沙棘籽粕低聚原花青素的制备及结构与抗氧化活性分析

郭建峰，郄浩然，胡培毅，刘子超，谭志超，王 芳*

（1 中北大学化学工程与技术学院 太原 030051 2 中国露酒植物提取与健康因子山西省重点实验室 太原 030051 3 北京宝得瑞健康产业有限公司 北京 100000）

沙棘（Hippophae rhamnoides Linn.）是胡颓子科沙棘属多年生落叶灌木或小乔木，中国的沙棘属植物具有丰富的资源蕴藏量和多样性[1]。沙棘由果肉（68%）、种子（23%）和皮（7.75%）组成[2-3]，其中含有超过190 种活性成分和营养物质，包括维生素类、黄酮类、多酚类、萜类、原花青素等[3]。研究表明，沙棘籽提取物中含有丰富的原花青素，已分离鉴定出原花青素的4 种单体和8 种二聚体，单体分别为儿茶素、表儿茶素、没食儿茶素和表没食子儿茶素[4-5]。

原花青素（Procyanidins，PC）由儿茶素、表儿茶素等黄烷三醇单体通过C4-C8 或C4-C6 键甚至C2-O-C7 连接而成，按聚合度分，聚合度2～4为低聚原花青素（Oligomeric Proanthocyanidins，OPC），聚合度≥5 为高聚原花青素（Polymeric Proanthocyanidins，PPC）[6-10]。研究表明，原花青素具有抗氧化、清除自由基、抑菌消炎、抗辐射、神经保护作用、改善牙本质胶原、抑制癌细胞增殖与凋亡等功效[11-16]。从植物中提取的原花青素以高聚体为主。高聚体原花青素水溶性较差，可能是大的空间位阻限制了酚羟基的活性，导致难以被人体吸收利用，只能作为低附加值产品进行利用。聚合度较低的OPC 水溶性较好，已被报道具有抗氧化、抗菌消炎、抗癌、皮肤保健等作用，其抗氧化能力明显强于VE 和VC[17-18]。近年来OPC 在保健食品和化妆品中得到广泛关注。

目前，国内外对葡萄籽原花青素的研究较多，主要集中在提取工艺、生理活性及高聚体降解方面。对高聚体的降解方法主要酸催化[19]、碱催化[20-21]、催化加氢[22]、酶法等。葡萄籽原花青素（Grape Seed Proanthocyanidins，GSPs）由儿茶素（Catechin，C）、表儿茶素（Epicatechin，EC）和表儿茶素没食子酸酯（Epicatechin gallate，ECG）3种组成[19]。而沙棘原花青素（Sea Buckthorn Proanthocyanidins，SBPC）由儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素（Gallocatechin，GC）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin，EGC）构成[4-5]。由于两者中前两种单体结构一致，因此导致SBPC 与GSPs 的抗氧化性、提高免疫力、保护心血管等生物活性是相近的。SBPC 中GC 和EGC 两种单体在B 环上有3个连续的羟基，造成SBPC 与GSPs 的差异，这种特殊的结构特征直接影响SBPC 的某些功效，如SBPC 在抗氧化方面有突出优势。目前关于沙棘籽粕低聚原花青素制备、结构和抗氧化性的报道较少。

我国的沙棘属资源丰富，每年有高达数十吨的沙棘籽被浪费。为此，研究沙棘籽的精细加工、利用具有重要的现实意义。本文采用超高压前处理沙棘籽，超声提取低聚原花青素，通过IR 和UPLC-ESI-MS 分析沙棘籽粕原花青素含量，旨在为沙棘籽的精细开发与利用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

1.1.1 材料与试剂 沙棘籽粕：沙棘籽通过超临界萃取沙棘籽油后，在通风处晾干或冷冻干燥制成，粉碎过20～100 目筛。

GA、C、EC、ECG、EGCG、二聚体B2 等标准品，上海安谱实验科技股份有限公司（HPLC≥99%）；6-羟基-2，5，7，8-四甲基色烷-2-羧酸（6-hydroxy-2，5，7，8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid，Trolox）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl hydrate，DPPH）、2，2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2，2’-azino -bis（3 -ethylbenzothiazoline -6 -sulfonic acid），ABTS）、2，4，6-三（2-吡啶基）-1，3，5-三嗪（2，4，6-Tris（2-pyridyl）-s-triazine，TPTZ），上海麦克林生化科技有限公司（HPLC≥99%）；香草醛等相关试剂均采购于国药集团化学试剂有限公司（AR≥99%）；试验用水为蒸馏水。

