鸦胆子油自乳化给药系统处方研究

彭秀华， 崔名全， 慈志敏， 付超美， 郑书华

(成都中医药大学，四川成都611137)

鸦胆子油为鸦胆子果实经石油醚提取所得的脂肪油，药理研究发现其中的油酸具有很强的抗癌活性，主要用于肺癌及多种肿瘤，与化疗药联用可提高疗效［1-3］。目前相关上市制剂有口服乳剂及静脉乳剂，属动力学不稳定分散体系，受环境及时间影响易发生乳析、破裂、分层等现象［4］。在鸦胆子油药物新剂型的研发方面，自乳化药物传递系统(Se1f-E-mulsifying Drug Delivery System，SEDDS)有明显优势，在体内胃肠蠕动下自发乳化成微小乳滴，能被胃肠道、淋巴吸收，生物利用度及患者顺应性都大大提高［5-6］。SEDDS的处方组成及其制剂形式具有多样性，便于生产筛选，且体系物理稳定性好。在实验研究过程中发现，因中药成分的复杂性及自乳化处方组分的多样性特点，其自乳化效果受处方组成成分、用量比例及环境影响较大，乳化结果的重复性及重现性较差。故本实验从自乳化的影响因素入手进行处方的考察。

1 材料和方法

1．1 仪器与试药 Nicomp 380 ZLS激光粒度仪(美国PSS公司);XSZ-H光学显微镜(重庆光学仪器厂);TGL-16G离心机、85-2恒温磁力搅拌器。

鸦胆子油(96．5%，质量标准符合WS3-B-2739-97附录，广州省佛山市南海中南药化厂，批号:100304);单油酸甘油酯(GMO，上海千为油脂科技有限公司，批号:100408);油酸乙酯(EO，四川省申联生物科技有限责任公司);辛葵酸甘油三酯(GTCC广州粤泽化工有限公司);Tween-85为化学试剂，其他试剂均为分析纯购于成都市科龙化工试剂厂。

1．2 方法

1．2．1 溶解度试验 取3 g鸦胆子油，分别与1 g的 EO、GTCC、GMO、Tween-85、Tween-80、Span-80、大豆卵磷脂(EtOH溶液)、SDS(水溶液)、无水乙醇、PG 、EG、Glycerin、PEG-400、EGME 在 37 ℃ 下搅拌混合均匀，3 500 r∕min离心15 min，观察其溶解情况。

1．2．2 影响因素考察 乳液制备方法:将处方各组分按一定比例用量，一并称量于100 mL干燥烧杯中。置于预先恒温至40℃的水浴缸中，快速磁力搅拌使各组分充分混匀，再一次性加入40℃纯化水100 mL，边加边以50 r/min缓慢磁力搅拌，制得乳液，以下制法同上。

将前期预试验考察得出一个基本SEDDS处方，作为考察对象。SEDDS处方组分为:0．75 g鸦胆子油、0．75 g GTCC、0．75 g GMO、3 g 吐温 －80、0．5 g PEG-400。主要考察温度、加水量对自乳化体系中乳滴粒径、乳化时间、乳液外观的影响。采用激光粒度仪测定乳滴粒径;用秒表记录，肉眼观察从加水开始至絮状物消失，乳化完全时为乳化时间;及肉眼观察乳液外观。

1．2．2．1 温度对自乳化体系的影响 将SEDDS体系分为混合组分(GTCC、GMO、吐温 －80、PEG－400、鸦胆子油)和水相介质(纯化水)两部分;结合人体内温度综合考虑，在水相温度和体系自乳化温度为40℃的前提下，考察混合组分20、30…50℃对自乳化体系的影响，及整个体系在不同温度点下的自乳化情况。

