新型冠状病毒IgM/IgG胶体金试剂应用情况分析

王曼, 吴衍恒, 罗乐, 李雷, 刘新霞

中山市疾病预防控制中心 1防疫科, 2检验科, 3 办公室 (广东中山 528403)

《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第八版)》[1-2]，与前期版本相比，在核酸检测的基础上，增加了血清学IgM和IgG作为诊断依据。目前，国家药监局批准了多家公司生产的新型冠状病毒抗体检测试剂，包括胶体金法、化学发光法、荧光免疫层析法等，其中胶体金技术具有方便快捷、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点，特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查。中山市位于珠江三角洲地区，2020年1月22日报告首例新型冠状病毒肺炎确诊病例[3]。2020年3月3日开始，在出院病例健康随访和密切接触者中开始应用血清学IgM/IgG胶体金试剂。现针对其应用情况进行分析，为下一步血清学胶体金试剂应用提供依据。

1 对象与方法

1.1 数据收集与分析 采用Excel 2010 收集整理2020年3月3日至5月26日，中山市血清学检测对象的血清学和核酸检测结果，针对血清学和核酸检测结果不一致对象，收集整理相关流行病学调查资料。

1.2 血清学检测对象 出院病例：采用RT-PCR方法核酸检测呼吸道标本结果为阳性，结合临床症状进行诊断。确诊病例和无症状感染者达到出院标准(连续2次核酸检测阴性)后，第7、14天和第3个月进行随诊，采集血清进行抗体检测。密切接触者：在纳入观察第1、4、7天和解除隔离前采集咽拭子进行核酸检测，同时在纳入观察期第7天和第14天采集血清进行抗体检测。

1.3 检测方法 血清学检测：采用英诺特(唐山)生物技术有限公司生产的新型冠状病毒IgM/IgG胶体金试剂盒进行检测，按照说明书进行结果判断。核酸检测:采用中山大学达安基因股份有限公司和上海伯杰医疗科技有限公司的新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行检测，按照国家防控方案进行结果判定[1-2]。

1.4 统计学方法 采用SPSS 21.0 统计软件进行Kappa一致性分析和2检验(Fisher确切概率法)。

2 结果

2.1 基本情况 2020年3月3日至5月26日，累计开展血清学检测242人385人次。其中确诊病例和无症状感染者64人96人次，其核酸检测结果均为阳性；密切接触者178人289人次，其核酸检测结果均为阴性。开展重复血清学检测的人群中，仅1例确诊病例发生IgG从阳性到阴性转化。血清学IgG无发生转化的241人中，IgG和核酸检测符合率为95.9%(231/241)(Kappa=0.889，P=0.334)。

2.2 确诊病例血清学检测情况 54例核酸检测阳性的确诊病例，累计完成77次血清学检测。出院后不同时间检测结果详见表1。

23例完成2次检测。12例同时完成出院后7 d和14 d血清学检测，其两次结果完全一致，8例IgM阳性IgG阳性，4例IgM阴性IgG阳性；11例同时完成出院后第14天和第90天血清学检测，其中6例从第14天的IgM阳性IgG阳性转变为第90天的IgM阴性IgG阳性，1例从第14天的IgM阳性IgG阳性转变为第90天的IgM阴性IgG阴性，2例第14天和第90天均为 IgM阴性IgG阳性，1例第14天和第90天均为IgM阴性IgG阴性。

31例仅完成1次检测。15例出院后14 d进行了检测，其中10例IgM阳性IgG阳性，4例IgM阴性IgG阳性，1例IgM阴性IgG阴性；16例出院后90 d进行了检测，12例IgM阴性IgG阳性，4例IgM阴性IgG阴性。

表1 中山市新型冠状病毒确诊病例、无症状感染者和密切接触者不同时间血清学检测结果 例(%)

2.3 无症状感染者血清学检测情况 10例核酸检测阳性的无症状感染者，累计完成19次血清学检测。出院后不同检测结果详见表1。9例同时完成出院后第7天和14天血清学检测，其两次结果完全一致，2例IgM阴性IgG阴性，7例IgM阴性IgG阳性。1例完成出院后14 d血清学检测，结果为IgM阳性IgG阳性。出院14 d，无症状感染者IgG阴转率(20.0%)大于确诊病例(5.3%)，但是差异无统计学意义(Fisher 确切概率P=0.187)。

