散痹脑力宝中肉桂醛、丁香酚的薄层色谱鉴别及栀子苷HPLC含量测定

祁峰 陈苏依勒 布音 额尔敦巴图 苏日嘎

摘要：目的 提高散痹脑力宝的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别处方中的肉桂醛及丁香酚，采用高效液相色谱法测定处方中栀子苷的含量。结果 色谱斑点清晰，无明显干扰斑点，栀子苷回收率含量为98%～103%。结论 实验所用方法可以用于控制散痹脑力宝的质量。

关键词：质量控制;薄层鉴别;栀子苷;含量测定

【中图分类号】R927 【文献标识码】B 【文章编号】1673-9026（2021）13-01

引言：散痹脑力宝为阿拉善盟蒙医医院（阿拉善盟蒙医药研究所）常用院内制剂，由山沉香、栀子、肉桂、丁香等二十九味药组成。主要用于“黑脉病”，“白脉病”，“萨病”，肌肉痉挛，经络不畅，筋脉拘挛，风湿痹痛，关节伸屈不利等症。为此，本文采用薄层色谱法对方中肉桂的主要成分肉桂醛和丁香的主要成分丁香酚进行实验，采用HPLC法测定了该方中栀子的有效成分栀子苷的含量。取得了较为满意的结果，具体实验如下：

1.仪器与试药

1.1仪器：岛津LC-20型高效液相色谱仪，MettlerToledo XS-205型十万分之一天平，MettlerToledo XP-6型百万分之一天平。

1.2试剂与试药：桂皮醛对照品（批号：110710-201016）中国食品药品检定研究院，丁香酚对照品（批号：110725-200711）中国食品药品检定研究院，栀子苷对照品（批号：110749-201115，供含量测定用）中国食品药品检定研究院;硅胶G薄层层析板（批号：130708）天津思利达色谱技术开发公司生产;散痹脑力宝（批号：20150508-054，20151103-089，20160225-017）由阿拉善盟蒙医医院（阿拉善盟蒙医药研究所）提供;乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2薄层色谱的鉴别[1]

2.1肉桂醛的鑒别[2]取三批散痹脑力宝供试品及阴性样品各2.3g，加乙醇20ml，冷浸20分钟，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇作为供试品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液2～5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（17∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰（（图1A和图1B））。

2.2丁香酚的鉴别[3]取三批散痹脑力宝供试品及阴性样品各1.6g，加乙醚10ml，振摇数分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5ml乙醚作为供试品溶液。另取丁香酚对照品，加乙醚制成每1ml含16μ1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品无干扰（图1C和图1D）。

3高效液相色谱法[4]测定含量

3.1色谱条件的选择：ODS-SP C-18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相：乙腈-水（15：85）;238nm;流速：1.0ml/min;柱温：30℃;理论板数按栀子苷峰计算，应不低于1500。

3.2供试品溶液及对照品溶液的制备

3.2.1供试品溶液及阴性对照溶液的制备：取供试品粉末0.8g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加甲醇40ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。取按处方比例并以相同工艺制备的缺栀子的阴性对照供试品，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。

3.2.2对照品溶液的制备：取栀子苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。

3.3专属性实验

按“3.1”项色谱条件分别测定，栀子苷分离效果好，阴性对照色谱图中在与栀子苷对照品以及供试品色谱图中相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对胡椒碱的测定无干扰（图2）。

3.4线性关系考察

精密称定栀子苷对照品3.734mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.2233679?g、0.3722798?g、0.52119172?g、0.67010364、0.8190156?g进样，进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果栀子苷在0.2234～0.8190?g范围内呈良好的线性关系，回归方程为：y=2E+06x-1441.8，R?=0.9999。标准曲线数据见表1。

3.5稳定性实验

取同一份供试品溶液，按“3.1”项色谱条件，分别在0h、4h、8h、12h、24h进行测定，结果栀子苷在24小时内的峰面积积分值基本稳定不变。

3.6精密度实验

分别精密吸取10ul栀子苷对照溶液，重复进样5次，测得栀子苷对照品峰面积的RSD=0.12%（n=5），表明系统精密度良好。

3.7重复性实验

取同一供试品内容物6份，各约0.8g，精密称定，分别按“3.2.1”项下方法操作，测定每份含量，计算得供试品中栀子苷的平均含量2.515mg·g-1，RSD=1.90%（n=6）;表明该方法的重复性良好。

3.8加样回收实验

分别精密称定已知栀子苷含量的供试品6份，各约0.4g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加入甲醇40ml，加入精密称定栀子苷对照品0.8006mg、0.8036mg、1.6052mg、1.6002mg、2.4038mg、2.3948mg，定容至刻度，按“3.1”项色谱条件测定每份供试品含量。结果表明：栀子苷的平均回收率为100.67%，RSD=1.78%（n=6）

3.9样品含量测定

取本品按“3.1”“3.2”项下的方法处理，三批供试品的测定结果见表2。

4小结

散痹脑力宝由山沉香、栀子、肉桂、丁香等二十九味药组成。肉桂醛、丁香酚的薄层鉴别较好，可纳入薄层鉴别质控标准。对荜拨进行薄层鉴别时，阴性样品有干扰，可能与其含有的生物碱类化合物过多有关，故文中未进行深入探讨。文中栀子苷含量测定的方法重现性好、专属性强，可为该药的质量控制提供一定的依据，也可为含栀子类蒙成药制剂的定量分析提供参考。

参考文献：

[1] 中华人民共和国药典（第四部）[S].北京：中国医药科技出版社，2020.59-60.

[2] 中华人民共和国药典中药材薄层色谱彩色图集（第一册）[S].北京：人名卫生出版社，2009.251-253.

[3]中华人民共和国药典中药材薄层色谱彩色图集（第三册）[S].北京：中国医药科技出版社，2019.82-85.

[4]中华人民共和国药典（第四部）[S].北京：中国医药科技出版社，2020.61-65.

基金项目：红花益肝丸和散痹脑力宝两种蒙药制剂质量标准项目[编号2021-（MB025）]

作者简介：祁峰，1993年4月9日，男，蒙古族，出生于内蒙古阿拉善盟阿拉善左旗，2016年9月毕业于中南民族大学，药物制剂专业，获工学学士学位。2017年1月工作于阿拉善盟蒙医医院（阿拉善蒙医药研究所）制剂中心。2019年任制剂中心药品质量检查室主任。在职期间参与自治区级课题一项，盟级课题一项，其中盟级课题蒙药扶正膏治疗白细胞减少症的临床疗效及应用研究被收入自治区科技局项目库中。