化橘红粉末饮片颗粒度适宜性研究

曾乐

摘要：为了将化橘红原饮片粉碎分级处理，研究粉碎度对质量的影响。将化橘红饮片粉碎成不同粒径的粉末，分别加相当于饮片质量15倍的水量，设置水浴温度90℃，加热30 min，将化橘红内柚皮苷的溶出度、高效液相色谱图谱及浸出物量作为指标，考察不同粉粹度的影响。结果发现，2号样品饮片粒径为24～50目时所含有效成分柚皮苷的溶出度最大（平均为48.50 mg/g），是原样品0号（平均为37.77 mg/g）的1.29倍;其次是3号和4号样品，质量分数分别为47.72、47.52 mg/g。分析总浸出物测定结果发现，9号样品的总浸出物最多，浸膏得率为21.07%;其次是8号样品，浸膏得率为18.85%。根据上面两项指标可知，化橘红不是粒径越小越好，而是粉碎度在24～50目时最佳。对化橘红粉末饮片粉碎度进行适宜性研究，为化橘红饮片的实际应用提供借鉴，以期在临床上更好地发挥作用。

关键词：化橘红;柚皮苷;含量测定; HPLC;浸出物

化橘红具有理气宽中、燥湿化痰的功效[1-2]，主要用于治疗风寒、咳嗽、痰多、胸闷，可健胃[3-4]。化橘红的成分有黄酮类、多糖[5]、香豆素类等化合物，包括柚皮苷、芳樟醇[6]及野漆树苷等。药用成分柚皮苷可以改善微血管通透性增强、炎症性白细胞游走等状况，验证了化橘红抗炎的作用。同时，对棉球肉芽肿也有抑制作用。但目前对化橘红饮片颗粒度的适宜性研究不多，本研究针对化橘红粉末饮片颗粒度进行适宜性研究，旨在为化橘红饮片的临床应用提供借鉴，使其在临床上发挥更大的疗效。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器

数显鼓风干燥箱（GZX-9070MBE型，上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、数控超声波清洗器（KQ-300DB ，昆山市超声仪器有限公司，功率40 Hz）、高效液相色谱仪（Agilent1260，美国Agilent公司）、 Agilent ChemStation工作站以及DAD检测器（Agilent Technologies Co. Ltd.）。

1.2 试药

柚皮苷对照品（H PL C级，纯度不低于98%，批号： BCTG-0807，江西省中药固体制剂制造技术国家工程研究中心）、醋酸（分析纯，西陇化工股份有限公司）、甲醇（色谱纯，Dikmapure，DIMA TECHNOLOGY Inc.）。

1.3 药材收集与前处理

化橘红饮片[国药集团冯了性（佛山）药材饮片有限公司]按照2015年版（一部）《中国药典》Ⅱ A“药材取样法”称取化橘红药材若干克，粉碎后用药典筛1～9号筛分。共有10个同一批次药材的不同粉碎度样品，编号为0～9号。

2 柚皮苷的含量测定

2.1 HPLC色谱条件

色谱柱：依利特Sino Chrom ODS-BP 5µm，尺寸为4.6 mm×250.0 mm，柱号E1922350;流动相：甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）;检测波长为283 nm，柱温为25℃，进样量为10µL，流速为1.0 mL/min，理论板数应不低于1500。

2.2 供试品及对照品溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备

模拟传统饮片煎煮方式，0 ～9号粉末饮片各精确称取4.0000 g，放在100 mL圆底烧瓶中，加入相当于饮片质量15倍的蒸馏水60 mL称重，设置90℃恒温水浴加热30 min，过滤，放冷，加水补足质量，用0.22μm的有机滤头过滤，取续滤液300μL放在2 mL的容量瓶中，加甲醇稀释定容，充分摇匀，用 0.22μm的有机滤头过滤，得到样品制备液。

2.2.2 对照品溶液的制备

精确称取柚皮苷对照品3.00 mg，放在5 mL容量瓶中，加溶剂甲醇溶解，摇匀定容，制成质量浓度为0.60 mg/mL的柚皮苷对照品溶液。

2.3 系统适应性实验

精确吸取10μL对照品溶液和供试品溶液，按2.1中的色谱条件进样，采用外标法测定指标成分的含量，在上述条件下，得到柚皮苷色谱峰理论塔板数不低于6000，分离度均大于1.5。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察

