老年高血压病人血清miR-126、IGF-1水平与颈动脉内膜中层厚度的关系

李欣慰，张 敏，刘 坤

高血压是危害老年人身体健康的慢性病之一，老年高血压严重可导致心脑血管并发症发生，使靶器官受损，导致急性冠状动脉综合征、急性脑梗死、脑卒中等疾病，甚至致残或致死[1-2]。高血压是老年人动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)形成的重要危险因素之一，颈动脉内膜中层厚度(intima-media thickness，IMT)增加是评价AS程度的常用指标[3-4]。高血压及AS的发病机制尚未完全清楚，微小RNA(miRNA)或称非编码RNA，约占整个人类基因组的1%，约有三分之一人类基因受miRNA调控[5]。126是内皮特异性miRNA，在高血压病人血清中高表达[6]。miR-126高表达能够调控肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，抑制其诱导的血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)表达，降低白细胞在血管内皮的黏附能力，以达到抗AS的作用[7]。血清胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1，IGF-1)是受生长激素调控的多肽类生长因子，化学结构与胰岛素类似，一般通过自分泌、旁分泌、内分泌等方式参与机体代谢，促进血管上皮及平滑肌细胞增生，促进细胞分裂和增殖[8]。本研究测定老年高血压病人血清中miR-126、IGF-1表达水平，并分析其与颈动脉内膜中层厚度(IMT)的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取本院2018年1月—2019年1月收治的老年高血压病人94例，年龄65.54～84.26(72.37±2.19)岁；男50例，女44例；高血压1级21例，高血压2级34例，高血压3级39例。根据IMT分为3组，IMT≤1.0 mm的病人为IMT正常组，共22例；1.0 mm0.05)。本研究经本院伦理委员会批准通过，符合《赫尔辛基宣言》内容要求。

1.2 试剂与仪器 IGF-1酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒(E-EL-H0086c)购自武汉伊莱瑞特生物科技有限公司；总RNA提取试剂盒(DP420)购自北京天根生化科技有限公司；LOGIQ9彩色多普勒超声诊断仪购自美国GE公司。

1.3 方法

1.3.1 样品采集 清晨抽取研究对象空腹静脉血6 mL，静置待血液凝固后，5 000 r/min，离心20 min 离心半径15 cm，25 ℃分离血清，放入-20 ℃冰箱中待用。

1.3.2 实时荧光定量法(qPCR)测定 血清miR-126表达miR-126，正向引物序列为：5′-CGACGCGTCGGGTTTACAGAACACCCA-TCA-3′；反向引物序列为：5′-CCATGGGGCAGCAACAAAAGACT-3′；U6内参正向引物序列为：5′-ATT-GGAACGATACAGAGAAGATT-3′，反向引物序列为：5′-GGAACGCTTCACGAA--TTTG-3′。使用RNA试剂盒提取受试者血清中总RNA，逆转录得到cDNA，采用实时荧光定量仪对miR-126序列进行扩增，扩增反应体系共20.0 μL，其中SYBR Mix10.0 μL，cDNA(25 ng/mL) 2.0 μL，ddH2O 4.0μL，ddH2O 4.0 μL。扩增条件：95 ℃预变性5 min，95 ℃变性30 s，63 ℃退火40s，73 ℃延伸40 s，40个循环后，73 ℃终末延伸5 min。采用2-△△CT法对miR-126表达水平进行定量分析。

1.3.3 ELISA测定IGF-1水平 操作步骤严格按照说明书执行。

1.3.4 颈动脉超声检查 固定专职超声科医师使用多普勒超声诊断仪对病人进行检查，血管探头频率设置为7.5 MHz，观察病人双侧颈动脉内膜中层结构、形态、回声变化。在颈动脉分叉处近端后壁约1.5 cm处测量IMT值，测定3次，结果取平均值。

1.3.5 常规检查指标 检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞计数(WBC)、血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、尿酸(UA)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血压等。

2 结 果

2.1 高血压组、对照组受试者常规检查结果比较 与对照组比较，高血压组WBC、FBG、血脂、HbA1c比较差异均无统计学意义(P>0.05)， hs-CRP、尿酸水平降低(P<0.05)，血压升高(P<0.05)。详见表1。

表1 两组受试者常规检查结果比较(±s)

