两种HPV检测方法在新疆地区宫颈癌筛查中的应用效果对比*

昆阿依木·叶尔江,王 豆,热米拉·热扎克,曾贝贝,奴尔米拉·布尔拜,王 岩**

(1.新疆医科大学公共卫生学院,乌鲁木齐 830000;2.新疆医科大学附属肿瘤医院,乌鲁木齐 830000;3.新疆塔城地区托里县妇幼保健院,塔城 834500)

宫颈癌是发展中国家常见且重要的公共卫生问题[1]。据世界卫生组织/国际癌症研究署(WHO/IARC)2020年数据显示,宫颈癌为女性第四大恶性肿瘤,估计2020年全球新发子宫颈癌病例约60万,死亡34万[2]。2018年,中国估计有11.1万例新发病例和3.4万例死亡,占全球新增子宫颈癌病例和死亡病例的19.5%和10.9%[3]。据估计,如中国大陆城乡地区不实施干预措施,2010年至2050年每年新增子宫颈癌病例数增加约40%～50%[4]。因此,宫颈癌仍是威胁妇女健康的一个关键问题。子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是与子宫颈浸润癌密切相关的一组子宫颈病变,WHO(2014)将女性生殖器肿瘤用CIN级划分为CIN1、CIN2以及CIN3[5-6];子宫颈上皮内瘤变的发生与发展与高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)持续感染密切相关[7-9]。国际癌症研究机构已将14种HPV基因型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)归类为对人类致癌(第1组)、可能对人类致癌(第2A组)或可能对人类致癌(第2B组)[10]。2020年,在全球市场上有425种不同的HPV检测方法,其中,82%的检测缺乏已发表的分析和(或)临床评估,超过90%的测试未按确保在临床环境中安全使用的共识要求进行评估[11]。本研究将careHPV和PCR HPV两种高危型HPV检测技术用于新疆地区妇女宫颈癌初级筛查,探究两种检测技术的筛检效能。

1 资料与方法

1.1 资料来源 2018年6月至9月在新疆塔城地区托里县妇幼保健院招募了2000例25～64岁、3年内无子宫颈筛查史、无子宫切除史、未怀孕的哈萨克族妇女。参与者均获得知情同意。本研究经新疆医科大学附属肿瘤医院伦理委员会批准(编号:K-201806)。每位妇女回答一份与宫颈病变有关的社会人口学、生殖和其他风险因素数据的问卷,研究人员指导妇女自行或妇科医生根据她们的组别分类获取宫颈样本。

1.2 careHPV测试 careHPV检测是结合信号扩增的体外核酸杂交检测,使用微孔板化学发光定性检测宫颈标本中14种HR-HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)。careHPV检测有单克隆抗体包被磁珠,对RNA-DNA杂交具有高亲和力。如达到或超过1.0RLU/CO的阈值(大约等于1.0pg DNA/mL),则判定为阳性。

1.3 PCR HPV检测 使用BOHUIGenPlex HPV基因分型(GenPlex,BOHUI,China,Beijing)对所有女性的残余HPV标本进行HPV基因分型检测。本检测采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HPV DNA,低密度芯片对扩增的DNA进行靶向特异性杂交检测。该技术检测24种HPV类型,包括18种致癌分型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、53、73、82和83)和6种低风险分型(6、11、42、43、44和81)。

1.4 阴道镜检查及组织病理学诊断 任一检测结果呈阳性的妇女均接受阴道镜检查。阴道镜检查由有经验的妇科医生进行,并根据研究方案进行活检:(1)直接从可疑区域进行活检;(2)如看不到鳞状柱连接,则行宫颈刮宫术(ECC);(3)如有证据表明HPV16/18阳性,从6点和12点位置进行有针对性的活检。所有活检标本均由新疆医科大学附属肿瘤医院和中国医学科学院肿瘤医院的资深病理学家按标准进行解读[11]。组织学诊断分为:阴性、宫颈上皮内瘤变1级(CIN1)、宫颈上皮内瘤变2级(CIN2)、宫颈上皮内瘤变3级(CIN3)、鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)、原位腺癌(adenocarcinoma in situ,AIS)或腺癌(adenocarcinoma,ADC)。CIN2及以上的定义为病理学阳性病变,否则为阴性。排除57例因未进行阴道镜检查而失访的女性,最终纳入1943例女性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 25.0软件,两组间率的比较采用McNemar卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义;一致性用Kappa值来比较,不同检测方法的诊断效能用灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值进行比较,并计算95%置信区间。