1．2．2．2 加水量对自乳化体系的影响 分别考察加水量为50、100、200、300 mL时对自乳化体系的影响，确定该处方最适加水量。

1．2．3 以伪三元相图考察处方组成 根据乳化过程、乳滴粒径、乳液澄明度、物理稳定性的结果，将在缓慢搅拌下，进行自乳化形成的乳液，以3 500 r/min离心15 min后静置一周。将不分层、具乳光的透明或半透明乳液，且粒径在150 nm以内的处方比例范围作为自微乳化区域。将不分层、具乳光的混浊液，粒径在几十至几百纳米之间的处方比例范围纳入自乳化的区域。运用origin 7．0软件在伪三相图中绘制自微乳区域及自乳化区域。

1．2．3．1 油相比例的确定 将鸦胆子油固定为0．25 g，处方总量为5．25 g，在混合油相GTCC-GMO 分别为1∶1、1∶2、1∶3、2 ∶1、3 ∶1 的比例下，以 A 为GTCC和 GMO、B 为 Tween-80、C 为 PEG-400，绘制伪三元相图对不同比例的混合油相处方自微乳化区域进行考察，寻找最佳混合油相比例。

1．2．3．2 处方的确定 在GTCC-GMO=1∶1鸦胆子油为0．25 g，的基础上，通过增大鸦胆子油用量考察该自乳化体系载药量。据预试验结果，分别对鸦胆子油0．75 g、1．5 g进行伪三元相图考察。为更准确的确定鸦胆子油用量范围，同时进行了将鸦胆子油视为油相的一部分的伪三元相图考察，结合三个相图考察的结果确定处方最佳比例。

1．2．4 自乳化乳液初步物理稳定性考察 按最佳处方比例，取各组分共6．5 g，加入100 mL纯化水，制法同1．2．2项。取10 mL乳液于3 500 r∕min离心15 min，然后室温下静置，分别于1、2、3个月取2 mL测定乳滴粒径，并观察是否有破乳、乳析或分层等现象发生。

1．2．5 粒径及粒度分布存在的问题研究 将制备好的乳液，取2．5～3 mL于比色皿中，将比色皿置于Nicomp 380 ZLS激光粒度测定仪中，扫描10 min，通过测定样品中小颗粒不停做布朗运动使散射光产生微小频率漂移，来确定粒子的平动及转动扩散系数，利用Stokes-Einstein关系式，运用Nicomp软件进行处理得到相关直径数据。

2 结果

2．1 溶解度试验 油相中，3种溶剂对鸦胆子油溶解情况均较好，不分层。乳化剂中，Tween-80和Span-80对鸦胆子油溶解情况较好，不分层。十二烷基硫酸钠部分溶解，助乳化剂中PEG-400与鸦胆子油部分溶解，其余均分层明显。

2．2 温度考察 由表1可见，混合组分在20～50℃范围内，温度越高，体系自乳化时间越快。在乳化温度为40～50℃时，乳化效果较好。结合人体内温度考虑，将该体系的乳化温度确定为40℃。

表1 温度考察结果

2．3 加水量考察 在2．2项温度为40℃基础上，考察加水量。见表2随着加水量增加，乳滴粒径有明显减小的趋势，乳化时间变化不明显，乳液的澄明度越好。在50 mL～100 mL时乳滴粒径差异较大，在100 mL以上，差异相对较小。结合处方用量及人体内正常胃液量综合考虑，将100 mL作为该处方最适加水量。

2．4 绘制伪三元相图

2．4．1 油相比例的确定 从绘制的5个相图自微乳化区域结果中，我们发现当油相GTCC-GMO=1∶1时的相图中自微乳化区域最大，见图1。故将油相GTCC∶GMO的最佳比例确定为1∶1。

表2 加水量考察结果

图1 GTCC∶GMO=1∶1时自微乳化区域图

2．4．2 处方的确定 在1．2．3．1项油相 GTCCGMO=1∶1的基础上，见图2a、b，得出鸦胆子油的载药量在0．75～1．5之间较为合适，结合图2c相图的考察结果，得到本处方自微乳化效果较好的处方比例为:GTCC(1．0 g质量分数:15．38%);GMO(1．0 g质量分数:15．38%);吐温 80(2．5 g 质量分数:38．46%)PEG400(0．5 g 质量分数:7．69%);鸦胆子油(1．5 g质量分数:23．08%)。