1.1.2 仪器设备 SB-3200DTS 超声波双频机，宁波新芝生物科技有限公司；ReadMax1900 型光吸收全波长酶标仪，上海闪谱生物科技有限公司；Ultimate 3000 UHPLC-Q Exactive 液质联用仪，Thermo Scientific，US。

1.2 试验方法

1.2.1 沙棘籽原花青素的制备工艺 首先，沙棘籽粕按（1 ∶10～1 ∶30）料液比加入70%乙醇在600 MPa 下超高压前处理20 min，接着调整体系的pH（2.00～5.00）在超声温度（30～50 ℃）下180 W 超声反应10～50 min，重复提取3 次，4 000 r/min 离心20 min，合并滤液后，减压浓缩，得到浓缩液A。

浓缩液A 采用大孔树脂AB-8（2.5 cm×60 cm）1 BV/h 上样，吸附完全后，以2 BV/h 的流速利用蒸馏水除去部分多糖和蛋白质，再利用30%～70%乙醇进行解吸。收集30%～70%乙醇洗脱液于28 ℃减压浓缩后，得浓缩液B，浓缩液B 冷冻干燥后得到沙棘籽粕低聚原花青素提取物。以原花青素提取率、平均聚合度（mDP）为指标，考察各因素对原花青素效果的影响。

1.2.2 响应面优化工艺 结合单因素试验，以A（料液比）、B（超声时间）、C（超声温度）、D（体系pH）进行4 因素3 水平的响应面法优化，以沙棘籽粕原花青素的提取率、平均聚合度（mDP）为响应值，根据Box-Behnken 原理，运用Design-Expert.V 12 软件进行试验优化。

表1 Box-Behnken 中心组合试验设计Table 1 Design of combined test of Box-Behnken

1.2.3 平均聚合度的测定

1.2.3.1 原花青素含量的测定 参考文献[23]采用香草醛-盐酸法。取1 mL 不同浓度的儿茶素（0～1 mg/mL）加入2.5 mL 1.5%香草醛-甲醇溶液和2.5 mL 30%盐酸-甲醇溶液，混合均匀，（30±1）℃暗反应15 min，于500 nm 测吸光度，绘制标准曲线y=0.3113x+0.0793，R2=0.9936。取1 mL 稀释的提取液，按上述步骤操作。按公式计算原花青素的提取率（ρ）：

式中：ρ——原花青素的提取率，%；m——冻干得到提取物的质量，g；M——原料的质量，g。

1.2.3.2 物质的量的测定 参考文献[23-24]采用改良香草醛-盐酸法。取1 mL 不同浓度的儿茶素标准溶液（0～4 mol/mL）加入2.5 mL 1.5%香草醛-乙酸溶液和2.5 mL 4%盐酸-乙酸溶液，充分摇匀，（30±1）℃暗反应15 min，在500 nm 测吸光度，绘制标准曲线y=0.2287x+0.0951，R2=0.9987。取1 mL 稀释的提取液，按上述步骤操作。

原花青素平均聚合度（mDP）的计算：

式中：m——原花青素质量含量，μg；M——儿茶素相对分子质量，290；n——原花青素物质的量，μmol。

1.2.4 红外光谱分析 利用K-Br 方法[25-26]检测冻干沙棘籽粕的低聚原花青素提取物的红外光谱，扫描范围4 000～500 cm-1。

1.2.5 UPLC-ESI-MS 分析

1.2.5.1 色谱条件 色谱柱（Eclipse Plus C18100 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；进样量：5.0 μL；流速：0.5 mL/min；流动相：A：0.1%甲酸；B：乙腈。洗脱程序：0～12 min，95%～65%A；12～18 min，65%～5%A；18～23 min，5% A；23～24 min，5%～95% A；24～30 min，95% A。

1.2.5.2 质谱条件 离子源：HESI；翘气速率：30 mL/min；辅助气速率：10 mL/min；喷雾电压：负离子3.2 kV；毛细管温度320 ℃；辅助气温度300℃；S-lens：50%；碰撞电压：NCE：30；扫描范围m/z 200～3 000。

