对氨苄西林的耐药性较高，为26.7%;即食食品分离株对各抗生素的耐药性最低，为0。耐药菌株中，sul2耐药基因检出率最高，addB耐药基因检出率最低，分别为75.0%、19.2%，说明大肠杆菌作为一种耐药指示菌作用极好，研究食物中的大肠杆菌能够对食品微生物风险评估进行完善，从而对有害大肠杆菌数量进行控制。将大肠杆菌的药敏特性、流行病学数据收集起来，将食源性大肠杆菌溯源分析数据库建立起来能够将科学依据提供给对耐药性流行规律的了解、对耐药性发展趋势的预测[2]。

综上所述，某地区食源性大肠杆菌具有较为严重的多重耐药性，值得临床充分重视。

参考文献

[1]张裕祥，姜雯，梁静，等.2017-2019年新疆乌鲁木齐地区急性感染性腹泻常见病原菌分布及其耐药性分析[J].实用药物与临床，2020，23（7）：641-645.

[2]李穗霞，席美丽，王盼盼，等.8省市鸡肉源性大肠杆菌分离鉴定及其耐药性检测[J].中国人兽共患病学报，2018，34（2）：158-164.