鸡血藤总黄酮对大鼠急性心肌缺血的保护作用

李 丽， 王林萍

(淄博市中心医院干保科，山东 淄博255036)

鸡血藤CauLis spatholobi 为豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn 的干燥藤茎，是一味传统的活血化瘀中药，本草论著中记载，它具有去瘀血、生新血之功效，为“血分之圣药”，主要含有黄酮类、酚类和三萜类等化合物［1］。鸡血藤总黄酮为鸡血藤的醇提物，具有抗肿瘤［2］活性，并且对脑缺血［3］和肝损伤有保护作用［4］。目前，关于鸡血藤总黄酮对心肌缺血的研究尚无报道。本实验拟采用左冠状动脉前降支结扎法，用于观察其对大鼠急性心肌缺血的保护作用。

1 材料

1.1 药品与试剂 鸡血藤总黄酮(滨州医学院医药研究中心)，提取方法为称取鸡血藤适量，烘干，粉碎，95%乙醇超声提取2.5 h，抽滤，重复2 次，合并滤液，减压回收乙醇，得到鸡血藤提取物，以芦丁为对照品，测得其中总黄酮的含有量≥80%;单硝酸异山梨酯片(齐鲁制药有限公司);乌拉坦(天津基准化学试剂有限公司);谷草转氨酶(GOT)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(北京中生北控生物科技股份有限公司);超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2 实验仪器 FX-2111 单道心电图机(北京福田电子医疗仪器有限公司);DL-4000B 冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);AUTOLAB 全自动生化分析仪 (意大利AMS公司)。

1.3 实验动物 清洁级SD 大鼠，雄性，体质量200 ～250 g (北京维通利华实验动物技术有限公司，合格号SYXK［鲁］20060009)。

2 方法

2.1 动物分组、给药及模型的复制 参考文献［5］，取心电图检测合格的大鼠60 只，随即分为假手术组、模型组、单硝酸异山梨酯(10 mg/kg)组、鸡血藤总黄酮(20、40 和80 mg/kg)剂量组。其中，给药组每天灌胃给药(10 mL/kg)1 次，连续7 d，而假手术组和模型组灌胃给予等体积的去离子水。于末次给药后1 h，20% 乌拉坦(0.5 mL/100 g)腹腔注射麻醉，仰位固定于手术台上，记录正常标准Ⅱ导联心电图，沿胸骨左缘3 ～4 肋间开胸，暴露心脏，于距左心耳下缘2 mm 水平处，结扎大鼠左冠状动脉前降支(假手术组仅穿线不结扎)，结扎后即刻挤出胸腔气体，关闭胸腔，迅速缝合胸壁。

2.2 心电图ST 段的测定 于冠脉结扎前所记录的心电图作为缺血前值(基础值)，结扎后于30、60、90、120 和180 min 分别记录心电图，测量并计算ST 段抬高幅度。

2.3 心肌组织中SOD 活性及MDA 水平的测定 实验结束后，分离心肌组织，以4 ℃生理盐水冲洗表面的血液残留，冰浴下制成10%组织匀浆液，离心，取上清液，按照考马斯亮兰试剂盒操作说明测定蛋白、心肌组织中SOD 活性及MDA 的水平。

2.4 血清中GOT、CK 和LDH 水平的测定 于术后180 min 腹主动脉取血，离心取血清，测定GOT、CK 和LDH的水平。

2.5 心肌组织病理形态学观察 取左心室缺血区心肌组织，中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，切片，HE 染色，光学显微镜下观察［6］。

3 结果

3.1 鸡血藤总黄酮对心肌缺血大鼠心电图ST 段的影响 模型组ST 段抬高幅度显著高于假手术组(P ＜0.01)，表明大鼠急性心肌缺血模型复制成功。与模型组相比，鸡血藤总黄酮40 和80 mg/kg 剂量组ST 段抬高幅度显著降低(P ＜0.05，P ＜0.01)，具有统计学意义，而20 mg/kg 剂量组不明显(P ＞0.05)。单硝酸异山梨酯组ST 段抬高幅度与模型组相比，差异有统计学意义(P ＜0.05，P ＜0.01)，见表1。

表1 鸡血藤总黄酮对左冠状动脉前降支结扎大鼠ST 段的影响(±s)

表1 鸡血藤总黄酮对左冠状动脉前降支结扎大鼠ST 段的影响(±s)