1.3 体外抗氧化活性的测定

1.3.1 DPPH 清除自由基能力的测定 参照文献[27-28]，略作修改。取0.0079 g DPPH 溶于10 mL无水乙醇，配置成200 μmol/L 的母液，使用前用无水乙醇稀释为60 μmol/L 的DPPH 工作液。在96孔板中，加入100 μL 不同浓度的Trolox 溶液（0～1 mmol/mL）和100 μL DPPH 工作液，室温下暗反应30 min，于517 nm 测定吸光度。以DPPH 自由基清除率为纵坐标，以Trolox 的浓度为横坐标，绘制标准曲线y=1.565x+0.2009，R2=0.9957。取100 μL 稀释后提取液，按上述步骤测定。清除率按公式（3）计算：

式中：A0——无水乙醇+DPPH 的吸光度；A1——样品+DPPH 的吸光度；A2——样品+无水乙醇的吸光度。

1.3.2 ABTS 清除自由基能力的测定 参照文献[29]，略作修改。取5 mL 14 mmol/L 的ABTS 溶液和5 mL 4.9 mmol/L 的K2S2O8，混合均匀，室温暗反应12～16 h，得到ABTS 工作液。将ABTS 工作液使用前用无水乙醇稀释至A734nm=0.700±0.02。取20 μL 不同浓度的Trolox 溶液（0～1 mmol/mL）加入到180 μL ABTS 稀释液中，室温暗反应10 min，于734 nm 处测定吸光值。以ABTS 自由基清除率为纵坐标，以Trolox 的浓度为横坐标，绘制标准曲线方程y=0.0035x+0.13，R2=0.9913。取20 μL 稀释后提取液，按上述步骤操作。

1.3.3 Fe3+还原能力测定（Ferric ion reducing antioxidant power，FRAP）参考文献[29-30]，略有修改。取pH 3.60 300 mmo/L 醋酸盐缓冲液、10 mmol/L TPTZ 溶 液和20 mmol/L FeCl3按10 ∶1 ∶1比例混匀，37 ℃暗反应10 min 得FRAP 工作液。在96 孔板中，加入20 μL 不同浓度的Trolox（0～1 mmol/mL）和180 μL FRAP 工作液，振荡混匀，37℃反应10 min，于593 nm 处测定吸光度。以还原产物吸光度为纵坐标，Trolox 的浓度为横坐标，绘制标准曲线方程y=1.6309x+0.0963，R2=0.9944。取20 μL 稀释后提取液，按上述步骤操作。

2 结果与讨论

2.1 单因素实验结果

2.1.1 料液比对低聚原花青素提取的影响 图1a 为料液比对原花青素的影响。随着料液比的增加，mDP 呈现先减小后增大的趋势。当料液比为1∶15 时，mDP 达到最小值，此时沙棘籽粕中原花青素的提取率达到最大值。而随着料液比的增大，体现出负作用即其mDP 逐渐增大；这将会增加溶剂成本，同时杂质溶出量增加不利于后续精制提纯。

2.1.2 超声时间对低聚原花青素提取的影响 超声波加速提取天然产物中有效成分的理论依据是其机械作用、空化作用及热效应；其中空化和机械作可使沙棘籽中有效成分快速溶出，热效应则使溶液内部温度升高；这些作用可加速细胞壁的破坏，同时避免温度过高造成原花青素的含量降低[31-32]。

图1b 为超声时间对原花青素的影响。随着超声时间的增加，mDP 呈现逐渐减小而提取率逐渐增大的趋势，这可能是由于超声波时间增加使得溶质和溶剂间的热效应增强，沙棘籽粕与溶剂中原花青素的浓度差逐渐缩小，还可能是在酸性条件下长时间的温度作用使得原花青素的结构发生变化所致。

2.1.3 超声温度对低聚原花青素提取的影响 图1c 为超声温度对原花青素的影响。当提取温度低于45 ℃时，沙棘籽原花青素的提取率随着超声温度增加呈增加趋势，而mDP 随着温度增加而逐渐减小，温度升高有利于分子间运动如渗透、溶解等，沙棘籽中有效成分加速溶出使其转移至溶剂中[31]。但原花青素属于热不稳定物质，当温度过高，原花青素的提取率开始降低，同时还会造成其他热稳定的杂质溶出。

