溃疡性结肠炎组织中TET2的表达水平与患者预后的关系

荆晓娟 龙晓奇

溃疡性结肠炎(UC)属于炎症性肠病，多表现为腹痛、腹泻或黏液脓血便等，严重影响人们的生活和健康[1]。目前治疗UC的药物主要有5-氨基水杨酸、柳氮磺吡啶和糖皮质激素等，虽然疗效较好，但仍有部分患者易复发，严重影响患者的预后情况[2]。探究有效评估UC患者预后的生物标志物具有重要意义，其不仅可预测UC的复发风险，还可帮助临床医师及时制定有针对性的干预方案。DNA甲基胞嘧啶双加氧酶10-11易位2(TET2)是一种脱甲基酶，可参与恶性肿瘤[3-5]、动脉粥样硬化[6]和炎性疾病[7]等的发病过程。研究表明，TET2可靶向Toll样受体4(TLR4)/MAPK信号转导通路和TAK1结合蛋白2的启动子去甲基化，促进J774.1细胞分泌IL-1β[8]；TLR4/MAPK信号转导通路和IL-1β均与UC的发病、进展关系密切[9-11]。由此推测，TET2通过上述机制参与了UC的进展过程，其或可作为评估UC患者预后的潜在生物标志物。目前有关TET2与UC患者预后关系的报道较少，本研究通过检测UC组织中TET2的表达水平，并分析其与UC患者预后的关系，以期为UC的预后评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年10月至2019年10月在遂宁市中心医院就诊的102例UC患者作为研究对象。纳入标准：(1)根据《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)》[12]诊断为UC；(2)年龄>18岁；(3)能够配合本次研究且病历资料完整；(4)签署了知情同意书。排除标准：(1)除UC外，伴有其他自身免疫性疾病；(2)肝功能或肾功能异常，或伴有恶性肿瘤；(3)就诊前1个月内患有急性感染性肠炎。102例UC患者中，男性62例，女性40例，年龄20～37岁，平均年龄为(30.00±3.80)岁，平均BMI为(23.96±2.66)kg/m2，改良Mayo评分为(5.92±1.75)分，IL-1β表达水平为(3.87±0.82)pg/mL，红细胞沉降率(ESR)为(15.20±2.92)mm/h。有37例患者的初始治疗方案中包含糖皮质激素。

1.2 TET2水平检测

采用蛋白质印迹法检测UC组织中TET2的表达水平。使用RIPA裂解缓冲液(放射免疫沉淀)裂解UC组织，获取组织总蛋白，使用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白质定量；使用10% SDS-PAGE分离胶进行电泳实验，直至跑胶完成，然后转膜；使用脱脂奶粉室温封闭1 h后滴加兔抗人TET2多克隆抗体(购自武汉菲恩生物科技有限公司)和抗β-actin单克隆抗体(购自武汉益普生物科技有限公司)，4 ℃孵育过夜；次日滴加山羊抗兔二抗，室温下孵育1 h；使用化学底物发光液显影。应用ImageJ软件读取实验条带的灰度值。

1.3 预后评估

以UC达标治疗的目标评价预后，若12个月内治疗达标且未复发、无严重并发症(结肠大出血、中毒性巨结肠、黏膜发育异常或癌变等)或接受切除手术治疗则视为预后良好；反之，则视为预后不良。UC达标治疗指临床缓解和内镜缓解[13]。临床缓解指患者自我报告无直肠出血情况发生，且排便次数正常；内镜缓解指改良Mayo评分为0～1分。改良Mayo评分包括排便次数、便血、内镜发现和医师总体评价4部分内容，评分标准：0分指患者排便次数正常，无血便，内镜下无活动性病变或正常，总体评价正常；1分指较正常排便次数增加1～2次，少于一半时间内出现粪便混血，内镜下发现轻度病变，总体评价为轻度；2分指较正常排便次数增加3～4次，大部分时间内未出现粪便混血，内镜下发现中度病变，总体评价为中度；3分指较正常排便次数增加5次及以上，粪便一直混血，内镜下发现重度病变，总体评价为重度[14]。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 预后良好组和预后不良组的TET2表达水平比较

102例UC患者中有41例(40.20%)预后不良，其中38例(37.25%)治疗达标后复发，3例(2.94%)治疗未达标。根据预后情况将患者分为预后良好组(n=61)和预后不良组(n=41)。预后良好组TET2的表达水平低于预后不良组，差异有统计学意义(t=8.157，P<0.001)，见图1。

图1 预后良好组和预后不良组的UC组织中TET2水平 A TET2表达水平的蛋白质印迹图 B 两组TET2的表达水平比较

2.2 TET2水平与UC患者临床病理特征的关系

以102例UC患者的年龄、BMI、IL-1β表达水平和ESR的中位数作为分界点进行分组。结果显示，不同年龄、性别、BMI、病变位置、改良Mayo评分和ESR的UC患者TET2表达水平相比较，差异均无统计学意义(P均>0.05)。与IL-1β≤4.10 pg/mL的UC患者相比较，IL-1β>4.10 pg/mL者的TET2表达水平较高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。Pearson相关性分析结果显示，UC患者的TET2与IL-1β表达水平呈正相关关系(r=0.259，P=0.009)。

