电针胃俞募穴对单纯性肥胖大鼠下丘脑和血清神经肽Y的影响

尹　刚，申国明，王　浩，方正清，许冠荪

(1.安徽中医药大学中西医结合临床学院，安徽 合肥　230038；

2.安徽中医药大学护理学院，安徽 合肥　230012)



电针胃俞募穴对单纯性肥胖大鼠下丘脑和血清神经肽Y的影响

尹刚1，申国明1，王浩1，方正清2，许冠荪1

(1.安徽中医药大学中西医结合临床学院，安徽 合肥230038；

2.安徽中医药大学护理学院，安徽 合肥230012)

[摘要]目的观察电针胃俞募穴对单纯性肥胖大鼠脂代谢及神经肽Y(neuropeptide Y，NPY)水平的影响。方法选用清洁级SD雄性大鼠80只，随机选10只为空白组，采取普通饲料喂养，其余大鼠采用高脂饲料饲养。6周后，筛选40只单纯性肥胖大鼠，将其随机分为模型组、中脘组(电针中脘)、胃俞组(电针胃俞)、胃俞募穴组(电针中脘配胃俞)，持续电针3周。计算Lee指数，采用全自动生化分析仪检测血清三酰甘油(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein- cholesterol，LDL-C)水平，采用放射免疫法检测下丘脑和血清NPY含量。结果模型组大鼠Lee指数，血清TG、TC、LDL-C水平，以及下丘脑和血清NPY含量均较空白组显著升高(P<0.01)。两因素析因设计的方差分析结果显示，针刺中脘和针刺胃俞对降低Lee指数，血清TG、TC、LDL-C水平，及下丘脑和血清NPY含量的主效应均具有统计学意义(P<0.01)；针刺中脘和针刺胃俞对降低Lee指数、血清TG及下丘脑和血清NPY的交互作用均具有统计学意义(P<0.05，或P<0.01)。结论单独电针中脘和胃俞均具有显著的减肥降脂作用，其机制与降低下丘脑和血清NPY有关，俞募配穴对减肥及降低血清TG和下丘脑、血清NPY具有显著的协同作用。

[关键词]单纯性肥胖；电针；中脘；胃俞；俞募配穴；神经肽Y

肥胖症是指由多种原因引起的体内热量摄入大于消耗，脂肪组织在体内贮存过多而造成体质量超常的一种病症，是一个复杂的生理和病理学过程，临床上以单纯性肥胖多见[1]。单纯性肥胖是无内分泌代谢性疾病为基础疾病的肥胖，约占肥胖人群的95%。2013年美国医学协会通过了肥胖是一种疾病，并且需要对其多个病理生理方面采取一系列干预以促进肥胖治疗和预防的决议。针灸减肥具有较好的效果，临床应用颇广。俞募配穴法是针灸临床常用的有效配穴方法之一，是以背俞穴与募穴相配治疗本脏本腑有关疾病的配穴法。笔者观察了电针胃俞募穴对单纯性肥胖大鼠脂代谢及对下丘脑和血清神经肽Y(neuropeptide Y，NPY)水平的影响，为临床针灸治疗单纯性肥胖的配穴方法提供实验依据。

1材料

1.1实验动物清洁级SD雄性大鼠80只，体质量180~230 g，6周龄。购自安徽医科大学实验动物中心，生产许可证号为SCXK(皖)2013-002，适应性喂养，自由活动、自由进食、自然照明。

1.2主要试剂及仪器柠檬酸、柠檬酸三钠、NPY放射免疫药盒(批号 2004-7-25)：解放军总医院科技开发中心放射免疫所生产；三酰甘油(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein- cholesterol，LDL-C)试剂盒(批号 20040610)：北京福瑞生物工程公司；华佗牌SDZ-Ⅳ型电子针疗仪、针灸针(规格：0.30 mm×25 mm)：苏州医疗用品厂有限公司；800型离心沉淀器：上海市手术器械厂；UV-754型紫外可见分光光度计：上海第三分析仪器厂；DP70型荧光显微镜/JD801型图像采集分析系统：日本奥林巴斯/南京捷达。

2方法

2.1模型复制及分组实验过程中对动物的各种处置符合《关于善待实验动物的指导性意见》[2]。适应性喂养1周后，随机选10只为空白对照组(空白组)，采取普通饲料喂养；其余大鼠采用高脂饲料单笼饲养，自由进食和饮水。普通饲料配方：由标准粉、麸皮、鱼皮粉等组成。高脂饲料配方：每100 g饲料中含标准粉17.5 g，猪油15.0 g，玉米粉12.0 g，鸡蛋、蔗糖、大豆粉各10.0 g，麸皮7.0 g，花生、奶粉、麻油5.0 g，鱼粉2.5 g、食盐、酵母粉各0.5 g。饲料由江苏省协同医药生物工程责任有限公司提供(苏A饲监字2012-009)。实验开始后，每周固定时间称大鼠体质量、测大鼠体长各1次。6周后，筛选体质量超出正常喂养大鼠20%者为单纯性肥胖大鼠[3]，将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、中脘组(电针中脘)、胃俞组(电针胃俞)、胃俞募穴组(电针中脘配胃俞)。

