36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂的高效液相色谱分析

孙钰洁 颜明

(江苏省农产品质量检验测试中心，江苏 南京 210036)

我国是农业大国，农业又是其它所有行业的基础。农作物的产量和安全生产是农业发展的重中之重。农作物生长过程中容易遭受各种病虫害侵袭，不可避免的需要使用农药。农药质量和农作物生长密切相关。农药企业对农药生产中的质量控制是保障农药质量的重要环节。丙环唑作为一种内吸性的三唑类杀菌剂，对环境具有保护和治疗作用。丙环唑具有杀菌谱广泛、活性高等优点[1]，已成为目前最广泛使用的农作物杀菌剂之一。咪鲜胺是一种广谱杀菌剂，可以与大多数杀菌剂、杀虫剂、除草剂混用，提高农作物病虫害防治效果[2]。长期使用单剂型农药，会使农作物产生抗体，降低病虫害防控效果。复配农药的使用可以避免这种情况的发生，还可以提高农作物病虫害防控效果。丙环唑和咪鲜胺复配制剂，可以提高单剂的杀菌效果。目前同时检测丙环唑和咪鲜胺的方法比较少，已报道的有高效液相色谱法[3]，气相色谱分析法[4]。气相色谱法中需要内标定量，相对于高效液相色谱法操作较繁琐。在已报道的高效液相色谱法中，采用了甲醇、乙腈和磷酸水溶液作流动相，且流速较大，所用有机溶剂较多，且对色谱柱使用寿命有一定影响，但乙腈价格昂贵[5]。本文开发了一种高效液相色谱方法，用甲醇和水作流动相，体积比为48∶52，流速1.0mL·min-1，进样体积5μL，整个分析过程30min内完成。

1 实验部分

1.1 试剂和溶液

甲醇：默克色谱纯；水：屈臣氏超纯水；丙环唑标准品：含量99.2%，浅黄色粘稠液体，上海市农药研究所提供；咪鲜胺标准品：含量99.1%，白色固体粉末，上海市农药研究所提供；36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂，江苏省扬州市苏灵农药化工有限公司提供。

1.2 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪；二极管阵列检测器；色谱工作站；色谱柱：Eclipse XDB-C8不锈钢柱(150mm×4.6mm，5μm)；万分之一天平；超声波清洗器；微孔膜过滤器：孔径0.45μm。

1.3 色谱操作条件

流动相：等度洗脱，甲醇和水体积比为58∶42；流动相流速为1.0mL·min-1。

柱温：30℃；检测波长：225nm；进样体积：5μL；保留时间：丙环唑A约为20.77min，丙环唑B约为22.52min，咪鲜胺约为24.80min，见图1。

图1 36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂的高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

用万分之一天平准确分别称取丙环唑标准品0.02g(精确至0.0001g)和咪鲜胺标准品0.05g(精确至0.0001g)，置于同一50mL容量瓶。称完后容量瓶中加入30mL甲醇，放置于超声清洗器中，超声3min溶解完全。后静置冷却至室温，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，取1mL到进样小瓶备用。

1.4.2 试样溶液的配制

用万分之一天平准确称取36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂0.5g(精确至0.0001g)到50mL容量瓶。称完后容量瓶中加入30mL甲醇，放置于超声波清洗器中，超声5min至溶解完全。后静置冷却至室温，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，以0.45μm滤膜过滤，取1mL到进样小瓶备用。

1.4.3 测定

在以上条件下，待仪器平稳后，按照标样、试样、试样、标样的顺序进样，高效液相色谱分析数据。

1.4.4 计算

将重复测得的两针样品及样品前后两针标样的峰面积分别进行平均计算，按如下公式计算丙环唑和咪鲜胺的质量分数(X)，由于丙环唑是2个峰，因此丙环唑的定量是用2个峰面积相加的和来计算。

式中，A1为标样中丙环唑(咪鲜胺)峰面积平均值；A2为样品中丙环唑(咪鲜胺)峰面积平均值；m1为丙环唑(或咪鲜胺)标样的质量，g；m2为样品的质量，g；P为标样中丙环唑(咪鲜胺)质量分数，%。

