益智清心颗粒对自发性高血压大鼠主要安全性指标的影响

郭曼萍，赵俊男，施伟丽，陈 瑶，徐凤芹，丛伟红

益智清心颗粒源于清宫寿桃丸，为国医大师陈可冀院士临床治疗高血压、认知障碍等疾病的经验方。清宫寿桃丸由人参、天冬、麦冬、枸杞子、地黄、当归、分心木等组成，是乾隆皇帝的宫廷保健养生秘方，陈可冀院士在20世纪80年代主持挖掘清代宫廷医药档案时将其整理并用于大众。相关研究表明，清宫寿桃丸治疗老年认知障碍、高血压、冠心病、糖尿病、脂代谢异常、慢性肾功能不全等方面具有较好的疗效[1-6]。

中药的有效性与安全性问题一直是关注的热点。目前，临床常借助常规血液学分析、血液生化检测、尿样分析和病理学检查等判断中药的安全性[7]，血液中溶血相关指标、肝肾功能相关指标是常用的安全性评价指标。本研究观察对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)给予益智清心颗粒干预11周后外周血红细胞、血红蛋白、胆红素、肝肾功能等指标改变，探讨用药安全性，以期为临床应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料及仪器 2 mL乙二胺四乙酸(EDTA)K3采血管，生产批号D160433W；5 mL血清促凝管，生产批号A16013WC，由西苑医院提供；全自动生化分析仪(瑞士罗氏公司Cobas8000)、全自动血液分析仪(日本东亚SYSMEX株式会Sysmex XE-5000)由西苑医院检验科提供。

1.2 实验动物 12周龄无特定病原体(SPF)级Wistar Kyoto(WKY)大鼠12只，SPF级SHR大鼠60只，雌雄各半，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。SPF级动物房适应性饲养3 d后分为6组：对照组(WKY大鼠)、模型组(SHR大鼠)、厄贝沙坦+多奈哌齐组(SHR大鼠)、益智清心颗粒低剂量组(SHR大鼠)、益智清心颗粒中剂量组(SHR大鼠)、益智清心颗粒高剂量组(SHR大鼠)，每组12只，雌雄各半。给予规律光照(昼夜各12 h)，自由饮食饮水，环境温度(20±2)℃，相对湿度45%～70%。

1.3 实验药物及给药方法 厄贝沙坦片(安博维)，每片0.15 g，赛诺菲(杭州)制药有限公司生产，生产批号：J20130049；盐酸多奈哌齐(安理申)，每片5 mg，卫材(中国)药业有限公司生产，生产批号：H20070181；益智清心颗粒(组成：枸杞子、益智仁等)，由中国中医科学院西苑医院制剂室提供。厄贝沙坦+多奈哌齐组按厄贝沙坦片15.50 mg/(kg·d)+盐酸多奈哌齐0.52 mg/(kg·d)灌胃给药；益智清心颗粒低剂量组、益智清心颗粒中剂量组、益智清心颗粒高剂量组分别按益智清心颗粒1.82 g/(kg·d)、3.64 g/(kg·d)、7.28 g/(kg·d)灌胃给药，模型组及对照组给予等体积生理盐水灌胃。所有大鼠均给药11周。

1.4 观察指标

1.4.1 大鼠体重 各组大鼠每周测量体重1次，观察各组大鼠体重变化。

1.4.2 大鼠溶血相关指标 实验结束后腹主动脉采血，检测血浆红细胞计数、血细胞比容、平均红细胞体积、红细胞体积分布、红细胞分布宽度；血红蛋白、平均血红蛋白含量、平均血红蛋白浓度；血清直接胆红素、间接胆红素及总胆红素水平。

1.4.3 大鼠肝肾功能指标 实验结束后腹主动脉采血，检测肝功能指标：天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ谷氨酰转肽酶(γ-GT)；检测肾功能指标：肌酐、尿酸、尿素、尿素氮。

2 结 果

2.1 药物对大鼠体重的影响 分别统计雄性和雌性大鼠体重，结果显示：与对照组比较，模型组雌鼠体重降低(P<0.01)；与模型组比较，第1周～第4周厄贝沙坦+多奈哌齐组和益智清心颗粒低剂量组、益智清心颗粒高剂量组雌鼠体重增加(P<0.01)。详见表1。与模型组比较，厄贝沙坦+多奈哌齐组和益智清心颗粒低剂量组、益智清心颗粒中剂量组、益智清心颗粒高剂量组雄鼠体重增加(P<0.05或P<0.01)。详见表2。

