半枝莲总黄酮抗甲型H1N1流感病毒感染的药效学研究

赵铁华，邓淑华，杨鹤松，崔晓兰

(1.河北师范大学药物研究所，河北石家庄 050024;2.承德医学院中药研究所，河北承德 067000;3.中国中医科学院中药研究所，北京 100700)

半枝莲为唇形科植物半枝莲(Scutellaria barbataD.Don)的干燥全草，具有清热解毒、化瘀、利尿等功效［1］，黄酮类化合物是其主要有效成分［2］。本文报道了我们采用大孔树脂吸附技术制备的半枝莲总黄酮对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的药效实验结果。

1 材料与方法

1.1 受试药物 半枝莲总黄酮为河北师范大学药物研究所采用AB-8型大孔树脂吸附方法制备，经鉴定主要由野黄芩苷、芹菜苷元、白杨素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、红花素、异红花素等成分组成，黄酮类成分质量分数0.513。病毒唑为湖北制药工业研究所生产(原料药，批号970708)。按动物体表面积比例换算等效剂量法折算受试药物的小鼠临床等效剂量为实验基本剂量，病毒唑为0.07 g·kg－1，半枝莲总黄酮为0.10 g·kg－1，并设0.5和2.0倍半枝莲总黄酮基本剂量实验组。受试药物使用时以蒸馏水配制所需浓度，按小鼠体质量以0.25 ml· (10 g)－1容积灌胃给药。

1.2 实验动物和病毒株 KM小鼠，清洁级(二级)，合格证号:京动许字(1999)第012号，♀♂兼用，体质量(14±2)g，由北京生物制品研究所动物饲养室提供。甲型HINI流感病毒FM1株由中国预防医学科学院病毒研究所提供，中国中医科学院中药研究所药理室常规传代，对小鼠的半数致死量(LD50)为 10－5.75。

1.3 病毒感染致小鼠肺炎的预防和治疗试验［3－4］KM小鼠按体重分层随机分为6组，分别为半枝莲总黄酮3个剂量组、病毒唑组、病毒及正常对照组，每组10只小鼠。除正常对照组外，将小鼠用乙醚轻度麻醉，以15倍LD50病毒液滴鼻感染，每只0.05 ml。感染前1 d开始按“1.1”方法配制药物浓度和容积灌胃给药，每天2次，连续5 d，对照组在同等条件下以蒸馏水灌胃。d 6称取小鼠体重后处死，解剖摘取全肺称重，计算肺指数值，并计算肺指数抑制率。肺指数=［肺重(g)/体重(g)］×100;肺指数抑制率 =(病毒对照组肺指数均值－试验组肺指数均值)/病毒对照组肺指数均值。

1.4 病毒感染致小鼠死亡的保护试验［3－4］生理盐水稀释0.5倍～4倍LD50的病毒液，每个稀释度10只小鼠，每只0.05 ml滴鼻感染，观察动物的死亡情况。经观察确定小鼠死亡数为感染小鼠数0.9的2倍LD50病毒液为实验时的病毒感染量。取KM小鼠按体重分层随机分成5组，分别为半枝莲总黄酮3个剂量组、病毒唑组及病毒感染对照组，每组20只小鼠。各给药组按“1.1”方法配制药物浓度和容积灌胃给药，每天2次，连续9 d，病毒对照组在同等条件下给予蒸馏水。给药d 2各组小鼠用乙醚轻度麻醉后，以2倍LD50病毒液滴鼻感染，每只0.05 ml。记录感染后小鼠的死亡数，计算死亡率、死亡保护率及生命延长率。死亡率 =动物死亡数 /动物总数;死亡保护率 =(对照组死亡率－实验组死亡率)/对照组死亡率;生命延长率 =(实验组平均存活天数－感染组平均存活天数)/感染组平均存活天数。

2 结果

2.1 半枝莲总黄酮对甲型H1N1流感病毒感染致小鼠肺炎的预防和治疗作用 实验结果，半枝莲总黄酮0.2 g·kg－1剂量组的肺指数值明显低于病毒对照组(P＜0.05);0.1 g·kg－1剂量组的肺指数值低于病毒对照组，但差异无显著性。(见 Tab 1)。

Tab 1 Effects of total flavone of Scutellaria barbata on lung index in infected mice(±s，n=10)

Tab 1 Effects of total flavone of Scutellaria barbata on lung index in infected mice(±s，n=10)

##P ＜0.01 vs normal;*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01 vs virus.

