一种金标法检测人绒毛膜促性腺激素的线性范围评价

刘 非， 杨红玲， 郭彩娇， 梁绮华

(广东省广州市妇女儿童医疗中心珠江新城院区检验科， 广东 广州 510623)

人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)是胎盘合体滋养细胞合成的糖蛋白激素，由α和β亚基组成，因β亚基羧基端最后的24个氨基酸为该亚基所特有，故临床上通过检测β－HCG来反映血清中HCG的水平［1］。由于β－HCG个体间差异很大，临床上多通过动态检测血清β－HCG水平对生理妊娠和病理妊娠进行诊断、监测或治疗，但多次采血限制了β－HCG临床应用。有研究指出，晨尿β－HCG浓度略低于血清，且呈平行关系［2，3］。尿液 β－HCG检测可能有助于对同一患者进行动态、无创的监测，便于临床医师及时对患者做出临床判断，及时干预。我院引进了U2/HCG－DOT金标定量检测仪，仪器标示其定量尿液 β－HCG具有较宽的线性范围(25mIU/mL－15000mIU/mL)，为确保临床应用的可靠性，对其线性范围进行验证。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：本实验所用到的标本均来自于广州市妇女儿童医疗中心珠江新城院区患者新鲜晨尿标本，－20℃冷冻保存备用。

1.2 仪器和试剂：U2/HCG－DOT金标定量检测仪(奥普生物)，与其配套的人绒毛膜促性腺激素(HCG)金标斑点法快速定量检测试剂盒(HCG－DOT)。

1.3 方法：采用改良 Doumas方法［4］，根据仪器标示的线性范围(25mIU/mL－15000mIU/mL)，以及仪器说明中“样本中β－HCG含量大于100mIU/mL和小于100mIU/mL所用的标准曲线不同”，进行两次独立的线性范围评价试验。第一次评价的线性范围为100mIU/mL－15000mIU/mL，选择一个尿β－HCG定性为弱阳性的低值样本(L1)，和一个尿β－HCG定量在15000－20000mIU/mL的之间的高值样本(H1)进行试验。将高、低值两个样本按等间距混合(L1、5L1+1H1、4L1+2H1、3L1+3H1、2L1+4H1、1L1+5H1、H1)［5］，形成 7个样本，每个样本重复测定4次，记录分析结果，进行离群值检验后，使用SPSS13.0统计软件进行线性回归分析［5］。第二次评价的线性范围为 25mIU/mL－100mIU/mL，选择一个尿β－HCG定性为阴性的低值样本(L2)和一个尿β－HCG定量在100－200mIU/mL的之间的高值样本进行试验(H2)。将高、低值两个样本按等间距混合(L2、4L2+1H2、3L2+2H2、2L2+3H2、1L2+4H2、H2)，形成6个样本，每个样本重复测定4次，记录分析结果。进行离群值检验后，使用SPSS13.0统计软件进行多项式回归分析。

2 结果

2.1 第一次线性范围评价试验，L1=80 mIU/mL，H1=17456 mIU/mL;结果如表1。

表1 第一次线性范围评价试验

每个浓度水平进行4次重复测定，求得CV%，均满足不精密度可接受范围(＜7%)，以预期值为横坐标，检测均值为纵坐标作散点图，并进行线性回归分析(图1)，r2=0.9929 ＞0.95，b=0.9525，不在 0.97－1.03之间，观察趋势线发现，最高浓度点明显偏离趋势线，剔除后，重新进行回归分析(图2)。r2=0.9995＞0.95;b=1.0242 在 0.97－ 1.03 之间;a=42.649，作 a与0 差异的 t检验：ta=0.473，＜ta0.05，10=2.228。说明a与0在统计学上无显著性差异。结论：方法在80－13228 mIU/mL浓度范围内成线性。