该处方在40℃下，加水后不产生胶状团块，能快速乳化，形成具乳光的半透明状乳液，重复验证乳化效果稳定，不发生分层。经测定其粒径大小为86 nm。见图3。

2．5 自乳化乳液初步物理稳定性考察 根据3个月的初步物理稳定性考察结果，可知该SEDDS体系稳定，其乳液离心后静置3个月无破乳、乳析及分层现象发生。3组乳液的乳滴粒径变化差异不大，见表3制得的乳液物理稳定性良好。

表3 乳滴粒径结果

图2 不同鸦胆子油用量下的相图乳化区域图

图3 最佳处方比例的体积平均粒径曲线分布图

2．6 粒径及粒度分布存在的问题研究 激光粒度扫描仪测定乳滴粒径时，运用动态光散射原理，通过测定样品乳液中做布朗运动的小乳滴产生散射光强度变化来测定乳滴粒径大小的。若混浊乳液粒径较大，运动缓慢或静止，散射光的强度变化减缓或消失，不能产生多普勒频率漂移，可能会被扫描仪忽略而只能检测到在大乳滴间隙间小乳滴的粒子半径，从而导致测量误差。以图2中的相图a的乳滴粒径测定结果为例，见表4，透明或半透明乳液的粒径较小，在150 nm以内，差异不大。而具乳光的乳白色或乳白色混浊液之间的粒径值差异显著，从几十个纳米至上千个纳米大小的乳滴均有。分析该类乳白色混浊液，如样品34号经显微观察结果见图4;在640倍数下，能观察到乳滴的大小和形态。经测定多个样本，视野中较大的粒径在15 μm左右，其余粒径大多在几个微米至15 μm之间;而采用激光粒度仪测定的仅为样品中少部分粒径小的乳滴。

表4 图2中相图a的稳定性、粒径结果

此外，还应注意在同一时间测定同一样品，实际粒径大小是一定的，因采用不同的粒径分布表示方法，得出的粒径平均值各不相同，但其结果都是正确的。体积的平均径一般大于数量的平均径。二者的换算:在体积分布中1个直径为1 μm的颗粒 =1 000个直径为1 nm的颗粒，忽略或丢失1个1 μm粒子等同于忽略或丢失1 000个1 nm粒子。故应根据实验需要选择适宜的表示方法，本实验选用体积平均直径数据作为结果。

图4 电子显微镜下乳白色混浊液中乳滴观察片

3 讨论

3．1 由温度考察结果可知乳化温度在40～50℃时，自乳化效果较好。因该处方选用非离子型表面活性剂，组分混合时的温度也会影响乳化结果。下一步实验考虑将该处方制成无水的自乳化胶囊制剂，在体内进行乳化，并拟定相应的质量标准［7-8］。

3．2 在测定乳白色混浊液的粒径时，结果与理论出现了差异，排除操作上的误差，经分析是因选择的激光粒度测定仪量程在1 nm～5 μm之间，混浊乳液乳滴过大，超出测量范围，从而产生误差，使用显微镜观察，能清楚地观察到粒子的形态大小。故对于激光粒度仪给出的数据，我们需知道哪些值是由仪器实际测量的，哪些是由测量值导出的，不能完全依靠导出数据。

3．3 此外，pH值、极性、HLB值、体内代谢及食物等方面对鸦胆子油SEDDS也存在一定的影响。在中药SEDDS体系中，药物的性质、油相、乳化剂和助乳化剂的选择及比例用量是能否形成自乳化体系的关键。因鸦胆子油本身具有潜在的油相性质，在保证自乳化效率、及载药量的情况下，为使处方组成简洁，有待于进一步筛选直接使用鸦胆子油为油相的SEDDS体系。

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