2.2电针干预空白组和模型组：仅将大鼠捆绑于自制的固定器中，不做其他处理，捆绑时间同电针组。中脘组、胃俞组和胃俞募穴组：每天将大鼠捆绑于自制的固定器中，按照华兴邦《大鼠穴位图谱》和体表的骨性标志，“胃俞”取第13胸椎下旁开5 mm，毫针直刺4～6 mm；“中脘”取脐上约20 mm，采用平补平泻手法。针柄接SDZ-Ⅳ型电子针疗仪，10～100 Hz疏密方波，强度以穴位部肌肉微微颤动为宜，连续刺激20 min，每天1次，持续3周。

2.3观察指标及方法

2.3.2测定血清TC、TG、LDL-C含量最后1次治疗后，各组大鼠禁食24 h，10%水合氯醛(10 mL/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血5 mL，以3 000 r/min离心10 min，分离血清，置于全自动生化分析仪上测定TG、TC、LDL-C含量。

2.3.3放射免疫法检测下丘脑、血清NPY含量取血浆0.5 mL加1 mL酸性无水乙醇(100 mL无水乙醇加冰乙酸1.2 mL)，置于振荡器上振荡1 min，4 ℃、3 500 r/min离心15 min，取上清200 μL测定血清NPY。经心脏以生理盐水灌洗全脑，迅速取出下丘脑组织，以0.2 mol/L醋酸溶液煮沸10 min以灭活酶，然后加入上述醋酸溶液匀浆(20 mg脑组织∶1 mL醋酸溶液)，4 ℃、3 000 r/min离心15 min，取上清液测定下丘脑NPY水平。操作过程严格按照放射免疫试剂盒说明书进行。

3结果

3.1各组大鼠Lee指数比较治疗前模型组Lee指数显著高于空白组(P<0.01)；模型组与其他3组Lee指数比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。对4组(除空白组)治疗前后差值进行两因素析因设计的方差分析，结果显示，针刺中脘、针刺胃俞对治疗前后Lee指数差值的主效应及两者对Lee指数差值的交互作用均具有统计学意义(P<0.01)，提示单独针刺中脘或针刺胃俞均可显著降低Lee指数，且两者具有协同作用。见表1。

表1　各组大鼠Lee指数比较

注：与空白组比较，**P<0.01；

与模型组差值比较，##P<0.01。

3.2各组大鼠血清TG、TC、LDL-C含量比较模型组TG、TC和LDL-C水平均显著高于空白组(P<0.01)。对4组(除空白组)的TG、TC、LDL-C水平进行两因素析因设计的方差分析，结果显示，针刺中脘和针刺胃俞对降低TG、TC、LDL-C的主效应均具有统计学意义(P<0.05，或P<0.01)，其中针刺中脘和针刺胃俞对降低TG的交互作用具有统计学意义(P<0.05)。结果提示，单独针刺中脘或单独针刺胃俞均可以显著降低TG、TC和LDL-C，其中联合针刺中脘和胃俞对降低TG具有协同作用。见表2。

表2　各组大鼠血清TG、TC、LDL-C含量比较

注：与空白组比较，**P<0.01；

与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。

3.3各组大鼠下丘脑和血清NPY含量比较模型组下丘脑和血清NPY水平显著高于空白组(P<0.01)。对4组(除空白组)的下丘脑和血清NPY水平进行两因素析因设计的方差分析，结果显示，针刺中脘和针刺胃俞对降低下丘脑和血清NPY的主效应及两者的交互作用均具有统计学意义(P<0.01)。结果提示，单独针刺中脘和单独针刺胃俞均可显著降低下丘脑和血清NPY水平，且两者具有显著的协同作用。见表3。

表3　各组大鼠下丘脑和血清NPY含量比较±s)

注：与空白组比较，**P<0.01；

与模型组比较，##P<0.01。

4讨论

我国目前肥胖人口达3.25亿人，增幅超过美国、英国和澳大利亚。这个数字在未来20年还可能增加1倍。肥胖的发病与能量代谢有关[4]，单纯性肥胖主要是由于人体摄入的能量超过其消耗，导致脂肪在体内聚集，引起体质量过大、体脂超出正常范围的一种病症，属于中医学的“水肿”“痰证”“虚劳”等范畴[5]。其中脾虚湿盛证者最为常见，在治疗时以健脾利湿、祛浊降脂为主。

针刺作为一种相对安全、简便易行的减肥方法越来越受到医务工作者和患者的重视。临床实践也证明，针刺减肥具有很好的疗效，相比较其他治疗手段具有较大的优势[6-8]。在针刺减肥的选穴中，由于俞穴是五脏六腑之气输注于背部的特定穴位，募穴是脏腑之气汇集之处，滑伯仁《难经本义》说：“阴阳经络，气相交贯，脏腑腹背，气相通应，所以阴病有时而行阳，阳病有时而行阴也。”在生理上俞、募穴是五脏六腑之气转输和汇聚的处所；在病理上俞、募穴是内脏和体表病气出入的部位；在解剖上俞、募穴位置对应于相应的内脏。俞、募二穴一前一后、一阴一阳、刚柔相济、相辅相成[9]，是针灸临床治疗本脏本腑相关疾病的常用配穴法[10]。本实验中，单纯性肥胖大鼠经电针干预后，Lee指数、脂代谢与模型组比较有明显下降，说明电针中脘、胃俞有一定的减肥效果，其中联合针刺中脘和胃俞对上述指标的下降具有协同作用。

