胃特安片质量标准研究*

李先飞，封传华，张 静，徐 兰，肖汉扬，李 刚

联勤保障部队第九〇八医院，江西 南昌330002

胃特安片是联勤保障部队第九〇八医院研制的非标制剂，处方由白术、川芎、厚朴、砂仁、甘草、马兰草、陈皮、黄柏等多味中药材配伍而成，具有和胃止痛、健脾消食、安神宁心等功效，临床主要用于治疗胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎等疾病［1-4］。由于白术、川芎、陈皮、黄柏为处方中的重要组成药材，本研究将建立基于薄层色谱鉴定白术、川芎及高效液相色谱测定陈皮、黄柏中橙皮苷、盐酸小檗碱含量的方法，为控制胃特安片的质量提供依据。

1 材料

1.1 仪器岛津高效液相色谱仪（包括CTO 柱温箱，SIL-10AF 自动进样器，LC-15C 泵，SPD-15C 紫外检测器）；ZF7-C 型三用紫外分析仪（上海康华生化仪器制造有限公司）；ZNCL-GS 型磁力搅拌器（上海越众仪器设备有限公司）；DZF 型系列真空干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；AUW-120D型分析天平（岛津公司）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；KQ3200E 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DFT-50 型手提式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）。

1.2 试药盐酸小檗碱（中国食品药品检定研究院，批号：110713-201212，含量以99.8% 计）；橙皮苷（中国食品药品检定研究院，批号：110721-201316，含量以99.8%计）；乙腈（高效液相色谱用，西陇化工股份有限公司，批号：1810013）；磷酸（南昌鑫光精细化工厂，分析纯，批号：201609104）；醋酸（西陇化工股份有限公司，分析纯，批号：1304011）；川芎对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120918-201411）；白术对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121272-201404）；硅胶G 板（青岛海洋化工分厂，批号：20150702）；香草醛（天津市大茂化学试剂厂，批号：20140228）；无水乙醇（西陇化工股份有限公司，批号：130201）；正己烷（天津市大茂化学试剂厂，批号：20150320）；乙酸乙酯（天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号：20111516）；甲醇（天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号：20130320）；石油醚（60～90℃，天津市大茂化学试剂厂，批号：20131128）；胃特安片（医院自制，批号：150501、150512、151218）；白术、枳实、茯苓、川芎、黄芩等药材均购自汇仁医药有限公司，经江西中医药大学曹岚教授鉴定为正品；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 川芎 称取本品粉末5 g，加乙醚30 mL，加热回流提取60 min，过滤后将所得滤液挥干，用2 mL 乙酸乙酯溶解残渣，作为供试品溶液。取0.5 g川芎对照药材，按照上述方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各2 μL，点于硅胶G 薄层板上，用正己烷-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干后置于紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。见图1。

图1 川芎的薄层色谱图

2.1.2 白术 取本品粉末5 g，加正己烷20 mL，超声处理15 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取白术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2015 年版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（50∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷含5%香草醛的10%硫酸醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。见图2。

图2 白术的薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件及系统适应性 色谱柱：迪马ODS2 C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（19∶81），流速：1 mL/min，检测波长：265 nm，柱温：30℃，进样量：10 μL，理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于5000。在此色谱条件下，其他成分无干扰。见图3。

图3 胃特安片HPLC图谱

2.2.2 对照品溶液制备［5］取盐酸小檗碱对照品、橙皮苷对照品适量，精密称定，置于10 mL量瓶中，加适量甲醇超声，溶解并定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液，浓度分别为0.5 mg/mL的盐酸小檗碱和1.4 mg/mL的橙皮苷，备用。

2.2.3 胃特安片溶液制备 取胃特安片适量，研碎，精密称取胃特安片细粉约0.25 g，加适量甲醇，超声提取60 min，静置并冷却至室温，过滤，滤液转至50 mL 量瓶中，用适量甲醇定容至刻度，摇匀，测定前用微孔滤膜过滤，取续滤液，进样［6］。

