lncRNA NEAT1在人脑胶质瘤中的表达水平及其临床意义分析

姜旭东，庞玉军，曹艳菲，张丽娜

大庆油田总医院检验科，黑龙江大庆 163001

脑胶质瘤是发生在神经胶质细胞的颅内肿瘤，该疾病也是目前临床医学中最为常见的原发性颅内肿瘤，针对现阶段疾病主要以手术切除为主，同时配合放疗化疗，以此改善患者疾病症状。而不同级别的胶质瘤患者疾病治疗的存活时间不同，高级别胶质瘤患者治疗后存活时间1～2 年，低级别的胶质瘤患者存活时间3～5 年[1]。长链非编码核糖核酸（longnon-coding RNA，lncRNA）属于转录RNA，随着临床脑胶质瘤研究发现lncRNA 具有较高的生物活性，在基因表达及核内运输到细胞凋亡过程中起重要作用。核富集转录体1（nuclear enriched abundant transcript 1，NEAT1）属于基因位点，通过RNA 聚合酶进行转录获得[2-3]。相关研究发现NEAT1 与临床多种疾病发生存在关联。选取2018 年8 月—2020年8月大庆油田总医院获取的62份人脑胶质瘤样本及正常人脑组织30 份，分析lncRNA NEAT1 表达水平进行，同时为人脑胶质瘤患者疾病预后提供重要技术支持。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取医院获取的62 份脑胶质瘤标本，同时选取同期因颅脑手术切除获得的正常脑组织30 份。30例正常脑组织样本中年龄24～78 岁，平均（54.15±2.65）岁；62 例人脑胶质瘤患者中男31 例，女31例；年龄39～78岁，平均（55.28±2.48）岁；WHO分级Ⅰ～Ⅱ级25 例，Ⅲ～Ⅳ级37 例，肿瘤直径＞4 cm 22 例，肿瘤直径≤4 cm40 例，单发肿瘤及多发肿瘤数量分别为35例、27例。所有参与研究的患者均进行术后随访，随访方式以门诊复诊，电话随访等。随访截止时间为2021年12月。两组患者年龄、性别差异无统计学意义（P＞0.05）。具有可比性。本研究经过医院医学伦理委员会审批，通过审批后开展项目研究患者以及家属均对研究知情，在知情同意书签字。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①符合WHO（2007 年）神经系统肿瘤诊断标准[4]；②男女不限；③经病理诊断确诊；④未接受其他治疗研究。排除标准：①合并其他肿瘤癌症者；②凝血机制异常者；③存在传染性疾病者；④存在严重肾脏，心脏等功能损伤者；⑤存在慢性疾病者。

1.3 方法

提取样本中的RNA，同时使用PCR 检测技术进行测NEAT1 水平检测，检测过程中采用Trizol法对总RNA 进行获得，在获取RNA 过程中保证其吸光度值在1.9～2.0 阶段，提取1 µl 总RNA，而后严格依据逆转录试剂盒中相应的试剂使用说明进行为cDNA 逆转录，完成这部分操作后，利用PCR 检测技术进行NEAT1 水平检测。将GAPDH作为参考基因，探针及引物系列为NEAT1 引物正向5'- TGGCTAGCTCAGGGCTTCAG-3'，反 向5'-TCTCCTTGCCAAGCTTCCTTC-3'；GAPDH 引物正向5'-TGTTGCCATCAATGACCCCTT-3'，反向5'-CTCCACGACGTACTCAGCG-3'。以2-△△Ct方 法 进 行 计算，进而获得NEAT1表达情况。

1.4 观察指标

比较胶质瘤患者和正常组织患者的lncRNA NEAT1 表达水平；分析脑胶质瘤生存期的影响因素。

1.5 统计方法

采用SPSS 22.0 统计学软件对数据进行分析，计量资料样本符合正态分布，采用（±s）表示，组间比较进行t检验，计数资料采用[n(%)]表示，进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同lncRNA NEAT1 表达水平的胶质瘤患者临床特征比较

62例脑胶质瘤患者中lncRNA NEAT1高表达35例，占比56.45%，低表达患者27 例，占比43.55%，见表1。且脑胶质瘤中lncRNA NEAT1 表达水平（0.64±0.17）ng/µl，而正常组织中lncRNA NEAT1 表达（0.10±0.08）ng/µl，比较差异有统计学意义（t=16.564，P＜0.05）。

表1 不同lncRNA NEAT1表达水平的胶质瘤患者临床特征比较[n(%)]

2.2 人脑胶质瘤患者无进展生存期影响因素Cox回归分析

经过多因素Cox 比例回归分析发现，患者年龄＞60 岁，且术前KPS 评分低于80 分，WHO 分级Ⅲ～Ⅳ级及lncRNA NEAT1 表达水平高是脑胶质瘤患者无进展生存期及总生存期的独立影响因素（P＜0.05），见表2、表3。