2.2 不同高血压分级病人血清miR-126、IGF-1水平比较 与对照组比较，高血压1级组、高血压2级组、高血压3级组病人血清中miR-126、IGF-1表达水平升高(P<0.05)，高血压1级组、高血压2级组、高血压3级组两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

表2 不同分级高血压病人miR-126、IGF-1水平比较(±s)

2.3 不同IMT老年高血压病人血清miR-126、IGF-1水平比较 与IMT正常组比较，IMT增厚组、颈动脉斑块形成组病人血清miR-126、IGF-1表达水平升高(P<0.05)，颈动脉斑块形成组miR-126、IGF-1表达水平高于IMT增厚组(P<0.05)。详见表3。

表3 不同IMT老年高血压病人血清miR-126、IGF-1水平比较(±s)

2.4 影响老年高血压病人颈动脉斑块形成的多因素Logistic回归分析 多因素Logistic回归分析表明，miR-126高表达水平、IGF-1高表达水平是老年高血压病人颈动脉斑块形成的危险因素(P<0.05)。详见表4。

表4 老年高血压病人颈动脉斑块形成的多因素Logistic回归分析

3 讨 论

老年高血压发病人数呈逐年上升趋势[9-10]。临床已证实高血压是AS发生的主要原因之一，脂质浸润、血管平滑肌激活、炎症反应、血小板活化、内膜损伤、血栓形成均参与AS发生发展进程，老年高血压合并AS是临床上常见疾病，严重危害老年人生命安全，然而其具体发病机制尚无明确定论[11-12]。

本研究纳入老年高血压病人与健康志愿者进行研究，血常规检查表明，与对照组比较，高血压组WBC、FBG、血脂、HbA1c比较差异无统计学意义，hs-CRP、尿酸水平降低，血压升高。提示高血压病人hs-CRP、尿酸水平降低，二者水平与老年高血压相关。miR-126在高血压血瘀证病人表达水平升高，提示其可能参与了非血瘀证向血瘀证发展的过程[13]。郑茜等[14]研究发现miR-126能够调节MAPK信号通路，从而抑制氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)处理的血管平滑肌细胞增殖和迁移。本研究表明，与对照组比较，高血压组miR-126表达水平升高，并随着高血压分级升高而升高，提示miR-126可能参与老年高血压病程进展。有研究表明，miR-126在AS模型小鼠血清中高表达，能够抑制内皮细胞炎症反应，减少细胞因子的释放以抑制或减缓AS进程，miR-126在AS病人血清中表达水平升高，可能在AS发病进程中起着保护作用[15-16]。本研究发现，与IMT正常组相比，IMT增厚组、颈动脉斑块形成组病人血清中miR-126表达水平升高，提示miR-126可能通过某种机制影响老年高血压病人的IMT厚度。

有研究表明，高血压病人血清中IGF-1高表达，且并发粥样斑块病人IGF-1表达水平高于仅患高血压病人，IGF-1可能是临床上监测高血压并发粥样斑块的生物指标[17]。周文平等[18]研究显示，IGF-1与妊娠期高血压病人产后舒张压、收缩压均呈正相关，提示血清IGF-1水平与妊娠期高血压疾病产后遗留高血压病人血压水平密切相关。本研究表明，与对照组相比，高血压组IGF-1表达水平升高，并随着高血压分级升高而升高，提示IGF-1高表达可能在老年高血压进程中发挥调节作用。李辉等[19]研究发现，IGF-1在AS病人血清中高表达，与AS程度呈正相关，提示IGF-1可能参与AS发生发展进程。尹家琛[20]发现，IGF-1水平与脑梗死面积及斑块稳定性相关，提示IGF-1可能参与脑梗死进程。本研究表明，与IMT正常组相比，IMT增厚组、颈动脉斑块形成组病人血清IGF-1表达水平升高，提示IGF-1表达水平随着老年高血压颈动脉内膜中层加厚进程升高。多因素Logistic回归分析表明，miR-126高表达、IGF-1高表达是老年高血压病人颈动脉斑块形成的危险因素。

综上所述，miR-126、IGF-1在老年高血压病人血清中表达水平显著升高，且与病人IMT厚度有关，是老年高血压病人颈动脉斑块形成的危险因素。但是miR-126、IGF-1参与老年高血压IMT的机制还有待进一步研究。