精确吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12µL进样，记下峰面积，将对照品溶液质量（µg）作为横坐标，峰面积作为纵坐标，得到柚皮苷的线性回归方程： Y=1263.2X+9.5547，线性范围：1.2～7.2μg（R2=0.9999）。

2.4.2 精密度实验

按2.1中的色谱条件，精确吸取柚皮苷对照品溶液10 µ L，连续进样5次，记下色谱峰面积分别为7 543.7、7 591.0、7577.4、7641.1、7615.0，计算柚皮苷的峰面积相对标准偏差（Relative  Standard Deviation，RSD）为0.49%，表明该仪器的精密度良好。

2.4.3 重复性实验

精确称取5份2号样品粉末各2.0000 g，按2.2.1中的供试品处理方法制备，按2.1中的色谱条件进行分析，记下指标成分色谱峰面积分别为6218.3、6212.5、6038.9、6200.6、6 001.8，计算得到化橘红中柚皮苷的峰面积RSD为1.71%，表明该方法的重现性良好。

2.4.4 穩定性实验

按2.2.1中的方法制备2号样品，得供试品溶液，分别在0、3、6、9、12、24 h进行测定，记下色谱峰面积分别为6 275.7、6270.5、6272.3、6275.8、6224.9、6287.6，计算得到柚皮苷的峰面积RSD为0.35%，表明样品在24 h内稳定性较好。

2.4.5 加样回收实验

精确称取6份2号样品粉末各200.00 mg，分别加入一定量的柚皮苷对照品，按2.2.1中的方法制备样品溶液，按2.1中的色谱条件进行色谱分析，根据测得量与加入量计算回收率，结果如表1所示，计算得到平均回收率为99.50%，RSD为1.38%，表明柚皮苷的回收率符合实验要求，本实验方法的准确性良好。

2.5 实验结果

分别精确称取0～9号不同粉碎度的化橘红粉末样品适量，按2.2.1中的方法制备供试品溶液，再按2.1中的色谱条件测定各样品中柚皮苷的质量分数，结果如表2所示。

3 化橘红粉末饮片浸出物的测定

3.1 实验方法

分别精确称取0～9号化橘红饮片4.0000 g，每组各取3份放在100 mL圆底烧瓶中，加入相當于饮片质量15倍的蒸馏水60 mL称重，90℃水浴恒温加热提取30 min，放冷称重，加水补足质量，过滤，滤液置于﹣20℃的冰箱中冷冻5～6 h，再转移至﹣80℃的环境中冷冻24 h，干燥，得水提浸出物，称定质量。

3.2 实验结果

精确称定0～9号化橘红粉末饮片干燥浸出物量，结果如表3所示。

4 结语

经测定，化橘红粉末饮片的质量分数从大到小为2号、4号、3号、8号、9号，证明不同粉碎度对成分的溶出度有一定的影响。采用冷冻干燥法测定化橘红粉末饮片水提取浸膏，得率高的是9号、8号，其次是0～2号。总体趋势是，随着饮片粉碎度的提高，化橘红粉末饮片浸出物的质量分数提高，但在过滤取滤液的过程中发现，0～2号样品的粉碎度适中，不易堵塞滤纸，过滤效率较高，同时颗粒度较大、吸附溶剂量小，损失量也相应减小，所以得率较高。3号、4号样品的固液分离困难，吸附损失量大，过滤慢、效率低。粉碎后的中药饮片表面积增大，提取时容易出现糊化、结焦、固液分离困难等问题，也会增加淀粉、胶质类等成分的溶出，如7～9号样品的浸出物得率明显高于其他组。综合考虑柚皮苷质量分数测定和浸出物测定实验结果，建议选择2号样品（粉碎度在24～50目）比较合适。

[参考文献]

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2015版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2]叶水泉.化痰佳药化橘红[J].大众健康，2015（11）：11-15.

[3]南京中医药大学.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2006.

[4]中国中医研究院.中医大辞典[M].北京：北京人民卫生出版社，1998.

[5]黄飞龙，马三梅.化橘红主要有效成分的分析方法[J].安徽农学通报，2007（13）：26-28.

[6]雷海民，孙文基，林文翰.化洲橘红的化学成分研究[J].西北药学杂志，2000（5）：203-205.