2.1.4 体系pH 值对低聚原花青素提取的影响 图1d 为体系pH 值对原花青素的影响。随着体系pH值的降低，mDP 呈现骤然减小的趋势，这可能是由于在整个体系中添加酸性催化剂，体系中pH 值发生变化，这种酸性环境更利于原花青素的解聚与提取，使得原花青素的提取率随体系pH 值降低而增加。而当体系pH 值达到4.0 左右时，虽然环境处于酸性状态，但已无法提供原花青素解聚所需的环境，因此造成了mDP 骤然增大的现象即mDP＞4 为PPC。

2.2 响应面优化提取工艺

2.2.1 响应面优化结果 响应面法优化方案及结果如表2 所示。

表2 试验设计与结果Table 2 Experimental design and results

2.2.2 回归方程与方差分析 采用Design-Expert 12 软件对响应值和各因素进行回归拟合，以沙棘籽粕原花青素提取率（Y1）、mDP（Y2）为响应值，得到各因子的二次回归拟合方程为：

由表3 可知，得率（Y1）P=0.0003＜0.01 表示该模型显著，在这种情况下，A、B、AB、AC、CD、B2、C2、D2是重要的模型项；其R2=0.8841 说明88.41%能够由该模型解释；这些数据均表示该模型能解释响应值的变化，即该模型与实际试验拟合较好；各因素对沙棘籽原花青素提取率的影响：料液比＞超声时间＞溶剂pH 值＞超声温度。

表3 方差分析表Table 3 Analysis of variance table

mDP（Y2）P＜0.0001 表示该模型显著，在这种情况 下，A、AD、BC、CD、A2、B2、C2、D2是重要的模型项；其R2=0.9599 说明95.99%能够由该模型解释；这些数据均表示该模型能解释响应值的变化，即该模型与实际试验拟合较好；各因素对mDP 的影响：料液比＞体系pH 值＞超声时间＞超声温度。

2.2.3 各因素间对原花青素平均聚合度的交互作用 采用Design-Expert 12 软件对料液比、超声时间、超声温度、体系pH 值之间交互作用的关系进行分析，结果如图2 所示。

图2 各因素对原花青素平均聚合度的交互作用Fig.2 The interaction of various factors on the average degree of polymerization of proanthocyanidins

从图2 可看出，料液比与超声时间、超声温度、溶剂pH 值的3D 图走势较陡峭，等高线密集且呈椭圆形，说明两两变量之间交互作用较强。同理，超声温度、体系pH 值与超声时间的交互作用也较强。而图2f 中，超声时间与体系pH 值的3D图走势陡峭，等高线密集但未呈现椭圆形，说明这两者之间的交互作用较弱。由图2 的响应面图及F 值可知两因素对原花青素平均聚合度影响大小依次为：CD＞AD＞BC＞AC＞BD＞AB。

2.2.4 最佳工艺条件的预测和验证 经过Design-Expert 12 对数据进行处理，分析得本研究的最佳工艺为：料液比1 ∶13.89（g/mL）、超声时间27.89 min、超声温度42.67 ℃、体系pH 2.63。在这种条件下模型预测沙棘籽粕原花青素提取率为6.741%、mDP 为3.260。

考虑实际情况，对上述条件最佳工艺进行修正：料液比1 ∶15（g/mL）、超声时间28 min、超声温度45 ℃、体系pH 2.50。在此条件下进行3 次验证试验，沙棘籽粕原花青素平均聚合度为3.35＜4，即为OPC，RSD 为1.69%，表明试验结果与模型拟合良好，说明本工艺条件可行、可靠。

2.3 沙棘籽粕原花青素的红外光谱分析

图3 中吸收峰均发生在原花青素母核的C6-C3-C6 结构上，3 405 cm-1为-OH 伸缩振动，2 926 cm-1为C-H 伸缩振动，1 722 cm-1为C=O 伸缩振动，1 615 cm-1和1 452 cm-1均为苯环的C=C 伸缩振动，1 347 cm-1为苯环的C-H 弯曲振动，1 203 cm-1、1 065 cm-1可能为C 环的C-O-C 伸缩振动，837 cm-1则是由于2，3，4 位存在羟基取代形成。最后，626 cm-1是C-H 的面外伸缩振动。

