泰国葛根化学成分研究

泰国葛根化学成分研究

刘喜舞1，叶惠煊2，戴玲3，刘向前2*

(1.武警湖南省总队医院药剂科，长沙 410006；2.湖南中医药大学药学院，长沙 410208；3.长沙博海生物科技有限公司，长沙 410205)

摘要：目的研究泰国葛根的化学成分。方法泰国葛根样品用正己烷提取除杂后，药渣用乙酸乙酯提取，得到的滤液浓缩后，用甲醇提取得到精制乙酸乙酯部位；乙酸乙酯提取后的药渣用甲醇提取，浓缩后再用正丁醇萃取得正丁醇部位；利用正相硅胶、MDS-5等常规柱色谱技术分离得到单体化合物，根据其理化性质及波谱学数据鉴定其化学结构。结果分离得到5个单体化合物，分别被鉴定为Mirificoumestan(1)，十七烷酸(2)，去氧葛雌素(3)，葛根素(4)，大豆苷(5)。结论化合物2是首次从该植物中分离得到。

关键词：葛属；泰国葛根；化学成分

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.06.002

中图分类号：R284文献标志码：A

基金项目：长沙市科技局科技计划重点项目(编号：K1207010-21)

作者简介：刘喜舞，男，副主任药师

收稿日期：(2015-05-11)

Study on chemical constituents ofPuerariamirifica

LIU Xiwu1，YE Huixuan2，DAI Ling3，LIU Xiangqian2*(1.Department of Pharmacy，Hospital of Hu′nan Armed Police Corps，Changsha 410006，China；2.School of Pharmacy，Hu′nan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，China；3.Changsha Broad-Ocean Bio-Science and Technique Limited Company，Changsha 410205，China)

Abstract:ObjectiveTo study the chemical constituents of Pueraria mirifica.MethodsPueraria mirificawas extracted with n-hexane to remove impurity，then the filtrate and residue were extracted with methanol，and the concentrated solutions were extracted with ethyl acetate and n-butyl alcohol，respectively. The compounds were isolated and obtained by column chromatography including silica gel and MDS-5. Their structures were elucidated by means of physiochemical properties and spectral analysis. Results 5 compounds were isolated from Pueraria mirifica. And their structures were elucidated as: mirificoumestan(1)，heptadecanoic acid(2)，deoxymiroestrol (3)，puerarin (4)，and daidzin(5)，respectively. ConclusionCompound 2 was isolated from this plant for the first time.

Key words:PuerariaDC；Puerariamirifica；chemical constituents

*通信作者：刘向前，男，教授，博士研究生导师

泰国葛根Puerariamirifica是豆科葛属植物的块根，该植物是生长于泰国北部的一种神奇的植物，有很强的雌激素样作用，常被用来研究治疗骨质疏松症、更年期综合征的荷尔蒙替代疗法及丰胸[1-2]。其特有成分葛雌素是目前发现的最强植物雌激素，对心血管系统、免疫系统等疾病都有较好的治疗作用[3-5]。为了更全面地研究泰国葛根资源，本课题对其化学成分进行了研究，从中分离得到5个单体化合物，分别鉴定为mirificoumestan(1)，十七烷酸(2)，去氧葛雌素(3)，葛根素(4)，大豆苷(5)。

1仪器与材料

1.1仪器Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；AUW220D分析天平(日本岛津公司)；FW177中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；予华HH-S型水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂)。

1.2材料甲醇、乙酸乙酯、正己烷、氯仿等均为分析纯(天津市恒兴化学试剂制造有限公司)；薄层层析硅胶G、GF254(青岛海洋硅胶干燥剂厂)；CMC-Na(天津科密欧化学试剂开发中心)；柱层析硅胶200～300目(青岛海洋硅胶干燥剂厂)；MDS-5型反相制备色谱固定相200～300目(北京麦迪生新技术开发中心)；葡聚糖凝胶Sephadex LH-20(瑞典Pharmacia公司)。泰国葛根由韩国L&P饲料公司提供，经韩国庆熙大学药学院YOOK CHANGSOO教授鉴定为豆科葛属植物泰国葛根Puerariamirifica的干燥块根。