Group Dose/g·kg－1 Lung index(g lung weight/100 g body weight)Inhibition Normal － 0.92 ±0.06 －Virus － 1.88 ±0.41## －Ribavirin 0.07 1.04 ±0.10＊＊ 0.45 total flavone of 0.20 1.39 ±0.37* 0.26 Scutellaria barbata 0.10 1.55 ±0.36 0.18 0.05 1.86 ±0.30 0.01

2.2 半枝莲总黄酮对甲型H1N1流感病毒感染致小鼠死亡的保护作用 实验结果，半枝莲总黄酮3个剂量组小鼠的死亡数均少于感染对照组，但差异无显著性;0.2 g·kg－1和0.1 g·kg－1剂量组小鼠的存活时间明显延长，较感染对照组差异有显著性(P＜0.01)。见Tab 2。

Tab 2 Effect of total flavone of Scutellaria barbata on death rate and survival time of mouse infected influenza virus

3 讨论

1990 年，Nagai等［5］曾报告半枝莲提取的 4'-羟基汉黄芩素对流感病毒A/PP/8/34有明显抑制作用。2009年，郭姗姗等［6］报道了半枝莲总黄酮对副流感病毒(PIV-1)感染的拮抗作用［6］。除以上报道外尚未检索到半枝莲提取黄酮类化合物抗呼吸道感染相关病毒的研究资料。

本文实验结果，适宜剂量下的半枝莲总黄酮对甲型H1N1流感病毒所致的小鼠感染及其导致的死亡表现了一定的治疗或(和)拮抗作用，并且其药效表现了剂量相关特征。相关研究提示，半枝莲总黄酮抗甲型H1N1流感病毒作用的机制，可能与半枝莲黄酮类成分抑制病毒对宿主细胞的吸附、抑制病毒复制早期阶段病毒颗粒与细胞内涵体/溶酶体的融合，以及促进吸附病毒宿主细胞膜流动性的恢复以维持细胞膜的正常功能有关［5－7］。

［1］余传隆.半枝莲［M］//余传隆，黄泰康，丁志遵，等，主编.中药辞海(第1卷).北京:中国医药科技出版社，1993:1825.

［1］Yu C L.Scutellariae barbata［M］//Yu C L，Huang T K，Ding Z Z，et al.Chinese Medicine Dictionary(Vol 1).Beijing:China Medical Scince Press，1993:1825.

［2］邹箴蕾，吴启南.半枝莲的化学成分及药理作用研究进展

［J］.时珍国医国药，2005，16(2):149－50.

［2］Zhou Z L，Wu Q N.Chemical constituents and pharamcological action resaerch progress on Scutellariae barbata［J］.Lishizhen Med Mat Med Res，2005，16(2):149 －50.

［3］刘方舟，时 瀚，时宇静，等.鱼腥草注射液体内抗流感病毒药效学研究［J］.药学学报，2010，45(3):399－402.

［3］Liu F Z，Shi H，Shi Y J，et al.Pharmacodynamic experiment of the antivirus effect of Houttuynia Cordata injection on influenza virus in mice［J］.Acta Pharma Sin，2010，45(3):399 －402.

［4］万巧凤，顾里刚，殷胜俊，等.黄芩苷对FM-1肺炎小鼠肺组织细胞凋亡FAS/FAS-L系统的影响［J］.中国药理学通报，2011，27(11):1555－9.

［4］Wan Q F，Gu L G，Yin S J，et al.Effect of Baicalin on cell apoptosis FAS/FAS-L system of pneumonia mice lung tissue infected with FM1［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27(11):1555 － 9.

［5］Nagai T，Miyaichi Y，Tomimori T，et al.Inhibition of infiuenza virus sialidase and anti-influenza virus activity by plant flavonoads［J］.Chem Pharm Bull，1990，38(5):29 －32.

［6］郭姗姗，时宇静，高英杰，等.半枝莲总黄酮抗副流感病毒的作用机制［J］.药学学报，2009，44(12):1348－52.

［6］Guo S S，Shi Y J，Gao Y J，et al.The cytology mechanism of anti－parainfluenza virus infection of total flavone of Scutellaria barbata［J］.Acta Pharm Sin，2009，44(12):1348 －52.

［7］何子华，付阳劲，韦兰萍，等.黄芩苷与利巴韦林联用体内外抗流感病毒作用［J］.中国药理学通报，2011，27(11):1560－4.

［7］He Z H，Fu Y J，Wei L P，et al.Effect of the combination of baicalin and ribavirin on influenza A virus inflectionin vitroandin vivo［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27(11):1560 －4.