图3 沙棘籽原花青素的红外光谱Fig.3 Infrared spectrum of sea buckthorn seeds proanthocyanidins

根据文献报道，原花青素的特征骨架在1 650～1 000 cm-1和850～700 cm-1区域，850～700 cm-1的吸收峰收数目直接取决于B 环上羟基的数量，同时以C（EC）为主的原花青素在780～770 cm-1吸收峰明显，以GC（EGC）为主的原花青素则在730 cm-1左右有强吸收峰[33-34]。纯化物的红外光谱在725 cm-1有1 个吸收峰，表明本研究的纯化物以GC（EGC）为主，C（EC）次之。这也说明了沙棘籽粕原花青素与葡萄籽原花青素结构上的区别[33]。

2.4 UPLC-ESI-MS 分析

沙棘籽粕原花青素成分复杂，根据国内外相关研究，选择合适的分子离子峰进行二级质谱分析，鉴定出6 种单体、三类二聚体、三聚体，UPLCESI-MS 分析结果见表4。

表4 沙棘籽粕原花青素主要质谱数据及辨析Table 4 Main mass spectrum data and analysis of seabuckthorn seed meal proanthocyanidins

单体：C 与EC 互为同分异构体，两者分子离子峰[M-H]-m/z 均为289，并且二级质谱的碎片峰信息中均有明显的m/z 245，203，179，125，说明两者二级质谱裂解规律一致，即m/z 245 为[M-H]-失去1 分子CO2，m/z 203 为[M-H]-失去两分子C2H2O，m/z 179 为[M-H]-失去1 分子C2H6O2，m/z 125 为A 环中1，4 位置开环裂解。根据文献[4，35-36]推断保留时间1.95 min 为C，8.24 min 为EC。

同理，GC 与EGC 互为同分异构体，两者分子离子峰[M-H]-m/z 均为305，并且两者二级质谱裂解规律一致，即m/z 219 为[M-H]-失去两分子C2H2O，m/z 179 为[M-H]-失去1 分子C2H6O2，m/z 125 为A 环中1，4 位置开环裂解。因此，推断5.58 min 为GC，6.84 min 为EGC[4，36]。

ECG 由[M-H]-m/z 441 和二级质谱碎片峰m/z 423，289，245，233，179，125 等信息，推测其裂解规律为m/z 423 为失去1 分子H2O，m/z 289 为失去没食子酸酯部分，m/z 245，179，125 与儿茶素的二级质谱裂解规律一致，对比文献[37]，推测4.83 min 为ECG。

EGCG 由[M-H]-m/z 457 和二级质谱碎片峰m/z 305，179，177，153，125 等信息，推测保留时间3.79 min 为EGCG[38]。其二级质谱裂解规律为m/z 305 为[M-H]-失去没食子酸酯，接着失去两分子C2H2O 为m/z 245，进一步失去1 分子C2H6O2为m/z 179，而m/z 125 为A 环中1，4 位置开环裂解。

通过与文献[35-38]结果比对，及分析原花青素的成键与裂解方式[39-40]，本研究中共鉴定4 类不同构成的二聚体，包括3 类B 型二聚体、一类A型二聚体：

第1 类[M-H]-m/z 为577，是由两个C（EC）构成的二聚体，其二级质谱信息中m/z 407 为二聚体先经RDA 重排在失去1 分子H2O 得到；m/z 289 为二聚体失去1 分子单体得到，m/z 179，125与C（EC）的裂解规律一致。

第2 类 [M-H]-为m/z 609，是由2 个GC（EGC）构成的二聚体，其二级质谱信息中m/z 423为二聚体先经RDA 重排在失去1 分子H2O 得到；m/z 305 为构成二聚体的连接键断裂形成。而m/z 245，179，125 与其单体的裂解规律一致。

第3 类[M-H]-为m/z 593，是由1 个C（EC）和1 个GC（EGC）构成的二聚体。其二级质谱信息中m/z 407 为二聚体先发生RDA 重排而得到的，再失去1 分子H2O 形成，m/z 305 为失去，1 分子C（EC）形成，m/z 289 为失去1 分子GC（EGC）形成，m/z 125 为构成单体中A 环的1，4 位置开环裂解。