表1 各组雌鼠体重比较(±s) 单位：g

表2 各组雄鼠体重比较(±s) 单位：g

2.2 益智清心颗粒对溶血相关指标的影响 与对照组比较，模型组红细胞分布宽度降低(P<0.01)。详见表3。与模型组比较，益智清心颗粒低剂量组平均血红蛋白浓度降低(P<0.05)。详见表4。与对照组比较，模型组间接胆红素水平升高(P<0.05)；与模型组比较，益智清心颗粒高剂量组间接胆红素、直接胆红素、总胆红素水平降低(P<0.05或P<0.01)。详见表5。

表3 各组大鼠红细胞相关指标比较(±s)

表4 各组大鼠血红蛋白相关指标比较(±s)

表5 各组大鼠胆红素相关指标比较(±s) 单位：μmol/L

2.3 药物对大鼠肝功能的影响 与对照组比较，模型组AST、γ-GT水平升高(P<0.01)。详见表6。

表6 各组大鼠肝功能指标比较(±s) 单位：U/L

2.4 药物对大鼠肾功能的影响 与对照组比较，模型组尿素氮、尿酸水平升高(P<0.01)。详见表7。

表7 各组大鼠肾功能指标比较(±s)

3 讨 论

目前，我国中医药事业发展迅速，同时中药的安全性问题备受关注[8]。传统观念认为中药是天然的、无毒副作用，近年来发生的中草药不良反应给人们带来疑惑和忧虑，因此需要科学评价中药疗效。益智清心颗粒具有补肾生精、清心肝之火的功效，陈可冀院士临床主要用于高血压病、老年性痴呆等心脑血管疾病的治疗。相关研究表明，SHR可作为认知功能紊乱治疗药物的动物模型[9-12]。本研究以SHR为动物模型，给药11周后观察益智清心颗粒对SHR红细胞、血红蛋白、血清胆红素指标的影响，同时监测肝、肾功能相关指标。

溶血为红细胞完整性损害。红细胞功能障碍与心血管疾病严重并发症密切相关，如高血压、出血、脑卒中、心律失常和炎症，尤其是老年病人[13]。血红蛋白在血管内溶血期间从细胞释放到血浆中，通过促进血小板聚集和黏附，增加血液黏度，导致微循环功能障碍，增加外周阻力，致血压升高[14]。血清胆红素包括直接胆红素和间接胆红素，主要是由体内衰老的红细胞发生裂解释放出的血红蛋白产生[15]。机体总胆红素及直接胆红素浓度升高反映较严重的肝细胞损害[16-18]。本研究结果显示，与模型组比较，益智清心颗粒低剂量组平均血红蛋白浓度降低(P<0.05)，益智清心颗粒高剂量组胆红素相关指标水平降低(P<0.05)；提示服用益智清心颗粒未导致明显溶血反应，平均血红蛋白浓度、胆红素相关指标水平下降可能是益智清心颗粒的药效作用。

药物常见的不良反应是对肝肾功能的影响[19-20]。本研究结果显示，模型组AST、γ-GT、尿酸、尿素氮水平较对照组升高，提示随着血压升高，模型组肝肾功能出现一定损伤；益智清心颗粒组与模型组ALT、AST、γ-GT、尿素、尿素氮、肌酐、尿酸水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，提示给予益智清心颗粒治疗未加重SHR肝肾损害。

本研究中益智清心颗粒高剂量组、益智清心颗粒低剂量组雌鼠体重与益智清心颗粒高剂量组、益智清心颗粒中剂量组、益智清心颗粒低剂量组雄鼠体重较对照组升高，可能与给予益智清心颗粒治疗降低了SHR自发性活动有关[21]。

综上所述，经过11周的益智清心颗粒灌胃给药，SHR肝肾功能未见明显异常，且未发生溶血反应，说明益智清心颗粒具有一定的安全性。本研究给予益智清心颗粒治疗未发现明显不良反应，以上数据为益智清心颗粒在高血压合并认知障碍的临床应用提供了依据。