2提取与分离

取泰国葛根药材，干燥，粉碎过一号筛得到泰国葛根粗粉。取粗粉约350 g，加入4倍量正己烷，用索氏提取器提取8 h，提取2次。药渣用4倍量乙酸乙酯回流提取8 h，提取2次。滤过后合并2次滤液，并将滤液浓缩至适当体积，置于水浴上蒸干，得到乙酸乙酯部位浸膏，再加入约200 mL甲醇，超声充分溶解，滤过，滤液浓缩至浸膏，得到精制后的乙酸乙酯部位浸膏3.8 g。乙酸乙酯提取后剩余的残渣继续用8倍量工业甲醇回流提取3次，滤过后回收溶剂，浓缩至浸膏，用水饱和的正丁醇萃取，得到正丁醇部位8.5 g。

乙酸乙酯精制部位浸膏3.8 g，经硅胶柱色谱以正己烷-乙酸乙酯(1∶3)等度洗脱，得到3个粗馏分Re1(1.0 g)、Re2(0.8 g)、Re3(23 mg)。Re1经反相柱色谱，以体积分数30%～100%甲醇梯度洗脱，经甲醇反复重结晶，得到化合物1(21 mg)和化合物2(23 mg)。Re3用甲醇反复重结晶，得到化合物3(6.4 mg)。正丁醇部位浸膏8.5 g，经硅胶柱色谱以氯仿-甲醇(20∶1→1∶1)梯度洗脱，得到2个粗馏分Rb1(800 mg)和Rb2(153 mg)。Rb1经反相柱色谱，以体积分数70%甲醇等度洗脱，经甲醇反复重结晶，得到化合物4(80 mg)；Rb2经反相柱色谱，以体积分数70%甲醇等度洗脱，经甲醇反复重结晶，得到化合物5(35 mg)。

3结构鉴定

化合物1淡黄色针状结晶，FeCl3显色阳性。由1H-NMR中的δ5.27、δ4.13、δ1.81、δ1.62可知有异戊烯基，δ3.80为典型的甲氧基基团。低场δ：7.86(d，J=8.4 Hz)、6.98(dd，J=8.4，1.8 Hz)、6.90(d，J=1.8 Hz)证明3个氢在B环，COSY谱也印证了这点。1H-NMR(C3D6O，500 MHz)δ：7.86(1H，d，J=8.4 Hz)，6.98(1H，dd，J=8.4，1.8 Hz)，6.90(d，J=1.8 Hz)；13C-NMR(C3D6O，125 MHz)δ：154.2(C-2)，105.6(C-3)，198.1(C-4)，123.4(C-5)，114.1(C-6)，161.1(C-7)，103.3(C-8)，161.8(C-9)，104.3(C-10)，124.5(C-1′)，152.7(C-2′)，97.8(C-3′)，145.4(C-4′)，150.9(C-5′)，115.5(C-6′)，28.6(C-7′)，125.5(C-8′)，130.4(C-9′)，25.7(C-10′)。以上数据与文献[6]比较基本一致，故确定化合物1为mirificoumestan。

化合物2白色片状结晶，10%硫酸乙醇显紫红色。1H-NMR在低场区中有活泼氢质子信号，提示可能有羧基。在高场区的一个亚甲基信号δ2.80(4H，d，J=13.37 Hz)、一个δ0.86(3H，t，J=13.62 Hz)的甲基信号及多个相互重叠的亚甲基信号δ1.28～2.84。13C-NMR有一个甲基信号δ14.31和多个亚甲基信号。多种信息提示该化合物为饱和长链脂肪酸类化合物。与文献[7]比较基本一致，鉴定化合物2可能为十七烷酸。