注:与假手术组比较，＊＊P ＜0.01;与模型组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

组别 剂量/(mg·kg -1) 基础值/mV 30 min/mV 60 min/mV 90 min /mV 120 min/mV 180 min/mV假手术组 — 0.06 ±0.02 0.07 ±0.02 0.08 ±0.02 0.06 ±0.02 0.07 ±0.02 0.06 ±0.02模型组 — 0.07 ±0.02 0.46 ±0.09＊＊ 0.45 ±0.07＊＊ 0.45 ±0.06＊＊ 0.39 ±0.07＊＊ 0.37 ±0.07＊＊单硝酸异山梨酯 10 0.06 ±0.01 0.32 ±0.09△△ 0.34 ±0.06△ 0.35 ±0.05△ 0.33 ±0.08△ 0.30 ±0.05△鸡血藤总黄酮 80 0.06 ±0.02 0.34 ±0.06△ 0.32 ±0.08△△ 0.32 ±0.07△△ 0.32 ±0.05△△ 0.29 ±0.06△△鸡血藤总黄酮 40 0.08 ±0.02 0.35 ±0.08△ 0.35 ±0.07△ 0.36 ±0.06△ 0.34 ±0.06△ 0.31 ±0.06△鸡血藤总黄酮 20 0.07 ±0.01 0.43 ±0.09 0.44 ±0.09 0.43 ±0.07 0.42 ±0.07 0.36 ±0.08

3.2 鸡血藤总黄酮对心肌组织中SOD 活性和MDA 水平的影响 与假手术组相比，模型组大鼠心肌组织中SOD 活性显著降低(P ＜0.01)，而MDA 水平显著升高(P ＜0.01)，说明急性心肌缺血导致组织的抗氧化能力显著降低。鸡血藤总黄酮40 和80 mg/kg 剂量组大鼠心肌组织中SOD 活性显著高于模型组，而MDA 水平显著低于模型组，差异具有统计学意义(P ＜0.01);与模型组相比，单硝酸异山梨酯组SOD 亦升高，并降低MDA，具有统计学意义 (P ＜0.01)，见表2。

3.3 鸡血藤总黄酮对血清GOT、CK 和LDH 水平的影响模型组血清LDH、CK 和GOT 水平显著高于假手术组(P ＜0.01)，表明大鼠急性心肌缺血模型复制成功。与模型组相比，鸡血藤总黄酮40 和80 mg/kg 剂量组三者水平显著降低(P ＜0.05，P ＜0.01)，而20 mg/kg 剂量组不明显(P ＞0.05)。单硝酸异山梨酯组三者水平较模型组显著降低，具有统计学意义(P ＜0.01)，见表3。

表2 鸡血藤总黄酮对冠脉结扎大鼠心肌中SOD 活性和MDA 水平的影响(±s，n=10)

表2 鸡血藤总黄酮对冠脉结扎大鼠心肌中SOD 活性和MDA 水平的影响(±s，n=10)

注:与假手术组比较，＊＊P ＜0.01;与模型组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

组别 剂量/(mg·kg -1)SOD/(U·mg protein -1)MDA/(mmol·mg protein -1)4.83 ±1.72 7.35 ±1.41模型组 — 1.75 ±0.68＊＊ 13.42 ±1.79＊＊单硝酸异山梨酯 10 3.16 ±0.83△△ 10.63 ±2.32△△鸡血藤总黄酮 80 3.34 ±0.87△△ 10.96 ±1.82△△鸡血藤总黄酮 40 2.79 ±0.74△ 11.26 ±1.74△鸡血藤总黄酮假手术组 —20 2.37 ±0.65 12.03 ±1.97

表3 鸡血藤总黄酮对冠脉结扎大鼠血清GOT、CK 和LDH 的影响(±s，n=10)

表3 鸡血藤总黄酮对冠脉结扎大鼠血清GOT、CK 和LDH 的影响(±s，n=10)

注:与假手术组比较，＊＊P ＜0.01;与模型组比较，△P ＜0.05，△△P ＜0.01

组别 剂量/(mg·kg -1) GOT/(U·L -1) CK/(U·L -1) LDH/(U·mL -1)58.75 ±6.87 713.84 ±153.26 434.15 ±108.26模型组 — 438.47 ±97.26＊＊ 3 984.27 ±1 143.55＊＊ 3 548.65 ±1 084.42＊＊单硝酸异山梨酯 10 274.47 ±90.51△△ 2 537.14 ±837.46△△ 1 792.13 ±607.36△△鸡血藤总黄酮 80 254.62 ±73.24△△ 2 215.47 ±613.22△△ 1 759.37 ±528.82△△鸡血藤总黄酮 40 291.47 ±71.83△ 2 791.36 ±988.76△ 2 107.53 ±827.26△鸡血藤总黄酮 20 351.34 ±112.43 3 369.07 ±972.43 2 851.18 ±91假手术组 —4.22