2.4 密切接触者血清学检测情况 178例核酸检测阴性的密切接触者，累计完成289次血清学检测。其中111例在隔离第7天和隔离14天完成2次检测，110例2次检测结果均为IgM阴性IgG阴性，1例2次结果均为IgM阳性IgG阳性。67例仅完成隔离第14天血清学检测，其中66例结果为IgM阴性IgG阴性，1例为IgM阳性IgG阳性。

2.5 核酸和血清学不一致个案信息 11例新型冠状病毒核酸与血清学存在结果不一致的个案信息详见表2。包括7例确诊病例，2例无症状感染者和2例密切接触者，其中仅1例确诊病例发生了IgG阳性到阴性的转化。

表2 中山市新型冠状病毒IgG血清学和核酸检测结果不一致个案信息

3 讨论

本文针对英诺特(唐山)生物技术有限公司生产的新型冠状病毒IgM/IgG胶体金试剂盒在新型冠状病毒肺炎病例出院健康随诊和密切接触者观察期间的应用进行了系统分析，结果表明IgG和核酸检测结果的一致性较好，符合率达到95.9%。提示在传染源不明进行传染链追踪时，可以考虑结合核酸检测，辅助使用血清学胶体金检测。

本次分析发现，对于确诊病例，在出院后的随访检测中，IgG阳转率呈下降趋势，从第7天的100.0%，下降到第14天的94.7%，第3个月的22.2%，且其中1例确诊病例14 d IgG检测阳性，3个月随访IgG转为阴性。另外在出院14 d的随访中，无症状感染者IgG阴转率(20.0%)大于确诊病例(5.3%)，差异无统计学意义，推测主要是样本量较小导致。本结果与重庆医科大学黄爱龙教授等6月18日在《Nature Medicine》杂志上发表的研究结果具有一致性[4]。有研究[4]对37例有症状病例和37例无症状感染者在出院后进行了2个月随访观察，发现无论是有症状病例还是无症状感染者，其IgG和中和抗体的水平均处于下降趋势；无症状者对新型冠状病毒感染的免疫反应较弱，出院8周后，即恢复期早期，无症状组中81.1%显示中和抗体水平下降，抗体阴转率为40%，而有症状组抗体水平下降的比例为62.2%，IgG阴转的比例为12.9%。

既往关于新型冠状病毒IgM/IgG抗体血清学应用的报道[5-10]，主要集中于病例发病的早期和中期阶段，采用的方法既包括化学发光法，也包括胶体金法，不同研究结果存在一定的差异，但结论都支持将抗体检测试剂作为核酸检测试剂的辅助诊断手段。本研究中血清学抗体针对确诊病例和无症状感染者，用于出院后随访，属于中后期的应用。在感染个体中，血清学抗体检测结果随着感染时间延长，呈现动态变化。姜中毅等[11]评价了3种试剂盒检测病毒特异性抗体的情况，结果发现，发病4～7 d时,阳性率在36.4%～45.5%之间;发病8～14 d时,阳性率在55.6%～77.8%之间;而发病15 d以上时,阳性率达到100%。在本次应用中，没有得到IgM单阳性的检测结果，在病例的健康随访过程中，出院后14 d IgM和IgG双阳性者接近70%，出院后3个月，无IgM阳性个体。结合全部病例的中位数住院时间为17 d，推测大多数感染个体，IgM在发病后1～3个月之间逐渐消失。

核酸检测是目前病例确诊最广泛使用的检测方法。既往研究发现[12-15]，由于采样、运输及内部质控等因素，核酸检测可能存在漏检的情况。本次应用中，发现2例多次核酸检测结果为阴性，但是血清学检测结果阳性者，其家庭成员中均有多名病例，推测其可能为无症状感染者。2例病毒感染剂量低，上呼吸道排毒量微小，达不到核酸检测标准。

本次应用分析存在以下局限，首先本次针对新型冠状病毒肺炎感染者，血清学检测均是在其出院后健康随访期进行，缺乏病例发病早期血清学检测数据，其次血清学检测中确诊病例和无症状感染者的数据样本量较小，其血清学变化规律需要积累更多的数据。