化合物3白色无定形粉末，FeCl3显色阳性。由δ7.05和δ6.58、δ6.58和δ6.36有相近的耦合常数，并通过COSY谱可知它们相互耦合，结合DEPT谱推断为CH。其余的δ6.23、δ3.32、δ3.66、δ0.55和δ1.23均为单一峰，结合COSY谱确认无任何耦合情况。δ2.74出现多重峰，推测是H-12和H-19耦合的结果，并结合COSY谱验证了这种情况。1H-NMR(C3D6O，400 MHz)δ：7.05(d，J=8.6 Hz，H-1)，6.58(dd，J=8.4，2.4 Hz，H-2)，6.36(d，J=2.5 Hz，H-4)，6.23(s，H-7)，3.32(s，H-9)，2.74(m，H-12)，2.79(m，H-13)，2.56(1H，d，J=18.6 Hz，H-16)，2.83(1H，d，J=18.4 Hz，H-16)，3.66(s，H-18)，1.97(2H，m，H-19)，0.55(s，H-20)，1.23(s，H-21)；13C-NMR(C3D6O，100 MHz)δ131.0(C-1)，111.8(C-2)，157.2(C-3)，103.4(C-4)，153.6(C-5)，138.4(C-7)，117.3(C-8)，40.9(C-9)，113.5(C-10)，38.0(C-11)，45.1(C-12)，45.1(C-13)，79.0(C-14)，210.2(C-15)，54.7(C-16)，77.8(C-17)，79.0(C-18)，40.9(C-19)，32.2(C-21)。以上数据通过与文献[8]比较基本一致，故确定化合物3为去氧葛雌素。

化合物4白色无定形粉末(甲醇)，FeCl3反应呈阳性，提示结构中含有酚羟基。根据1H-NMR(CD3OD，400 MHz)谱中的δ8.17(1H，s)是异黄酮2位质子的特征信号，结合13C-NMR(CD3OD，100 MHz)谱中的δ175.9判断该化合物为异黄酮类物质。1H-NMR中9.08(1H，s)、8.51(1H，s)为酚羟基信号，8.02(d，J=8.8 Hz)，6.94(d，J=8.8 Hz)为A环氢信号，7.46(d，J=8.8 Hz)，6.87(d，J=8.6 Hz)为B环的H-2′，6′和H-3′，H-5′。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：8.17(1H，s，H-2)，8.02(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.46(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.94(1H，d，J=8.8 Hz，H-6)，6.87(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，5.19(1H，d，J=9.7 Hz，Glc-H-1″)，3.55～3.88(6H，m，Glc-H-2″～6″)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：153.0(C-2)，124.3(C-3)，175.9(C-4)，127.7(C-5)，118.6(C-6)，161.8(C-7)，112.9(C-8)，156.4(C-9)，115.9(C-10)，124.3(C-1′)，131.0(C-2′，6′)，116.5(C-3′，5′)，158.2(C-4′)，76.0(C-1″)，73.7(C-2″)，79.7(C-3″)，70.7(C-4″)，82.1(C-5″)，61.7(C-6″)。与文献[9]比较基本一致，故鉴定化合物4为葛根素。

化合物5白色针状结晶(DMSO)，FeCl3反应呈阳性，提示结构中含有酚羟基。根据1H-NMR(DMSO，400 MHz)谱中的δ8.39(1H，s)是异黄酮2位质子的特征信号，结合13C-NMR(DMSO，100 MHz)谱中的δ174.7判断该化合物为异黄酮类物质。1H-NMR中9.56(1H，s)为酚羟基信号，8.04(d，J=8.8 Hz)，7.14(d，J=8.8 Hz)，7.23(d，J=2.2 Hz)为A环氢信号，7.40(d，J=8.6 Hz)，6.81(d，J=8.6 Hz)为B环的H-2′，6′和H-3′，H-5′。1H-NMR(DMSO，400 MHz)δ：8.39(1H，s，H-2)，8.04(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，7.40(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′)，7.23(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，7.14(1H，dd，J=8.8，2.2 Hz，H-6)，6.81(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′)，5.10(1H，d，J=7.2 Hz，Glc-H-1″)，3.40～3.90(6H，m，Glc-H-2″～6″)；13C-NMR(DMSO，100 MHz)δ：153.3(C-2)，123.7(C-3)，174.7(C-4)，126.9(C-5)，115.6(C-6)，161.4(C-7)，103.3(C-8)，157.0(C-9)，118.5(C-10)，122.3(C-1′)，130.1(C-2′，6′)，115.0(C-3′，5′)，157.2(C-4′)，100.0(C-1″)，73.0(C-2″)，77.2(C-3″)，69.6(C-4″)，76.5(C-5″)，60.6(C-6″)。以上数据与文献[10-11]比较基本一致，故鉴定化合物5为大豆苷。

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