气相色谱法测定甲氧苄啶原料药中的6种残留溶剂

张 琳 ，任文杰 ，刘葵葵 ，于 亮 ，刘梦瑶 ，李 欣 ，邢雪敏 *

（1. 山东省药学科学院 山东省化学药物重点实验室，山东 济南 250101；2. 山东福瑞达医药集团有限公司，山东 济南 250101；3. 山东省黏膜与皮肤给药技术重点实验室，山东 济南 250101）

甲氧苄啶为广谱、高效、低毒的抗菌和杀菌剂，抗菌谱与磺胺药相近。国内开发了一条以天然资源五倍子为起始原料提取制备3, 4, 5-三甲氧基苯甲酸甲酯，经酞脐化、铁氛化钾氧化制得关键中间体3, 4, 5 -三甲氧基苯甲醛，再经与3-甲氧基丙腈缩合、与甲醇加成与环合而得，并实现规模化生产。随着生产规模增大，国内开始寻找可突破五倍子天然资源限制的合成路线。目前，多采用以β-甲氧基丙腈与3, 4, 5-三甲氧基苯甲醛（TMB）为原料经“单甲醚”、“二甲醚”制备甲氧苄啶，或以3,5-二溴-4-羟基苯甲醛为起始原料，经甲氧化、甲基化、缩合、环合反应制得[1-5]。

然而，无论采用何种合成路线，在合成过程中均用到大量的有机溶剂，如苯胺、硫酸二甲酯、丙烯腈、二甲胺、二甲亚砜（DMSO）和N,N-二甲基甲酰胺（DMF）等。其中苯胺、二甲胺属于有毒物[6-7]，DMSO和DMF属于第三类溶剂，均在合成工艺后3步中采用，应被严格控制。另外，虽然丙烯腈与硫酸二甲酯并非合成工艺最后一步使用的溶剂，但二者属于剧毒物[8-9]，亦应在甲氧苄啶检测时对其进行严格控制。本文建立硫酸二甲酯、丙烯腈、二甲胺、DMSO、DMF和苯胺等6种溶剂的检查方法，对甲氧苄啶合成过程中的残留溶剂检查提供依据。

1 材料

1.1 仪器

气相色谱仪（Agilent 7890B），氢化火焰离子化检测器（FID），氮磷检测器（NPD），Agilen HP-5毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），Agilent DB-WAX毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm，0.32 μm)，Agilent DB-1毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm，0.33 μm)。

1.2 药品与试剂

甲氧苄啶（山东荣源药业，批号：20070002，20070003，20070004）、硫酸二甲酯（分析纯）、丙烯腈（分析纯）、40 %二甲胺水溶液（分析纯）、DMSO（分析纯），DMF（分析纯）、苯胺（分析纯）。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液 取硫酸二甲酯适量，精密称定，用甲醇定量稀释制成0.1 mg/ml的溶液作为硫酸二甲酯对照品溶液；取丙烯腈、40 %二甲胺水溶液各适量，精密称定，分别用DMF定量稀释制成0.1 mg/ml的溶液，作为丙烯腈、二甲胺对照品溶液；取DMSO适量，精密称定，用DMF定量稀释制成0.5 mg/ml的溶液作为DMSO对照品溶液；取DMF适量，精密称定，用DMSO定量稀释制成0.1 mg/ml的溶液作为DMF对照品溶液；取苯胺适量，精密称定，用甲基叔丁基醚定量稀释制成0.01 mg/ml的溶液，作为苯胺对照品溶液。

2.1.2 线性溶液 取2.1.1项下各对照品溶液，精密量取50 μl，200 μl，1 ml，2 ml，5 ml，分别置入10 ml量瓶，用各对照品溶液制备对应的稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为各对照品的线性溶液。

2.1.3 样品溶液 取甲氧苄啶约1.0 g，精密称定，置入10 ml量瓶，加表1中对应的稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。

表1 不同残留溶剂检查方法色谱条件表

2.2 色谱条件

6种残留溶剂检查所采用方法的色谱条件均略有不同，各色谱条件见表1。在各色谱条件下，取对应的对照品溶液和样品溶液各1 μl进样测定，记录色谱图。

2.3 专属性

分别取2.1.1项下各对照品溶液和其对应稀释剂各1 μl注入气相色谱仪，照2.2项色谱条件进行检测，记录色谱图，图谱见图1。

图1 专属性试验HPLC图谱

由图1可见，各色谱条件下，6种残留溶剂与其稀释剂均可较好分离，稀释剂不干扰检测，方法专属性良好。

2.4 线性试验

精密量取2.1.1项和2.1.2项下各溶液1 μl注入气相色谱仪，在各色谱条件下进样测定，记录峰面积。以各溶剂浓度（X，μg/ml）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，求得标准曲线方程。结果表明，6种残留溶剂在各自范围内，线性相关系数均大于0.999，结果见表2。

表2 6种残留溶剂的线性范围、线性方程、相关系数、检测限和定量限

2.5 检测限和定量限

取2.1.2项下各对照品线性溶液的最低浓度进行逐级稀释，依法测定，取S/N≈3时的溶液浓度作为检测限，取S/N≈10时的溶液浓度作为定量限，结果见表2。另取各溶剂的定量限浓度溶液，连续进样6次，硫酸二甲酯、丙烯腈、DMF、DMSO、二甲胺和苯胺峰面积的RSD依次为4.2 %，3.9 %，6.8 %，7.2 %，4.4 %，5.3 %。实验结果表明，本方法用于测定6种溶剂的灵敏度较好，定量限精密度较好。

2.6 精密度试验

取2.1.1项下各对照品溶液1 μl注入气相色谱仪，在各色谱条件下进样测定，连续进样5次，硫酸二甲酯、丙烯腈、DMF、DMSO、二甲胺和苯胺峰面积的RSD分别为0.61 %，0.02 %，3.86 %，2.14 %，1.89 %，2.40 %。

2.7 加样回收率试验

取甲氧苄啶约1.0 g，精密称定，置入10 ml量瓶，再取2.1.1项下各对照品溶液适量，分别加入样品中，平行制备9份含各溶剂高、中、低3种浓度的溶液，照各溶剂色谱条件测定，外标法以峰面积计算各待测溶剂的回收率，6种溶剂样品配制浓度和加样回收测定结果见表3和表4。

表3 加样回收样品制备浓度

表4 加样回收率试验测定结果

2.8 样品测定

取甲氧苄啶3批样品，照各溶剂色谱条件进行检查，测定结果表5。

表5 甲氧苄啶3批样品中残留溶剂测定结果

3 结论

甲氧苄啶在生产过程中代入的6种溶剂均可采用气相色谱法测定。所采用的色谱条件简便、准确、有效，适用于甲氧苄啶在生产过程中的溶剂残留的检查，为该品种的生产、质检其相关研究提供一定的依据。