Heidenhain偶氮胭脂红染色在Leydig细胞瘤诊断中的应用

曹永成，刘晓红，钟 平，丁吉元，杨 帆，耿 明

卵巢、睾丸间质细胞瘤（leydig cell tumor，LCT）又称Leydig细胞瘤，是发生于性索/性间质的少见肿瘤，是由正常发育和演化的成分间质细胞构成的。Leydig细胞内含Reinke结晶体，是诊断间质细胞瘤的重要依据。Reinke结晶体在HE染色中不能被清楚地显示出来。本文介绍一种显示Reinke结晶体的染色方法。

1 资料与方法

1.1 病例资料 在笔者所在医院就诊疑为Leydig细胞瘤患者1例。男性，26岁，因婚后不育2年，检查发现右睾丸占位1 d入住泌尿外科。查体：无男性乳腺发育，无隐睾病史，双侧睾丸及附睾大小、形态、质地无异常，无结节及触痛，精索无明显增粗。B超检查示：右侧睾丸实性占位，边界清，大小约14.5 mm×13.0 mm×15.2 mm。CT检查示：类圆形异常密度病变，边缘清晰，最大截面约4.0 cm×3.5 cm，其内密度不均，CT值约31～47 Hu，正常睾丸结构显示不清。实验室检查：βhCG0.106 U/L，AFP＜7.0 ng/ml；精液常规检查显示精子数量极少。

1.2 实验方法 标本经4%中性甲醛固定，取材脱水，石蜡包埋，4 μm切片2张，常规脱蜡至水，分别行HE染色和偶氮胭脂红染色，光镜观察。

1.3 Heidenhain偶氮胭脂红染色

1.3.1 染液的配制 偶氮胭脂红B溶液：偶氮胭脂红B 0.5 g，冰醋酸1 ml，加蒸馏水至100 ml，用前过滤。苯胺蓝-橙黄G-醋酸溶液：苯胺蓝0.5 g，橙黄 G2g，冰醋酸8ml，加蒸馏水至100 ml，加温溶解，冷却，过滤，用前以蒸馏水做1∶3稀释。1.3.2 染色方法 ①切片脱蜡至水；②如非Zenker液固定的组织，需经2.5%重铬酸钾溶于5%醋酸溶液后媒染5 min；③流水冲洗5 min；④用偶氮胭脂红B染液在70℃下染色40 min；⑤蒸馏水洗；⑥用0.1%苯胺溶于95%乙醇溶液分色50～60 min（也可用0.5%苯胺酒精溶液分色15 min）；⑦用1%醋酸酒精（95%乙醇）溶液使分色停止，需以显微镜核查保证仅使细胞核和红细胞着染红色；⑧用5%磷钨酸室温媒染4 h；⑨用稀释的苯胺蓝-橙黄G-醋酸溶液室温染色4 h；⑩迅速水洗，脱水、透明，中性树胶封片。

2 结 果

2.1 大体检查 切除（右侧）睾丸及精索组织，总大小11.0cm×4.0 cm×2.8 cm，切面灰黄灰红色，于睾丸中央见一灰黄色、质软、界限清楚肿物，面积1.4 cm×1.2 cm；睾丸与鞘膜灶区粘连；精索长6 cm，直径2 cm。

2.2 镜检 HE染色：肿瘤细胞成团或条索状排列，体积中等到较大，多角形，胞质丰富嗜酸性，边界清楚。可见透明变性及微囊。胞质内Reinke结晶不确定。瘤细胞核呈圆形或椭圆形，有1~2个嗜碱性核仁，偶见双核或多核瘤细胞，未见核分裂象。肿瘤间质为血管丰富的纤维结缔组织。肿瘤组织中未见支持细胞、颗粒细胞或其它成分。偶氮胭脂红染色：Reinke结晶呈红色，染色清楚、对比明显；细胞核、红细胞呈红色；胶原纤维、网状纤维、嗜碱性颗粒呈深蓝色；粘液呈蓝色；嗜酸性颗粒呈橙红至红色（图1）。

图1 Heidenhain偶氮胭脂红染色显示睾丸间质细胞瘤胞质内红色的Reinke结晶（箭头所指）（×200）

3 讨 论

卵巢间质Leydig细胞瘤组成成分有两种，一种为梭形或卵圆形细胞，与纤维瘤或卵泡膜中的一致；另一种细胞为含Reinke结晶体的Leydig细胞。典型的表现为以纤维卵泡膜瘤的成分为主与Leydig细胞构成小结节。确诊需观察到Reinke结晶，否则应诊断为黄素化的卵泡膜细胞瘤。Reinke结晶体在HE染色中很难显示，还有取材不准，有人提出，实际上间质Leydig细胞瘤可能比文献报道的更常见。笔者认为偶氮胭脂红染色能清楚显示Reinke结晶体，为明确诊断间质Leydig细胞瘤提供有力证据。

睾丸Leydig细胞瘤发病率低，肿瘤体积较小，患者不伴内分泌症状时术前很难联想到此病，B超和CT扫描等影像学检查也无特异性诊断价值，确诊需靠病理组织学检查。最常见的形态是中等到大的多角型细胞，胞质丰富嗜酸，胞界清楚。偶尔瘤细胞呈梭形或缺少胞质；核圆形或椭圆形，核仁明显，可见双核或多核细胞。约30%~40%的患者有Reinke结晶，多位于胞质内，也可在核和间质组织中。

LCT是一种较少见的性索/性间质肿瘤，确诊需建立在对该病的临床特点、影像学及病理学的正确认识上。过去主要应用免疫组化技术来实现该病的证实，费用高，受影响因素多；Heidenhain偶氮胭脂红染色结果稳定，操作简便，可明确显示Reinke结晶，有利于leydig细胞瘤的诊断。