猪细小病毒病灭活疫苗稳定性研究报告

李应鹤，宋 扬，徐 刚，李 贽，于 镭

（哈药集团 生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

猪细小病毒病是危害全球养猪业的三种重要传染病之一，给养猪业造成了巨大的经济损失[1]。因此，为了预防和控制这类疾病，研发安全、高效的疫苗是最主要的解决途径。哈药集团生物疫苗有限公司试制的猪细小病毒病灭活疫苗（L株，悬浮培养）是一种含有猪细小病毒L株抗原的灭活疫苗，为了探讨其稳定性，将制备的3批灭活疫苗置于2～8℃环境中保存，分别于保存3、6、9、12、18和24个月后，按照现行《中国兽药典》要求进行疫苗性状、无菌性和效力等检验[3]，来确定疫苗的保存期，以期为养殖户应用到安全、高效的疫苗提供保证。

1 材料

1.1 疫苗

猪细小病毒病灭活疫苗（L株，悬浮培养），批号为201401、201402、201403，由哈药集团生物疫苗有限公司制备。

1.2 红细胞凝集抑制抗原

猪细小病毒L株，批号为PPV-HI Ag-201401，红细胞凝集价为1∶512，规格为1.0 mL·瓶-1，由哈药集团生物疫苗有限公司制备和提供。

1.3 红细胞悬液

0.5%豚鼠红细胞悬液，按现行《中国兽药典》进行制备。

1.4 试验动物

350～400 g成年豚鼠（猪细小病毒HI抗体不高于1∶8），由哈药集团生物疫苗有限公司实验动物中心提供。

2 方法

2.1 性状检测

将实验室3批制品于2～8℃保存3、6、9、12、18、24个月后取样，对其外观、剂型、稳定性和黏度按现行《中国兽药典》附录进行检测。

2.2 无菌检验

将实验室3批制品于2～8℃保存3、6、9、12、18、24个月后取样，按现行《中国兽药典》进行无菌检验。

2.3 效力检验

将实验室3批制品于2～8℃保存3、6、9、12、18、24个月后取样，对体重350～400 g、猪细小病毒HI抗体效价低于1∶8的豚鼠5只进行肌肉注射疫苗，0.5 mL·只-1。28 d后连同条件相同的未注射对照豚鼠2只，采血，测定HI抗体效价[2]。

3 结果与分析

3.1 性状检验结果

疫苗性状检验结果见表1。

表1 实验室3批制品2～8℃保存不同时间性状检验结果

由表1可知，实验室3批制品在2～8℃保存24个月，外观为粉白色乳状液；水包油包水剂型；3 000 r/min离心15 min，管底析出水相均不超过0.5 mL；黏度符合规定。

3.2 无菌检验结果

疫苗无菌检验结果见表2。

表2 实验室3批制品2～8℃保存不同时间无菌检验结果

由表2可知，将实验室制备的3批猪细小病毒病灭活疫苗接种于T.G、G.A和G.P培养基上，2～8℃保存24个月后进行观察，结果培养基内均无细菌、霉菌等杂菌的污染，比较纯净，与保存当日无明显差异，表明实验室制备的疫苗比较纯净、无菌。

3.3 效力检验结果

疫苗效力检验结果见表3。由表3可知，将实验室3批制品在2～8℃保存24个月后，分别测定猪细小病毒HI抗体效价。结果免疫豚鼠猪细小病毒HI抗体效价均不低于1∶64，与保存当日无明显差异。对照组猪细小病毒血清抗体均为阴性。

表3 实验室3批制品2～8℃保存不同时间效力检验结果

4 讨论与结论

将制备的3批猪细小病毒病灭活疫苗（L株，悬浮培养）制品置于2～8℃环境中保存，分别于保存3、6、9、12、18和24个月后，按照现行《中国兽药典》要求进行疫苗性状、无菌性和效力等检验。从表1结果可以看出各组性状稳定，黏度符合规定。表2检测结果表明疫苗纯净、无菌。表3结果中HI抗体效价稳定，免疫豚鼠猪细小病毒HI抗体效价均不低于1∶64结果，均符合标准。根据试验结果并确保猪细小病毒病灭活疫苗的质量，将本产品置2～8℃保存有效期暂定为18个月。