苯甲酸在乳癖合剂中的用量与抑菌效能的研究

严 霞，曹雅军

(湖北中医药大学附属襄阳市中医医院药学部，湖北 襄阳 441000)

湖北中医药大学附属襄阳市中医医院自制的乳癖合剂是根据本院乳腺病专科协定处方制备而成的中药复方制剂，主要由海藻、夏枯草、当归和生牡砺等药材组成，具有疏肝理气、软坚散结、调摄冲任的功效，主要用于治疗乳腺增生[1]、乳腺纤维瘤和乳头溢液等症。本院药品检验室近期对多个批次的乳癖合剂进行质量检查，发现部分批次的乳癖合剂微生物限度检查不合格，并且不合格批次的pH值均>5.0。鉴于此，作者在严格按照制剂标准操作规范进行生产的前提下，对乳癖合剂的防腐剂用量进行了研究，考察了0.05%的羟苯乙酯分别与0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的苯甲酸联用的抑菌效能，筛选出最合理的苯甲酸用量，为提高乳癖合剂的质量提供了实验依据。

1 材 料

1.1 仪器 SW-CJ-2G双人单面水平超净工作台(河南兄弟仪器设备有限公司)；SPX-150B型生化培养箱(上海跃进医疗器械厂)； TN-100C型托盘扭力天平(昆山莱博尔实验室科技有限公司)；MX-9000型pH计(哈尔滨亿唐科技有限公司)。

1.2 试剂和药品 营养琼脂培养基(批号201303)、玫瑰红钠琼脂培养基(批号20130122)均为青岛海博生物技术有限公司生产；胆盐乳糖培养基(批号20130110，杭州拓目科技有限公司)；pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(批号20130330，南京便诊生物科技有限公司)；大肠杆菌[CMCC(B)44102(由中国食品药品检定研究院提供)；乳癖合剂(含0.05%羟苯乙酯，批号 20120814)1000 ml，共4份(湖北中医药大学附属襄阳市中医医院自制)；苯甲酸(药用纯，批号 20130118，杭州龙辉化工有限公司)；羟苯乙酯(药用纯，批号 20120922，郑州帝斯曼科技有限公司)。

2 方法和结果

2.1 样品溶液的制备 在4份新制备的乳癖合剂中分别加入苯甲酸1.5、2.0、2.5、3.0 g，使苯甲酸终浓度分别为0.15%、0.20%、0.25%和0.30%。搅拌溶液,煮沸10 min，放冷。分别取上述样品溶液适量，测定pH值，余者备用。

2.2 微生物检测方法 取2.1项下4份乳癖合剂各10 ml，加pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，混匀，得到1∶10的供试液，再分别稀释成1∶100、1∶1000的供试液，得到含不同浓度苯甲酸的各稀释级别的乳癖合剂稀释液。按照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅩⅢC法[2]，在超净工作台上进行微生物限度检测。用不同培养基培养上述稀释液。细菌、霉菌、酵母菌和大肠杆菌培养分别用营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基和胆盐乳糖培养基。以pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为阴性对照，阴性对照检测应无菌生长。阳性对照液的加菌量为10～100 cfu，按相应控制菌检查法检查，阳性对照液应检出相应的控制菌。对供试液中的细菌、霉菌、酵母菌和大肠杆菌分别检查，每个稀释级别进行3次独立的平行实验。细菌、霉菌及酵母菌计数取平均值，大肠杆菌检测结果以阴性或阳性表示。

2.3 微生物检测结果 同一批次4份乳癖合剂的微生物检测结果见表1。由表1可以看出，随苯甲酸用量的增大，乳癖合剂的pH值逐渐降低，细菌、霉菌及酵母菌计数随之下降，表明抑菌效能随苯甲酸用量的增大逐渐增强。苯甲酸终浓度为0.15%和0.20%的乳癖合剂pH值均>5.0，微生物限度检查不合格。苯甲酸用量为0.30%与0.25%的抑菌效能相当，因此确定以0.25%的苯甲酸联合0.05%的羟苯乙酯作为乳癖合剂的防腐剂。

3 讨 论

pH值对苯甲酸的抑菌效果影响很大。在酸性条件下，苯甲酸对细菌、霉菌和酵母菌均有抑制作用，其抑菌效能的最适pH值为2.5～4.0，一般以<5.0为宜。降低pH值对苯甲酸发挥抑菌、防腐作用有利。当pH值>5.0时，为了保证抑菌效能，苯甲酸用量不得<0.5%[3]。羟苯乙酯对霉菌的抑菌效能较强，但对细菌作用较弱。故本院生产的乳癖合剂中，将苯甲酸与羟苯乙酯(0.05%)联合使用，以达到增强防腐、抑菌效能的目的。乳癖合剂自身pH值较高(5.5)，一般的防腐剂在常规剂量均达不到预期效果。由于苯甲酸的酸性较食品用酸度调节剂乙酸更强，因此，在pH值>5.0的合剂中，应增大苯甲酸的浓度，使其在抑制微生物生长繁殖的同时，调低合剂的pH值，有利于苯甲酸更好地发挥抑菌作用。

本研究确定以0.25%的苯甲酸联合0.05%的羟苯乙酯作为乳癖合剂的防腐剂，并进一步改进生产过程中可能造成微生物污染的各个环节，如做好环境卫生和空气的净化，对制药设备和用具及时进行洁净与灭菌处理，注意操作人员的个人卫生等，从而使乳癖合剂的微生物限度控制达标。

【参考文献】

[1] 矫 建，陈华元.乳癖合剂治疗乳腺增生病109例[J].南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(6)：368-369.

Jiao Jian,Chen HuaYuan.Treatment of 109 cases of mammary glands hyperplasia with Rupi mixture[J].J Nanjing Tradit Chin Med Univ(Nat Sci)，2002，18(6)：368-369.In Chinese.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典. 2010年版 一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010：附录79-82.

State Pharmacopoeia Committee.Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010 ed,Vol 1[S].Beijing:Chinese Medical Science Press，2010：Appendix 79-82.In Chinese.

[3] 张兆旺.中药药剂学[M].北京：中国中医药出版社,2003：57.

Zhang ZhaoWang.Pharmaceutics of Chinese materia medica[M].Beijing:Chinese Press of Traditional Chinese Medicine，2003：57. In Chinese.