表1 TET2水平与UC患者临床病理特征的关系

2.3 预后良好组与预后不良组的临床病理特征比较

两组的年龄、性别、BMI、病变位置、ESR和初次治疗应用糖皮质激素的比例相比较，差异均无统计学意义(P均>0.05)。与预后良好组比较，预后不良组的改良Mayo评分和IL-1β表达水平均较高，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表2。

表2 预后良好组与预后不良组的临床病理特征比较

2.4 影响UC患者预后的因素

将单因素分析结果中P<0.10的因素[改良Mayo评分、IL-1β、TET2和初次治疗应用糖皮质激素(未应用=0，应用=1)]作为自变量，将UC患者预后情况作为因变量纳入多因素logistic回归分析，结果显示改良Mayo评分、IL-1β、TET2和初次治疗应用糖皮质激素均是UC预后的独立危险因素(P<0.05)，见表3。

表3 影响UC患者预后的多因素logistic回归分析

2.5 预后模型构建及评价

采用多因素logistic回归模型分析法构建由改良Mayo评分、IL-1β、初次治疗应用糖皮质激素组成的评估UC患者预后的模型，公式：F=-3.508+2.447×改良Mayo评分+1.608×IL-1β(pg·mL-1)+2.694×初次治疗应用糖皮质激素，将其命名为模型A；构建由改良Mayo评分、IL-1β、TET2、初次治疗应用糖皮质激素组成的评估UC患者预后的模型，公式：F=-6.211+3.355×改良Mayo评分+1.717×IL-1β(pg·mL-1)+3.450×TET2+3.993×初次治疗应用糖皮质激素，将其命名为模型B。模型A评估UC患者预后的ROC曲线下面积(AUC)、敏感度和特异度分别为0.763(95%CI：0.672～0.853)、68.29%和75.41%，模型B评估UC患者预后的AUC、敏感度和特异度分别为0.911(95%CI：0.853～0.970)、78.05%和90.16%。模型B评估UC患者预后的效能高于模型A，差异有统计学意义(Z=3.492，P=0.001)，见图2A。模型A和模型B的校准曲线均接近理想曲线，见图2B、2C。当阈值概率>10%时，模型B评估UC患者预后的净收益高于模型A，见图2D。

图2 模型A和模型B的评价 A 模型A和模型B评估UC预后的ROC曲线 B 模型A的校准曲线 C 模型B的校准曲线 D 模型A和模型B的风险效益决策曲线

3 讨论

UC是一种终身性疾病，无论药物治疗还是手术治疗均无法根治，多数患者易反复发作[15]。因此，探究预测UC复发的生物标志物具有重要意义。目前应用于评估UC患者预后的生物标志物包括C反应蛋白、粪钙卫蛋白等，但上述指标均存在一定不足，如一项荟萃分析结果显示，粪钙卫蛋白预测UC复发的敏感度和特异度分别为78%和73%，这提示其评估效能欠佳，仅可用于辅助评估预后[16]。本文探究了TET2表达水平与UC患者预后的关系，以期为UC的预后评估提供参考。

本研究中UC患者的预后不良发生率为40.20%，与既往报道相似[17-18]。本研究结果显示，预后良好组TET2的表达水平低于预后不良组，提示TET2的表达水平与UC患者的预后有关。多因素logistic回归分析结果显示，TET2是UC患者预后的独立危险因素。其机制可能包括：(1)TET2靶向TLR4/MAPK信号转导通路和TAK1结合蛋白2的启动子去甲基化，促进IL-1β分泌[8]，本研究结果亦表明TET2与IL-1β呈正相关关系，可能通过上述机制促进炎性反应，从而影响预后；(2)NF-κB在UC进展过程中发挥重要作用，TET2可通过NF-κB依赖性途径促进炎性反应[19]；(3)UC是一种自身免疫性疾病，其发病和进展与自身免疫系统功能减弱有关，而TET2可调节机体自身的免疫功能，从而影响UC患者的预后[20]。此外，本研究结果表明，改良Mayo评分、IL-1β和初次治疗应用糖皮质激素是UC患者预后的独立危险因素，与既往研究结果一致[21-22]。

鉴于单指标评估预后存在一定不足，本研究构建了模型A和模型B，并比较两个模型的评估效能和临床应用价值，结果显示模型B评估UC预后的效能高于模型A；当阈值概率>10%时，模型B评估UC患者预后的净收益高于模型A。这提示基于TET2构建的模型对于评估UC患者的预后情况具有一定价值。

综上所述，UC组织中TET2的表达水平与患者预后有关，基于TET2构建的模型可应用于评估UC患者的预后情况。本课题组今后将开展基础研究，进一步探究TET2影响UC患者预后的具体病理、生理机制。