2 结果分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的确定

将丙环唑和咪鲜胺标样溶液，经过Agilent1100高效液相色谱仪的DAD检测器进行紫外光谱扫描，得到丙环唑和咪鲜胺的紫外吸收光谱图，扫描结果见图2、图3。由图2、图3可见，丙环唑和咪鲜胺在225nm波长下均有较好吸收，且干扰较少，故本试验选择225nm为检测波长。

图2 丙环唑紫外吸收光谱图

图3 咪鲜胺紫外吸收光谱图

2.1.2 流动相的选择

为了实现丙环唑和咪鲜胺的有效分离，根据丙环唑和咪鲜胺两化合物的特点，对甲醇和水按不同比例，在色谱柱上进行选择比较。当甲醇和水的体积比为60∶40、流动相流速为1.0mL·min-1时，丙环唑和咪鲜胺标准品可以有效分离，且基线平稳，峰型对称，见图4。但在此条件下分离36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂时，丙环唑A和样品中杂质不能完全分离，见图5。调整流动相比例，甲醇和水体积比为58∶42、流动相流速为1.0mL·min-1时，丙环唑和咪鲜胺可以和样品中杂质完全分离，获得满意结果，标准品见图6，样品分离图见图1。由此分析结果可见，在色谱条件的选择，可根据实际样品的分析情况，调整流动相比例，节约分析时间，减少分析成本。

图4 甲醇∶水=60∶40(V/V)条件下丙环唑和咪鲜胺标准品高效液相色谱图

图5 甲醇∶水=60∶40(V/V)条件下36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂的高效液相色谱图

图6 甲醇∶水=58∶42(V/V)条件下丙环唑和咪鲜胺标准品高效液相色谱图

2.2 方法线性关系的测定

用万分之一天平称取丙环唑标样0.01g、0.02g、0.03g、0.06g、0.08g(精确至0.0001g)，咪鲜胺标样0.02g、0.04g、0.06g、0.08g、0.10g(精确至0.0001g)，分别至50mL容量瓶中，加入一定量的甲醇超声溶解，再冷却至室温，定容到刻度摇匀。得到丙环唑和咪鲜胺的一系列标准溶液。按上述操作条件进行测定。丙环唑在0.00022～0.00159g·mL-1、咪鲜胺在0.00040～0.00201g·mL-1有良好线性关系，分别以丙环唑和咪鲜胺的浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标做图，得到丙环唑线性方程为y=7621173.8080x+1830.1918，R2为0.9994，见图7；咪鲜胺线性方程为y=23183046.58x-501.221，R2为0.9992，见图8。结果表明，该方法条件下，检测丙环唑和咪鲜胺的线性关系结果满意。

图7 丙环唑标准溶液线性图

图8 咪鲜胺标准溶液线性图

2.3 方法精密度测定

用万分之一天平分别称取同一批次36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂6个样品，用1.4.2过程处理样品，按2.1色谱操作条件下进行分析获得结果，丙环唑和咪鲜胺的标准偏差分别为0.048、0.141，变异系数分别为0.47%、0.55%，见表1。数据表明，该方法条件下的精密度和重现性都很好。

表1 方法的精密度实验

2.4 方法准确度测定

用万分之一天平分别称取已知含量的36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂(丙环唑含量10.10%、咪鲜胺含量25.66%)样品5份，并在称取的5份样品中分别添加一定数量标准品。在上述操作条件下进行测定，测得丙环唑的加标回收率为98.52%～100.83%，平均加标回收率为99.56%；咪鲜胺的加标回收率为98.01%～101.20%，平均加标回收率为99.41%，见表2。数据表明，该方法条件下的回收率和准确度都很高。

表2 方法的准确度实验

3 结论

本方法的试验数据表明，在该操作条件下同时测定36%丙环唑·咪鲜胺悬浮剂的丙环唑和咪鲜胺，精密度高、准确度高，分离效果都很好，并且经济环保。该方法是产品日常检验较为理想的分析方法。本方法可以用于农药企业对于该类农药生产过程中的质量控制，为农药质量安全提供技术保障。