2 结 果

2.1 PCR HPV与careHPV检测一致性分析 1943例妇女中,careHPV检测阳性率为8.90%(173/1943);PCR HPV检测14种高危型别HPV阳性率为9.83%(191/1943)。针对14种高危HPV型别,careHPV和PCR HPV的一致率为95.16%,Kappa值为0.715,经卡方检验比较,差异有统计学意义(χ2=996.667,P<0.001)。PCR HPV检测18种高危型别HPV阳性率为11.32%(220/1943)。PCR HPV(18种)与careHPV比较,一致性为94.60%,Kappa值为0.655,经卡方检验比较,差异有统计学意义(χ2=841.460,P<0.001)。见表1。

表1 PCR HPV与careHPV比较

2.2 careHPV检测及PCR HPV阳性的14种高危型HPV分布 针对14种高危HPV型别,careHPV和PCR HPV检测均为阳性有76例,占总人数的3.91%;其中HPV16型感染率最高(18.25%),有23例感染;其次是HPV51型感染,感染率为12.70%;绝大多数是单一型别感染,感染率为79.37%。careHPV检测为阴性但PCR HPV检测14种高危HPV型别为阳性有56例,占总人数的2.88%;其中HPV51型感染率最高(17.74%),有11例感染;其次是HPV16型和HPV52型,感染率为11.29%;绝大多数是单一型别感染,感染率为88.71%。见表2。

表2 careHPV检测合并PCR HPV阳性的14种高危型分布

2.3 两种检测方式使用不同采样方式之间的比较 在careHPV检测中,自我采样组检出102例阳性,检出率为10.71%(102/952);医生采样组检出71例阳性,检出率为7.16%(71/991);两种采样方式比较,差异有统计学意义(χ2=7.544,P=0.006)。PCR HPV检测18种高危型型别HPV组中,自我采样组检出118例阳性,检出率为12.39%(118/952);医生采样组检出102例阳性,检出率为10.29%(102/991);两种采样方式比较,差异无统计学意义(χ2=2.137,P=0.144),见表3。

表3 两种检测方式使用不同采样方式之间的比较

2.4 不同检测方法的诊断效能比较 不同检测方法对CIN2+的诊断效能不同,3种检测方法曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.876、0.879和0.883,差异无统计学意义(P>0.05)。PCR HPV检测的灵敏度最高,为88.89%(95%CI为74.37～100),其次是careHPV检测,为83.33(95%CI为66.12～100);careHPV检测的特异度最高,为91.79%(95%CI为90.57～93.02)。careHPV的阳性预测值最高,其次是PCR HPV检测。PCR HPV检测的阴性预测值最高,为99.89%(95%CI为99.73～100)。见表4。

3 讨 论

检测HPV型别对于检测高级别宫颈鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)或瘤样病变(CIN)具有重要的预后价值[12]。careHPV检测技术通过国家食品药品监督管理总局(China Food and Drug Administration,SFDA)认证,该技术经多项研究证实适用于资源匮乏地区使用,目前WHO在全球发展中国家进行该技术的推广。careHPV与第二代杂交捕获技术(hybrid capture 2,HC2)的检测原理相似,是基于HC2的原理上引用磁珠捕获的DNA与混合探针中的RNA杂交,通过信号放大及化学发光方法进行检测。careHPV检测与PCR HPV检测比较,阳性率相近,一致性非常高,kappa值较高,这与以往研究相适应[13]。careHPV阴性但是PCR HPV阳性的妇女中,绝大多数为单一感染,其中HPV51型感染率最高。三种方法的阳性预测值较差,但灵敏度和特异度极高,这与先前研究一致[14]。careHPV检测的灵敏度为83.33(95%CI为66.12～100),PCR HPV检测的灵敏度为88.89(95%CI为74.37～100)。不同采样方法进行careHPV检测得到的结果,差异无统计学意义,这与有些研究结果相近[15-17]。

careHPV检测与PCR HPV检测得出了相当一致的结果,在新疆地区除了阴道镜转诊指标的HPV16型和18型阳性这一转诊指标外,还应注意HPV51型和52型阳性的妇女。在取样方式上,自取样的结果相较于医生取样,检出率更高,若考虑自取样方式作为宫颈癌筛查的手段,可减轻妇女的心理负担。在检测CIN2+病变时,两种方法均可适用,但PCR HPV灵敏度更高一些,并且PCR HPV检测较为经济的,适用于资源有限的地区,但需更全面的研究完善结果。