猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、圆环病毒病等主要疫病的调查分析

李志贤 禹婷婷 黄志明 李而珍 徐宇嘉 虞与理 王孝德*

（1贺州市动物疫病预防控制中心，广西贺州 542899；2贺州市八步区贺街镇农业农村服务中心，广西贺州 542802）

猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒 （PRV） 以及猪圆环病毒（PCV）一直是危害生猪养殖环节中的主要病原体，制约生猪养殖业发展。当前4种疫病的临床症状逐渐非典型化，继发感染与混合感染现象普遍发生[1]。了解这4种病毒病的流行情况，可以给广大养猪场（户）制定合理的免疫程序、运用合理的猪病防控措施提供参考与帮助。在猪病防控中，关键是找出有效应对动物疫病预防控制的方法，从而净化生物环境，提高生产效率，增加养殖户效益。本研究对2018年3月至2019年12月在广西贺州市无害化处理场采集的病死猪样品进行了病原学调查并初步分析不同猪病的感染情况，以期为猪病的区域防控提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 检测样品

2018年3月至2019年12月在贺州市无害化处理场共采集病死猪样品352份。将当日新鲜的病死猪解剖，无菌采集肾脏、脾脏、肝脏、扁桃体、淋巴结、喉头、肺脏等组织后，及时冷冻保存。

1.2 检测仪器

ABI QuantStudio5荧光PCR仪

1.3 检测试剂

猪瘟病毒通用型实时荧光RT-PCR检测试剂盒、猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光RT-PCR检测试剂盒、猪伪狂犬病毒实时荧光PCR检测试剂盒、猪圆环病毒1型实时荧光PCR检测试剂盒、猪圆环病毒2型实时荧光PCR检测试剂盒、猪圆环病毒3型实时荧光PCR检测试剂盒等。柱式DNA核酸提取试剂盒、柱式RNA核酸提取试剂盒。以上试剂盒均购自哈尔滨元亨生物药业有限公司。

1.4 方法

采用荧光定量PCR方法对采集的病死猪样品进行病毒核酸检测。检测步骤与结果依照试剂盒说明书进行操作和判定，记录试验结果并进行分析。

CSFV、PRRSV、PCV1结果判定：阳性对照CT值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无CT值并且无特定扩增曲线，试验结果成立。被检样品CT值≤30并出现特定的扩增曲线判为阳性；被检样品30＜CT值＜37并出现特定的扩增曲线，判为可疑，需重新取样进行结果判定，如仍是可疑，则判定为阳性；被检样品CT值≥37时，超过本方法检测灵敏度范围，判定为阴性。对于某些未呈现S型曲线，但样品本底较高的应为阴性。

PRV结果判定：阳性对照CT值≤30并出现特定的扩增曲线，阴性对照无CT值并且无特定扩增曲线，试验结果成立。被检样品CT值≤30并出现特定的扩增曲线判为PRV阳性；被检样品30＜CT值＜35并出现特定的扩增曲线，判为可疑，需重新取样提取DNA，扩增后进行结果判定，如仍是可疑，则判定为阳性；被检样品CT值≥35时，超过本方法检测灵敏度范围，判定为阴性。对于某些未呈现S型曲线，但样品本底较高的应判定为阴性。

PCV2/PCV3结果判定：阳性对照CT值≤30并出现特异性扩增曲线，阴性对照无CT值并且无特异性扩增曲线，试验结果成立。被检样品若FAM荧光信号CT值≤30并出现特异性扩增曲线判为PCV2阳性；被检样品若HEX荧光信号CT值≤30并出现特异性扩增曲线判为PCV3阳性；被检样品30＜CT值＜36并出现特异性扩增曲线，判为可疑，需重检测，如仍是可疑，则判定为阳性；被检样品CT值≥36时，超过本方法检测灵敏度范围，判定为阴性。对于某些未呈现S型曲线，但样品本底较高的应判定为阴性。

2 结果与分析

2.1 不同病毒的检测结果

由表1可知，除2018年一季度外，其他不同季度均存在4种病毒不同程度的感染。从2018—2019年2年的合计数据看，猪瘟病毒的感染阳性率为3.98%，猪繁殖与呼吸综合征病毒的阳性率为27.84%，猪伪狂犬病毒的阳性率为2.56%，猪圆环病毒的阳性率为58.52%。猪圆环病毒1型的阳性率为3.41%，猪圆环病毒2型的阳性率为53.98%，猪圆环病毒3型的阳性率为7.95%。由此可知，猪圆环病毒的阳性率最高，且猪圆环病毒中2型的阳性率最高，为53.98%。其次是猪繁殖与呼吸综合征病毒，感染率为27.84%，感染率最低的为猪伪狂犬病病毒，感染率为2.56%。说明贺州地区的养猪场（户）中存在CSFV、PRRSV、PRV、PCV 4种病毒的散发性流行以及较高的猪圆环病毒2型的感染情况。

