血清Reg Ⅳ蛋白在胃癌患者血清中的表达

凌斌勋， 陈环球， 吴建中， 梁志超， 徐新宇， 陆建伟

Reg Ⅳ(regenerating islet-derived family, member 4)是钙依赖型植物血凝集素超家族之一——再生基因(regenerating gene, Reg)家族的最新成员，在正常胃肠道中表达水平非常低，发生炎症或肿瘤时可见原位或异位高表达[1]。本研究拟应用酶联免疫分析法定量检测Reg Ⅳ蛋白在胃癌患者血清中的水平，探讨其在胃癌中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本 取自江苏省肿瘤医院普外科2008年10月至11月收治的64例胃癌患者手术前血清标本，-80℃密封保存。患者年龄23～84岁，平均61岁。女性16例，男性48例。淋巴结阴性32例，淋巴结阳性32例。肿瘤侵及黏膜层及黏膜下层(T1)为21例，肿瘤侵及肌层(T2)及浆膜层(T3)为43例。手术后病理分期按国际抗癌联盟(UICC)TNM分期标准划分：Ⅰ期21例，Ⅱ期11例，Ⅲ期32例。

1.1.2 主要试剂 人再生基因蛋白(Reg-Ⅳ)酶联免疫分析试剂盒(USCN Life Science & Technology Company，编号E1819h)。

1.2 方法

按ELISA试剂盒使用说明书操作。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，向包被抗Reg Ⅳ抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Reg Ⅳ抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下最终转化成黄色。颜色的深浅和样品中的Reg Ⅳ呈正相关。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

1.3 统计学分析

应用SPSS 13.0软件包进行统计学分析，独立样本t检验和单向方差分析(One-way ANOVA)的。

2 结果

64例胃癌患者血清Reg Ⅳ蛋白含量为(4.217±0.314 )ng/mL，肿瘤侵及黏膜层及黏膜下层(T1)为(3.249±0.317)ng/mL，肿瘤侵及肌层(T2)和浆膜层(T3)为(4.690±0.425)ng/mL，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)；淋巴结阴性为(3.592±0.275)ng/mL，淋巴结阳性为(4.842±0.548)ng/mL，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)；病理分期Ⅰ期为(3.249±0.317)ng/mL，病理分期Ⅱ期为(4.247±0.483)ng/mL，病理分期Ⅲ期为(4.842±0.548)ng/mL，其中病理分期Ⅰ期与病理分期Ⅲ期相比差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 血清Reg Ⅳ蛋白与胃癌临床病理特征

a：病理分期I期与病理分期II期相比；b：病理分期I期与病理分期III期相比；c：病理分期II期与病理分期III期相比

3 讨论

再生基因(regenerating gene, Reg)家族包括一组分泌蛋白，具有可与N末端短肽结合的C型血凝集素样结构域，功能相当于急性反应蛋白、抗凋亡因子、生长因子及有丝分裂原。人Reg Ⅳ位于1号染色体，属于单拷贝基因，有5个内含子和6个外显子，编码158个氨基酸。Li等[2]研究发现Reg Ⅳ主要在消化系统表达，包括胃、小肠、结肠及胰腺。Oue等[3]研究进一步证明Reg Ⅳ选择性表达于肠黏膜的神经内分泌细胞及胃黏膜的壁细胞，炎症性肠病和胃溃疡等导致的黏膜损伤、再生及化生时，Reg Ⅳ表达明显升高。

Miyagawa等[4]采用RT-PCR技术检测胃癌细胞系及临床胃癌标本中的Reg Ⅳ，发现在腹膜播散的胃癌细胞系及胃癌组织中Reg Ⅳ mRNA高表达，而且mRNA丰度与癌细胞浸润腹膜厚度成正比，提示Reg Ⅳ的高表达可能与胃癌的发生、腹膜播散及侵袭能力有关；Reg Ⅳ在伴腹膜播散的胃癌中的表达水平是正常黏膜的20倍，并且明显高于不伴腹膜播散的胃癌，从而表明Reg Ⅳ与胃癌有关，并可能是胃癌发生腹膜转移的一个生物标记。马华等[5]研究认为I/II期胃癌组织中不表达Reg Ⅳ蛋白，而Ⅲ/Ⅳ期阳性率为47.83%，提示Reg Ⅳ可能参与胃癌的生长侵袭等过程。Mitani等[6]检测36例胃癌患者，发现所有14例Reg Ⅳ蛋白阳性患者均对5-Fu/DDP化疗不敏感；同时定量检测血清Reg Ⅳ蛋白水平，发现正常人和慢性胃炎患者血清Reg Ⅳ蛋白水平相似，而胃癌患者明显高于前两者，手术后患者血清Reg Ⅳ蛋白水平有明显的下降；该研究提示Reg Ⅳ 蛋白可预测以5-Fu为基础的化疗反应，并有作为血清肿瘤标志物的潜在应用价值。