2.2 第二次线性范围评价试验，L2=5.25 mIU/mL，H2=186 mIU/mL结果如表2。

因U2/HCG－DOT金标法检测尿β－HCG时，灵敏度不及化学发光，当样本中β－HCG含量小于25mIU/mL时，不能报告具体浓度，仅报告为小于25mIU/mL，所以第一点不能进行评价，剔除第一点后以预期值为横坐标，检测均值为纵坐标做散点图，并进行线性回归分析(图3)r2=0.9979 ＞ 0.95，b=1.029，在 0.97－1.03之间，a=4.7975，作 a与 0差异的 t检验：ta=1.511，＜ta0.05，8=2.306，说明 a 与 0 在统计学上无显著性差异。结论：方法在41－186 mIU/mL浓度范围内成线性。

表2 第二次线性范围评价试验

3 讨论

β－HCG水平检测已经成为监测和评价妊娠非常重要的指标。临床上通过检测血清β－HCG水平可以对生理妊娠和病理妊娠进行诊断和监测，提示妊娠是否正常，预测先兆流产和评价保胎效果;可以判断产后和人工流产后有无胎盘残留;可以对IVF妊娠进行评价;可以用于异位妊娠的早期诊断和治疗手段选择及疗效评价，还可以用于滋养细胞肿瘤的诊断和疗效评价［6］。目前，临床实验室通常采用化学发光法对血清β－HCG进行定量检测，其具有精密度好，灵敏度高的优点。但是，需要购买昂贵的化学发光分析仪和试剂，检测成本高，加重患者负担。

U2/HCG－DOT金标定量检测仪使用金标斑点法快速定量检测试剂盒(HCG－DOT)，利用固相夹心免疫法，形成固相抗α－HCG单克隆抗体 －样本β－HCG－标记的β－HCG单克隆抗体的复合物，呈红色斑点，将斑点红色强度与仪器内存标准曲线比较，实现对样本中β－HCG的快速定量。其具有操作简单，可单个样本独立检验，随到随测，检测时间短，能在3－5min完成对血清和尿β－HCG的定量，仪器试剂成本低，适合床边检验(POCT)等优点。

U2/HCG－DOT金标法定量尿β－HCG可以实现对妊娠进行连续、高效、无创的评价，在临床应用时，其检测性能成为值得关注也必须评价的方面。仪器标示的定量范围为25－15000mIU/mL，当样本中β－HCG浓度小于100时无法读出，显示为“＜100 mIU HCG/mL”，此时可用肉眼判断，凡反应板无肉眼可见红色斑点，报告为“＜25mIU/mL”;凡有显色斑点，改变标准曲线，在大于25mIU/mL小于100mIU/mL范围内定量。据此，设计了两次线性范围评价试验，分别覆盖高低两个标准曲线适用范围。实验结果显示该方法在80－13228 mIU/mL和41－186 mIU/mL两个试验浓度范围成线性。这表明该方法具有较宽的线性范围，基本能够满足产科β－HCG定量需要，当遇到浓度超过13228mIU/mL的标本时，需一定比例稀释后重测，结果乘以稀释倍数后报告。

值得注意的是，U2/HCG－DOT金标法定量检测仪的标准曲线是存储在仪器内部的，而并非每一批号的配套试剂盒有自带的标准曲线数据，如何能够保证不同批号的试剂对相同的标准曲线均适用，这就需要在新旧批号试剂盒交替时，进行不同批号试剂间的比对试验来确保检测的准确度。

［1］乐杰.妇产科学［M］.第7版.北京：人民卫生出版社，2008.29－32.

［2］鸿麟，肖玢，金玮.静脉血β－人绒毛膜促性腺激素相关性的探讨［J］.生殖医学杂志，2006，(4)：268－269.

［3］Benjapibal M，Wataganara T，Senawong S，et al.The correlation of beta－subunit human chorionic gonadotropin level in the serum and first morning urine of patients with gestational trophoblastic disease［J］.Med Assoc Thai，2001，84(7)：1000－1005.

［4］冯仁丰.临床检验质量管理技术基础［M］.上海：上海科学技术文献出版社，2007.66－136.

［5］王治国.临床检验方法确认与性能难证［M］.北京：人民卫生出版社，2009.

［6］Cole LA.New discoveries on the bioloy and detection of human chorionic gonadotropin［J］.Reprod Biol Endocrinol，2009，26(7)：8.