表2 人脑胶质瘤无进展生存期影响因素Cox回归分析

表3 人脑胶质瘤总生存期影响因素Cox回归分析

3 讨论

据现阶段流行病学调查显示，胶质瘤发病年龄多处于20～50 岁之间，而且发病峰值以30～40 岁为主，通常情况下儿童会发生该疾病。患有胶质瘤疾病逐渐增多且男性患病数量远高于女性，依据临床发病情况数据统计显示，胶质瘤总体年发病率数据为3～8/10 万，而其中星形细胞瘤占比17.4%，室管膜瘤占比10.2%，髓母细胞瘤占比9.5%，少突胶质细胞瘤占比5.8%。疾病的发生严重影响了患者的身体健康，降低患者的生活质量，而且该疾病治疗过程中预后较差，且预后参考指标较少，因此加强可预测胶质瘤预后生物学指标研究实现脑胶质瘤疾病预后有效性，是现阶段临床医学工作者重点关注的问题[5-6]。

lncRNA 属于长链非编码RNA，相关学者在研究中发现该物质在剂量补偿效应，遗传调控，细胞生长周期及分化等各个阶段均参与生命活动，现阶段临床医学生物学已经对其进行有效研究，发现其不具有蛋白质编码功能[7]。随着近年来临床医学逐渐深入研究，发现肿瘤组织内部NEAT1 表达发生异常，而NEAT1 表达异常对肿瘤患者体内的细胞增殖情况，分化情况及凋亡情况起到重要影响，与人脑胶质瘤患者疾病治疗预后有密切关联[8]。王小刚等[8]在报道中发现人脑胶质瘤组织的IMP3 和IGF2 的表达水平对于脑胶质瘤患者疾病治疗后3 年内生存时间起到严重影响，这一研究结果的提出进一步为lncRNA NEAT1 在人脑胶质瘤患者预后生存研究奠定了基础。严华等[9]在研究中发现lncRNA NEAT1 表达情况在胃癌中对于患者临床病理参数及患者疾病预后有重要关联。胃癌患者体内lncRNA NEAT1 表达水平相较于正常人明显增高，针对该种情况临床研究中发现lncRNA NEAT1 表达的增高主要是由于EZH2靶基因参与细胞增殖，促进了癌细胞的增殖分化，因此这些结果可以充分说明NEAT1 物质参与了多种肿瘤及癌症的发生[10-12]。

本研究中主要利用定量逆转录PCR 技术对脑胶质瘤患者及正常患者脑组织的lncRNA NEAT1 表达情况进行研究，通过研究发现，人脑胶质瘤患者脑组织中该物质的表达水平高于正常脑组织，依据WTO 进行分级，发现高级别胶质瘤中该物质的表达水平明显高于低级别脑胶质瘤中的表达情况。62例脑胶质瘤患者中lncRNA NEAT1 高表达35 例，占比56.45%，低表达患者27 例，占比43.55%，且人脑胶质瘤中lncRNA NEAT1表达水平（0.64±0.17）ng/µl，而健康人脑组织中lncRNA NEAT1表达（0.10±0.08）ng/µl。李芳芳等[13]同样在肝细胞癌中发现lncRNA NEAT1，而且由于lncRNA 具有较好的生物稳定性，因此可以针对癌症诊断提供重要指导作用[14]。lncRNA NEAT1 与肝癌患者的肿瘤分化情况及临床特征情况存在重要关联，因此利用lncRNA NEAT1 可以有效实现癌症疾病的诊断，本研究结果同样为此次研究数据奠定了有效基础。而且本研究利用Cox 多比例回归分析，发现脑胶质瘤患者年龄＞60 岁，且术前KPS 评分低于80 分，WHO 分级Ⅲ～Ⅳ级及lncRNA NEAT1 表达水平高是脑胶质瘤患者无进展生存期及总生存期的独立影响因素（P＜0.05），lncRNA NEAT1 表达水平越高，患者疾病预后越差。相关学者在研究中胶质瘤组织lncRNA NEAT1 的表达水平（2.893±0.296）ng/µl，显著高于正常人表达（1.000±0.297）ng/µl（P＜0.05）[15]，这一数据与本研究数据高度相似，这一结果表明lncRNA NEAT1 与脑胶质瘤的发生及进展存在密切关联。

综上所述，lncRNA NEAT1 表达水平的高低对于人脑胶质瘤患者疾病预后有重要影响，高表达患者预后效果差，而且因素分析过程中发现术前KPS评分低于80 分，WHO 分级Ⅲ～Ⅳ级及lncRNA NEAT1 表达水平高及年龄超过60 岁是导致患者危险预后的重要独立性因素，而lncRNA NEAT1 低表达，可实现患者术后生存时间延长。因此针对人脑胶质瘤临床疾病预后观察过程中可以将lncRNA NEAT1 表达情况作为生物学标志指标，为临床人脑胶质瘤患者疾病预后提供重要指导。