第4 类[M-H]-为m/z 575，由于A 型二聚体和B 型二聚体在键的连接方式上存在差异，即A型二聚体不仅含有C4-C8或C4-C6还有C2-O-C7或C2-O-C5，因此两者在质谱信息中存在显著差异。根据二级质谱信息m/z 423 为[M-H]-发生RDA 重排而得到的，再失去1 分子H2O 就形成m/z 407；二聚体组成单元之间的连接键断裂，m/z287（[MT-3H]-）为C4位置断裂形成，m/z 245 [MH]-是失去1 分子结构单元和1 分子CO2得到。与文献[41]～[45]A 型原花青素结果相似。目前沙棘籽粕中尚未有关于A 型原花青素的相关报道，本研究可能是首次鉴定出沙棘籽粕中A 型二聚体原花青素。这也有可能是本研究工艺导致沙棘籽中高聚原花青素解聚，形成A 型原花青素。

三聚体C45H38O18m/z 865：其二级质谱信息中m/z 407 为[M-H]-先发生RDA 重排再失去1 分子结构单元形成；三聚体组成单体之间的键断裂，m/z 289 为B-unit（base）形成，m/z 287 为T-unit（top）形成，前者的离子丰度远强于后者，与Monagas 等[46]结果一致，m/z 245 是[M-H]-失去两分子结构单元和1 分子CO2得到，m/z 125 为一个结构单元的A 环中1，4 位置开环裂解。由于A 型原花青素易发生聚合反应，m/z 865 有可能是两分子A型二聚体聚合后，失去1 个H 并发生quinone methide fission（QM）cleavage 分子间断裂（m/z减少290）产生的[38，45]。

从相关质谱信息中得到，PPC（mDP≥5）未检出，因此证明了本研究工艺对制备沙棘籽粕低聚原花青有显著效果。

2.5 抗氧化活性评价

以Trolox 标准品为对照，结果用Trolox 的当量（μmol Trolox/g DW）表示，考察料液比、超声时间、超声温度和体系pH 值对抗氧化活性的影响，结果如图4 所示。

图4 沙棘籽粕原花青素总离子流图Fig.4 Seabuckthorn seed meal proanthocyanidin total ion chromatogram

当超声时间、超声温度、体系pH 值一定，沙棘籽粕原花青素对DPPH、ABTS、FRAP 的抗氧化活性随着料液比的增加逐渐降低，这可能是料液比影响有效成分的溶出，导致部分杂质的溶出量增大。同理，超声时间、超声温度、体系pH 值这3 个因素对DPPH、ABTS、FRAP 的活性均为正相关，这表明上述3 个因素有利于沙棘籽粕原花青素的制取，并很好地提升了原花青素的生物活性。

目前，有研究表明原花青素中单体ECG 的抗氧化活性高于其它单体，且二聚体的抗氧化活性高于单体，随着聚合度的增加抗氧化性逐渐减弱[47-48]。本研究通过对比可以判断出低聚体含量较高的原花青素的抗氧化能力较强，造成差异较明显，这可能由于原花青素的聚合度不同导致其基本单元的构成不同，还与其分子质量、空间位阻等因素不同有关[49-50]。

图5 不同处理对（a）DPPH、（b）ABTS、（c）FRAP 抗氧化活性的影响Fig.5 The effect of different treatments on（a）DPPH，（b）ABTS，（c）FRAP antioxidant activity

3 结论

本研究优化了在超声波辅助下，酸性解聚沙棘籽粕原花青素的工艺，其中各因素对mDP 的影响顺序为：料液比＞体系pH 值＞超声时间＞超声温度。研究表明，最优工艺为料液比1∶15（g/mL）、超声时间28 min、超声温度45 ℃、体系pH 2.85 时，沙棘籽粕原花青素提取率达到6.556%，mDP 为3.35，其抗氧化性为DPPH 2.205 mmol Trolox/g DW，ABTS 1.307 mmol Trolox/g DW，FRAP 0.8143 mmol Trolox/g DW。本研究中所利用的方法很大程度上提高了沙棘籽粕中原花青素得率和抗氧化活性，同时具有操作简单、提速快、耗能低、提取率高等优点，可为沙棘籽的精细加工利用提供依据，为沙棘籽原花青素的合理开发提供理论依据。