下丘脑是机体重要的摄食调节中枢和能量平衡调控中心[11]。NPY是下丘脑分泌的一种含有36个氨基酸的肽类物质，广泛分布于中枢和外围神经系统，在调控摄食的生理行为中起着重要作用[12-13]，是已知的最强有力的促摄食因子。应用NPY抑制剂或NPY基因敲除后的大鼠与正常大鼠相比NPY诱导的摄食效应明显减弱[14-15]。近来研究发现，肥胖的成年人血浆下丘脑NPY水平增高，且与体质量呈正相关，肥胖动物下丘脑NPY mRNA及蛋白的表达也明显增高[16-18]，说明NPY在摄食控制中起着重要作用。在本实验中，单纯性肥胖大鼠下丘脑和血清NPY水平显著高于空白组。电针干预后，对除空白组外其余4组大鼠的下丘脑和血清NPY水平进行两因素析因设计的方差分析，结果提示，单独针刺中脘或胃俞均可显著降低下丘脑和血清NPY水平，且联合针刺中脘和胃俞则表现出显著的协同作用。说明电针胃俞募穴能够降低肥胖大鼠中枢和外周NPY水平，抑制肥胖大鼠亢进的食欲，使脂肪合成减少，达到减肥的目的。另外，从对单纯性肥胖大鼠脂代谢及NPY水平的影响的结果，可以看出电针俞募配穴较电针中脘或胃俞单穴有更好的减肥效应。

针刺减肥的机制是通过刺激某些特定穴位，来调节内脏神经系统，达到对糖脂代谢双向调节的作用。一方面抑制食欲，减少进食量，另一方面促进能量代谢，增加能量消耗，促进脂肪分解，最终达到减肥的效果。本研究采用电针俞募配穴的方法应用于治疗单纯性肥胖，取得满意的效果。因此，积极开展俞募配穴协同效应的研究，寻找俞募配穴的中枢机制，以此来指导临床，将更有利于针灸临床的发展。

参考文献：

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Effect of Electroacupuncture at Gastric Back-Shu and Front-Mu Points on Neuropeptide Y in Hypothalamus and Serum in Rats with Simple Obesity

YINGang1,SHENGuo-ming1,WANGHao1,FANGZheng-qing2,XUGuan-sun1

(1.ClinicalSchoolofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230038,China; 2.SchoolofNursing,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of electroacupuncture at gastric Back-Shu and Front-Mu points on the lipid metabolism and neuropeptide Y (NPY) level in rats with simple obesity.MethodsEighty clean male Sprague-Dawley rats were selected in the study. Ten rats were selected from the 80 rats as blank group to be fed a normal diet, and other rats were fed a high-fat diet. Six weeks later, 40 rats with simple obesity were screened out and randomly divided into model group, Zhongwan group (electroacupuncture at Zhongwan), Weishu group (electroacupuncture at Weishu), and gastric Back-Shu and Front-Mu points group (electroacupuncture at Zhongwan and Weishu points); electroacupuncture was performed for 3 weeks. Lee index was calculated; serum levels of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), and low-density lipoprotein-cholesterol (LDL-C) were measured by an automatic biochemical analyzer; the content of NPY in the hypothalamus and serum was determined by radioimmunoassay. ResultsThe model group had significantly increased Lee index, serum levels of TG, TC, and LDL-C, and content of NPY in the hypothalamus and serum (P<0.01). The results of two-way factorial design ANOVA showed that electroacupuncture at Zhongwan and electroacupuncture at Weishu showed significant main effects in reducing Lee index, serum levels of TG, TC, and LDL-C, and the content of NPY in the hypothalamus and serum (P<0.01); electroacupuncture at Zhongwan and electroacupuncture at Weishu had significant interaction in reducing Lee index, serum TG level, and the content of NPY in the hypothalamus and serum (P<0.05 or P <0.01).ConclusionElectroacupuncture at Zhongwan and electroacupuncture at Weishu have significant slimming and antihyperlipidemic effects, which is related to decreased NPY levels in the hypothalamus and serum. Acupuncture using a combination of Back-Shu and Front-Mu points shows a synergistic effect in reducing the body weight, serum TG level, and the content of NPY in the hypothalamus and serum.

[Key words]simple obesity; electroacupuncture; Zhongwan; Weishu; acupuncture using a combination of Back-Shu and Front-Mu points; neuropeptide Y

收稿日期：(2015-01-29；编辑：曹健)

作者简介：尹刚(1981-)，男，硕士，讲师

[中图分类号]R589[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.02.016

基金项目：国家自然科学基金项目(81072871)；安徽中医药大学自然科学基金项目(2012qn008)