本研究发现，肿瘤浸润至肌层和浆膜层的胃癌患者血清Reg Ⅳ蛋白水平要显著高于肿瘤局限在黏膜层和黏膜下层者(P<0.01)；有淋巴结转移者血清Reg Ⅳ蛋白水平要高于无淋巴结转移者(P<0.05)；病理Ⅲ期患者血清Reg Ⅳ蛋白水平高于病理Ⅰ期患者(P<0.05)。结果提示，血清Reg Ⅳ蛋白水平与胃癌的生长侵袭有明显相关性，作为临床病理诊断浸润性胃癌的标志物具有重要的参考价值。我们认为，虽然Reg Ⅳ的生物学功能和在肿瘤发生发展过程中的作用机理尚未

完全明确，但是有一点比较清楚，就是能促进肿瘤细胞的分裂、增殖，而肿瘤细胞迅速增殖后产生的机械压力，可促使肿瘤细胞沿阻力最小的组织间隙向前推进，从而引起肿瘤侵袭和转移。另有文献[7]报道Reg Ⅳ可以使结直肠癌细胞EGFR与Akt迅速磷酸化，两者共同增强AP-1转录因子的活性，使该信号通路下游基因Bcl-2、Bcl-XL、生存素(Survivin)及基质溶解因子(matrilysin)等表达发生改变。而在肿瘤的浸润转移过程中，肿瘤细胞穿透血管周围的基底膜是实现远处转移最重要的一步，多种对组织有特异性破坏作用的酶参与其中。因此，Reg Ⅳ有可能通过激活EGFR/Akt/ AP-1信号传导系统，上调基质溶解因子的表达，从而促进肿瘤侵袭和转移。

综上所述，Reg Ⅳ与胃癌浸润性生长和预后的关系，值得进一步深入研究。

[1] Oue N, Hamai Y, Mitani Y, et al. Gene expression profile of gastric carcinoma: identification of genes and tags potentially involved in invasion, metastasis, and carcinogenesis by serial analysis of gene expression[J]. Cancer Res，2004，64(7):2397-2405.

[2] Li A, Crimmins DL, Luo Q, et al. Expression of a novel regenerating gene product, Reg Ⅳ, by high density fermentation in Pichia pastoris: production, purification, and characterization[J]. Protein Expr Purif，2003，31(2):197-206.

[3] Oue N, Mitani Y, Aung PP, et al. Expression and localization of Reg Ⅳ in human neoplastic and non-neoplastic tissues: Reg Ⅳ expression is associated with intestinal and neuroendocrine differentiation in gastric adenocarcinoma[J]. J Pathol，2005，207(2):185-198.

[4] Miyagawa K, Sakakura C, Kin S, et al. Over expression of Reg Ⅳ in peritoneal dissemination of gastric cancer[J]. Gan To Kagaku Ryoho, 2004，31(11):1909-1911.

[5] 马华，梅峰，马千里，等.Reg Ⅳ在胃癌中的表达及其临床意义[J].第三军医大学学报，2006，28(5)：441-443.

[6] Mitani Y, Oue N, Matsumura S, et al. Reg Ⅳ is a serum biomarker for gastric cancer patients and predicts response to 5-fluorouracil-baed chemotherapy[J]. Oncogene, 2007，26(30):4383-4393.

[7] Bishnupuri KS, Luo Q, Murmu N, et al. Reg Ⅳ activates the epidermal growth factor receptor/Akt/AP-1 signaling pathway in colon adenocarcinomas[J]. Gastroentreology，2006, 130(1):137-149.