3.4 鸡血藤总黄酮对心肌组织病理学的影响 光学显微镜下可见，假手术组心肌纤维排列整齐，心肌间质未见炎症细胞浸润;模型组心肌纤维肿胀，排列紊乱，心肌间质中出现大量炎症细胞浸润，甚至可见局灶性坏死区;鸡血藤总黄酮40 和80 mg/kg 剂量组心肌组织细胞核大小较均匀，心肌纤维排列较整齐，呈轻度肿胀，偶见炎症细胞浸润;单硝酸异山梨酯组HE 病理表现与鸡血藤总黄酮40 mg/kg剂量组相似，见图1。

4 讨论

冠心病(缺血性心脏病)属于中医“胸痹”范畴，主要病机是气滞、血瘀、寒凝、痰阻导致胸阳不振，心脉痹阻。诱导大鼠急性心肌缺血的方法很多，其中结扎大鼠冠状动脉前降支与冠心病人严重心肌缺血及心肌梗死时的血流动力学和心肌代谢等指标的改变有一定相似之处，而且梗死发生快，缺血范围较固定，模型可靠。鸡血藤是一味传统的活血化瘀中药，而黄酮类是其主要成分之一，目前尚未报道鸡血藤总黄酮对心肌缺血保护作用的相关研究。因此，本实验采用结扎左冠状动脉前降支的方法复制心肌缺血模型，从心肌中SOD 和MDA、血清心肌酶(GOT、CK 和LDH)水平及组织形态等方面来探讨鸡血藤总黄酮对大鼠急性心肌梗死的保护作用及机制。实验结果表明，它能显著抑制结扎冠状动脉前降支致心肌缺血大鼠心电图ST 段抬高、升高心肌SOD 活性、降低MDA 水平和心肌酶活性，而且还可显著减轻心肌组织的病理改变。

图1 鸡血藤总黄酮对心肌病理组织学的影响(HE，×200)

心电图ST 段的改变是心肌缺血最早期出现的、最敏感确切的指标之一，是反映心肌缺血性损伤范围和程度的可靠指标［7］。本实验发现，鸡血藤总黄酮可剂量依赖性地抑制冠脉结扎所致大鼠心电图ST 段的抬高，表明它对冠脉结扎所致大鼠心肌缺血具有一定的保护作用。

大量氧自由基的形成是心肌缺血发生的主要机制之一［8］，而氧自由基和脂质过氧化反应在机体的新陈代谢过程中起着重要作用。在正常情况下，这两者处于协调与动态平衡状态，维持着体内许多生理生化和免疫反应，一旦这种平衡状态被打破，机体就会处于一种氧化应激状态，在心肌缺血损伤的发生和发展过程中起着十分重要的作用。当心肌缺血时，氧自由基大量产生，与细胞膜上的多聚不饱和脂肪酸反应，发生脂质过氧化。同时，由于要清除体内过量的氧自由基，从而导致组织的抗氧化能力下降。脂质过氧化产物MDA 对细胞膜有很强的破坏作用，使膜流动性和通透性发生变化，细胞内外离子分布异常，进而抑制心肌功能，最终导致心肌细胞从可逆性损伤发展为细胞死亡。心肌酶GOT、CK 和LDH 广泛存在于心肌组织，当心肌缺血时，心肌细胞受到损伤，大量心肌酶释放入血，故测定血清中心肌酶活性可反映心肌细胞的损伤程度［9］。SOD 是内源性氧自由基清除剂，而MDA 是脂质过氧化反应的终产物，两者均是反映氧自由基产生及引发脂质过氧化反应程度的指标。测定MDA 水平和SOD 活性能反映出心肌遭氧自由基攻击的程度［10-11］和体内清除氧自由基的能力［12-13］。实验结果表明，鸡血藤总黄酮中、高剂量组可明显抑制冠脉结扎致大鼠心肌组织SOD 活性的降低和MDA水平的升高，显著抑制心肌酶(GOT、CK 和LDH)活性的增加，提示其可能通过提高内源性抗氧化酶SOD 活性，清除氧自由基引起的脂质过氧化反应，减轻对心肌细胞的损伤，从而起到保护心肌损伤的作用。

另外，心脏病理组织学检查结果表明，鸡血藤总黄酮能显著减轻心肌纤维肿胀、炎症细胞浸润以及局灶性坏死的程度。

综上所述，鸡血藤总黄酮对左冠状动脉前降支结扎所致大鼠心肌缺血损伤具有一定保护作用，其机制可能与清除自由基和抗脂质过氧化有关。

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