2.2.4 阴性样品溶液制备 按处方比例称取药材（黄柏、陈皮除外），置70℃烘箱中烘干，粉碎，按照“2.2.3”项中制备方法制备阴性样品溶液。

2.2.5 标准曲线绘制 分别精密吸取混合对照品溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀。精密吸取各对照品溶液10 μL 注入高效液相色谱仪，照“2.2.1”项下色谱条件测定。以盐酸小檗碱浓度对其峰面积绘制标准曲线。盐酸小檗碱线性回归方程为：Y=109 637X-63 435，R2=0.9995；以橙皮苷浓度对其峰面积绘制标准曲线，橙皮苷的线性回归方程为：Y=254 369X-10 011，R2=0.9992。结果表明盐酸小檗碱在5～250 μg/mL 范围内线性关系良好；橙皮苷在14～700 μg/mL范围内线性关系良好。

2.2.6 定量限和检测限 将混合对照品溶液（盐酸小檗碱浓度0.5 mg/mL）用流动相稀释，按照“2.2.1”项下色谱条件测定。结果显示盐酸小檗碱对照品最低定量限为5 μg/mL（S/N≥10），检测限为2 μg/mL（S/N≥3）。

2.2.7 精密度试验 取胃特安片供试品溶液，连续进样6 次，每次进样量为10 μL，按照“2.2.1”项下色谱条件测定，计算盐酸小檗碱峰面积RSD 值为1.87%，橙皮苷峰面积RSD 值为1.76%。结果表明精密度良好，符合含量测定的基本要求。

2.2.8 稳定性试验 取胃特安片供试品溶液，于0、2、4、6、8、12、24 h精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，按照“2.2.1”项下色谱条件测定，计算盐酸小檗碱峰面积RSD 值为1.75%，橙皮苷峰面积RSD 值为1.82%，结果表明，盐酸小檗碱和橙皮苷在24h内基本稳定。

2.2.9 重复性试验 精密称取胃特安片（批号：150501）5 份，按照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取10 μL 注入高效液相色谱仪，按照“2.2.1”项下色谱条件测定，计算盐酸小檗碱峰面积RSD 值为1.68%，橙皮苷峰面积RSD 值为1.54%。结果表明该方法重复性较好。

2.2.10 加样回收率 精密称取胃特安片细粉6份，每份约0.4g，精密称定并置于量瓶中，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液和橙皮苷对照品溶液适量，按照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取10 μL 注入高效液相色谱仪，按照“2.2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表1—2。

表1 盐酸小檗碱的加样回收率试验结果

表2 橙皮苷的加样回收率试验结果

2.2.11 样品含量测定 根据已建立的盐酸小檗碱含量测定方法，取3 批胃特安片，按照“2.2.3”项下方法制备胃特安片供试品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件测定盐酸小檗碱的峰面积，计算胃特安片中盐酸小檗碱的含量，结果显示3批胃特安片样品（150501、150512、151218）中每片含盐酸小檗碱分别为45.18、45.09、45.24 μg；橙皮苷分别为1.3496、1.3513、1.389 mg。

3 讨论

因陈皮、黄柏、白术、川芎分别为胃特安片中的君药和臣药，故本研究采用高效液相色谱法对陈皮、黄柏中主要成分橙皮苷、盐酸小檗碱进行测定，采用薄层色谱法对白术、川芎进行鉴别，达到有效控制胃特安片质量的目的，从而保障临床用药的安全性。白术鉴别过程中发现，以新近上市的白术饮片为原料制备而成的胃特安片其特征斑点更明显，而常温保存时间超过12 个月的胃特安片中白术的特征斑点几乎消失，可能与白术特征斑点的物理特性（如挥发性、稳定性等）有关［5-9］。

本研究通过参考相关文献［10-14］及《中华人民共和国药典》（2015 版）［15-17］中关于盐酸小檗碱含量测定的色谱条件，同时根据实际情况，针对性优化流动相，最终确定以乙腈-0.1% 磷酸溶液（19∶81）为流动相，可将目标成分盐酸小檗碱和橙皮苷与其他物质有效分离，其中加入0.1% 的磷酸，可防止出现拖尾现象，从而获得较好的色谱峰。

本研究采用薄层色谱法鉴定胃特安片中白术、川芎，采用高效液相色谱法同时测定胃特安片中盐酸小檗碱和橙皮苷的含量，专属性强，阴性样品无干扰，能够为胃特安片的质量控制提供参考。