表1 不同病毒的检测结果

2.2 4种病毒混合感染的统计结果

由表2可知，猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒混合感染率最高，为14.20%，猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的混合感染率为0.57%，猪瘟病毒和猪圆环病毒的混合感染率为2.27%，猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病毒的混合感染率为0.28%，猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒3种病毒的混合感染率为0.28%，猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪圆环病毒4种病毒的混合感染率为0.57%，其余的混合感染率未检出。说明贺州地区存在4种病毒混合感染的情况，以猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪圆环病毒的混合感染最突出。也存在少量的多种病毒同时感染的情况。

表2 4种病毒混合感染的统计结果

2.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪圆环病毒不同基因型的混合感染统计结果

由表3可知，猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的混合感染率最高，为13.64%，猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒1型、3型的混合感染率分别为1.14%、1.99%。可见猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒不同基因型的混合感染中以猪圆环病毒2型的混合感染为主。

表3 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒不同基因型的混合感染统计结果

2.4 猪圆环病毒的不同基因型间的混合感染统计结果

由表4可知，猪圆环病毒1型、2型混合感染的感染率为2.56%，2型、3型混合感染的感染率为4.26%，其余猪圆环病毒1型与3型以及猪圆环病毒3个不同基因型间的混合感染情况未检出。说明贺州市猪圆环病毒的感染情况中，存在一定程度2种亚型的混合感染。

表4 猪圆环病毒的不同基因型间的混合感染统计结果

3 讨论

3.1 猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪圆环病毒病等4种猪病以PCV2感染率最高

本次对2018—2019年贺州市无害化处理场进行采样监测共采集的352份病死猪样品中，显示PCV病毒核酸阳性检出率最高，达58.52%。其中PCV2病毒核酸阳性检出率最高，为53.98%。该市无害化处理场病死猪中检测出的PCV2病毒核酸阳性率比王怀禹等[1]在2018—2019年对四川南充地区规模化猪场的152份临床病料样品PCV2病原学检出率（22.37%）和吴瑗等[2]在2007—2012年对浙江省及周边地区不同猪场中猪圆环病毒2型的监测结果PCV2阳性率（41.4%）都高。检测结果与李玲等[3]于2008—2011年期间共采集福建省、江西省、广东省、安徽省、浙江省、河南省、河北省、广西壮族自治区、内蒙古自治区、上海市、江苏省、山西省共12个省（市、区）的健康猪群和发病猪群共452份样品中，有354份样品检测为PCV2阳性，感染率高达78.3%的检测结果要低；与蒋新华等[4]对2013—2017年采自江西地区的1 082份样品进行检测，有610份为PCV2阳性，总阳性率为56.4%的检测结果接近。说明PCV2在我国养猪场的流行较普遍。猪圆环病毒病没有被国家列为强制免疫病种，大多数养殖场（户）不重视猪圆环病毒的免疫工作或免疫效果不好，导致疫病散发、多发。因此，养猪场应加强猪圆环病毒疫苗和免疫程序的研究，并加强猪场生物安全防护措施，减少PCV2病毒的感染。

3.2 PCV2与PRRSV的混合感染率最高

目前，在猪病流行日益复杂，多病原混合、继发、协同感染普遍的情况下，贺州地区养猪场（户）的猪群以PCV2与PRRSV的混合感染率最高。从4种病毒混合感染情况分析发现，该市存在多种病毒的混合感染，且混合感染类型较多，情况复杂，其中猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染较高，典型混合感染率为13.64%。与于学武[5]报道的对2008—2010年的2 813份发病猪群组织病料进行的病原学检测，PCV2与PRRSV总体混合感染率达13.97%的结果相近；与宋玉慧[6]报道的2013—2015年采集来自河南各地区58个规模养殖场猪病料样品146份，在混合感染中多以二重感染为主，其中CSFV与PRRSV混合感染率最高，占混合感染的7.53%的结果有一定差别。梁彭帅[7]报道PCV2与PRRSV混合感染后2种病毒在猪体内具有相互促进增殖的作用，而且协同抑制感染猪的免疫功能，因此二者的混合感染具有更强的致病性。因此在预防和诊断过程中要给予足够的重视。“预防为主，防治结合”，养猪场需通过完善饲养管理、强化生物安全等措施预防和控制病原入侵，有效防止病毒的感染，保障养猪场健康发展。