正交设计法对仙灵骨葆颗粒水提取工艺的研究

王君

（哈药集团中药二厂，黑龙江 哈尔滨 150078）

仙灵骨葆颗粒是由淫羊藿、丹参、续断、补骨脂、地黄、知母等中药制成的复方制剂，具有温肾壮阳、接骨续筋、强身健骨之功能。主要用于用于骨质疏松和骨质疏松症，骨折，骨关节炎，骨无菌性坏死等疾病的治疗[1～2]。本文采用L9（34）正交试验设计，以综合指标为评价指标，考察水加入量（A）、提取时间、提取次数三个因素对综合指标的影响，确定仙灵骨葆颗粒合理可行的水提取制备工艺条件。

1 仪器与试药

Waters515泵；Waters 486检测器；N2000色谱工作站。

淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）；处方中所用药材均符合中国药典2005年版一部标准；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

2 实验设计

本文主要研究仙灵骨葆颗粒水提取工艺研究部分，以淫羊藿苷和干膏收率相结合的综合指标作为评价指标，通过对水加入量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）三个考察对象的研究，进行正交试验优化，筛选出最佳水提取工艺。

3 提取工艺的研究

3.1 提取方法

取淫羊藿、续断、知母、补骨脂、地黄等五味药材，按正交设计表的提取方法进行试验，合并提取液，浓缩转移至250ml量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，即得。

3.2 正交试验设计

采用L9（34）正交试验设计进行试验，选择A、B、C三个因素作为考察因素，以淫羊藿苷和干膏收率相结合的综合指标为考察指标，因素水平安排见表1。

3.2.1 干膏收率考察

精密量取上述9种溶液各10ml，分别置于已称重的蒸发皿中，置于水浴锅上蒸去大部分水分后，放入烘箱内105℃干燥5小时，取出，放冷，迅速称重并计算。

干膏收率（%）＝〔（W′×V）/（V′×W）〕×100%

上述式中：W′-干膏重

V′-量取药液体积

V-定容体积

W-药材重

表1 因素水平表

3.2.2 淫羊藿苷的含量测定[3]

（1）色谱条件与系统适用性试验。色谱柱：Thermo C18（4.6mm×250nm,5um）；流动相：甲醇-2.2%醋酸水溶液（57：43）为流动相；检测波长为270nm，流速1.0ml/min。柱温：常温。理论板数按淫羊萑苷峰计算应不低于1500。

（2）对照品溶液的制备。精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥24小时的淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液。

（3）供试品溶液的制备。精密量取上述溶液5ml，转移至25ml量瓶中，加入70%乙醇至刻度，密塞，称定重量，超声处理1小时，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，即得供试品溶液。

（4）测定法。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

（5）线性相关性试验。配制淫羊藿苷对照品溶液，浓度分别为0.0520mg/ml，0.104mg/ml，0.156mg/ml，0.312mg/ml，0.624mg/ml，分别精密吸取10ul进样，记录色谱图，测定其峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），淫羊藿苷浓度为横坐标（X），绘制标准曲线，并计算回归方程为：Y=22513863.2X+285107.6(Y，峰面积，X，浓度)，（r=0.9999）。

结果表明，在0.052mg/ml-0.624mg/ml浓度范围内，淫羊藿苷浓度与峰面积有良好的线性关系。

3.3 试验结果

正交试验结果见表3、方差分析表见表4。

综合指标＝干膏重/最大干膏重×40+淫羊藿苷含量/最大淫羊藿苷含量×60

结果表明：按综合指标考虑，对仙灵骨葆颗粒水提取工艺的影响程度为A＞B＞C，即加入水量＞煎煮时间＞煎煮次数。最佳水平为A3B3C3即处方药材加14倍量水，提取3小时，提取3次。

3 讨论

仙灵骨葆颗粒在仙灵骨葆片剂的基础上改剂型而成，故在制备工艺研究中保持原有制法，即淫羊藿、续断、补骨脂、地黄、知母等五味中药材用水提取、浓缩成稠膏，丹参分成细粉混入稠膏内制成软材，再制粒、干燥整粒，即得。本试验研究通过对加入水量、煎煮时间、煎煮次数的系统考察，细化了工艺参数，能够更好的指导生产。同时，综合指标的引入，对于评价工艺的优劣和质量指标的建立有重要的指导意义。

表2 淫羊藿苷浓度与峰面积的关系

表3 正交试验结果

表4 方差分析表

[1]石玉印.仙灵骨葆胶囊临床验证总结.世界中医骨伤科杂志 2000；2（2）：18-21.

[2]周红英，黄炳辉，等.133例骨质疏松症患者的治疗方法研究.中国临床医药研究杂志.2003；110：21-22.

[3]马新飞，殷放宙，李林，等.HPLC测定仙灵骨葆片中淫羊藿苷的含量.中华中医药学刊，2007，25（10）：2194-2195.