临床药师参与拉莫三嗪及奥卡西平代谢物血药浓度监测及个体化给药分析

赵兴辉，陈俊珺，沈艳琳，黄可航，马灼堂，黄晓会（.徐州市儿童医院，江苏 徐州 006；.上海交通大学附属新华

医院，上海 200092）

临床药师参与拉莫三嗪及奥卡西平代谢物血药浓度监测及个体化给药分析

赵兴辉1，陈俊珺2，沈艳琳2，黄可航2，马灼堂2，黄晓会2（1.徐州市儿童医院，江苏 徐州 221006；2.上海交通大学附属新华

医院，上海 200092）

目的：建立快速有效的同时测定拉莫三嗪及奥卡西平血药浓度方法，通过开展拉莫三嗪与奥卡西平血药浓度监测，以达到患者个体化给药。方法：采用HPLC法，色谱柱为Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分离；流动相：甲醇-水（45 ： 55）；流速：1 mL·min-1；检测波长：225 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 μL；二极管阵列检测，外标法定量。结果：拉莫三嗪低、中、高3个浓度（0.80、8.00、40.00 mg·L-1）方法回收率分别为95.7%、100.9%、99.6%，10-羟基卡马西平低、中、高3个浓度（1.12、14.00、56.00 mg·L-1）方法回收率分别为97.1%、101.5%、100.3%，日内精密度RSD小于3%，日间精密度RSD小于5%。结论：HPLC法操作简单，精密度高，分离度好，适用于拉莫三嗪与奥卡西平的血药浓度监测，可为患者个体化给药方案作出指导。

奥卡西平；拉莫三嗪；个体化给药；治疗药物监测；高效液相色谱法

拉莫三嗪、奥卡西平是近几年临床上常用的抗癫痫新药。奥卡西平通过胃肠道快速吸收并迅速降解为有药理活性的代谢产物10-羟基卡马西平而发挥作用。有多项研究表明，奥卡西平原型仅占血清中总放射活性的2%，因此临床上对奥卡西平治疗浓度值的评价是通过对10-羟基卡马西平浓度的检测来体现的。拉莫三嗪作为单药治疗或辅助治疗多种类型癫痫，特别是对于婴幼儿、青少年和老年患者，疗效显著，不良反应轻微［1］，耐受性优越，对儿童认知功能、睡眠、行为等方面没有显著的影响。因此，欧洲专家共识［2］、中国癫痫诊疗指南［3］均推荐其为治疗顽固性部分性癫痫发作、成人或儿童原发性全身性癫痫、儿童和青少年失神发作、青少年肌阵挛性癫痫等首选药物。两种药物的药动学个体间差异大、治疗窗窄，而药动学特征与抗癫痫效果具有相关性。已有报道［4-6］通过血药浓度监测制定个体化给药方案的案例，本研究通过临床药师参与监测拉莫三嗪与奥卡西平在体内的药动学特征，已期提高药物疗效，降低药品不良反应，达到合理的个体化用药目的。

1　材料与方法

1.1仪器、药品及试剂

1260高效液相色谱仪，包括G1367E自动进样器、G1311B四元泵、G4212B二极管阵列检测器（美国Agilent公司）；Milli-Q纯水器（Millipore公司）；VORTEX KB3型旋涡混悬器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；5424R高速冷冻离心机（Eppendorf公司）。拉莫三嗪对照品（Sigma公司，纯度≥98%，批号025K1484）；10-羟基卡马西平对照品（中国药品生物制品检定所，纯度≥98%，批号100143-199708）；甲醇、乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）。

1.2溶液配制

精密称取拉莫三嗪对照品和10-羟基卡马西平对照品各20 mg，用水定容至5 mL的容量瓶中，配成质量浓度为4000 mg·L-1的对照品工作液。

1.3实验方法

1.3.1色谱条件 分析柱：Hypersil BDS C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长：225 nm；流动相：甲醇-水（45∶55）；流速：1 mL·min-1；进样量：10 μL；柱温：25 ℃。

1.3.2样品预处理 取血清180 μL于1.5 mL离心管中，加入甲醇420 μL，涡旋混匀1 min，13 000 r·min-1离心10 min，取上清液10 μL进样。

2　结果

2.1色谱图

在“1.3.1”项下色谱条件，拉莫三嗪与10-羟基卡马西平分离完全，血中内源性物质对测定结果无干扰，见图1。

2.2标准曲线的制作

取血清180 μL，添加不同浓度的标准品溶液，配制成终浓度为拉莫三嗪0.80、1.60、4.00、8.00、20.00、40.00 μg·mL-1的标准溶液，10-羟基卡马西平1.12、2.80、5.60、14.00、28.00、56.00 μg·mL-1的标准溶液，进样。结果显示：拉莫三嗪在0.80 ～40.00 μg·mL-1，10-羟基卡马西平在1.12 ～ 56.00 μg·mL-1呈良好的线性关系。拉莫三嗪的线性方程为：Y = 13.466 X - 4.477 8，r = 0.999 2；10-羟基卡马西平的线性方程为：Y = 6.65 X - 0.565 5，r = 0.999 7。

图1　HPLC色谱图A - 样品血清， B -空白血清， C - 标准品；1 - 拉莫三嗪，2 - 10-羟基卡马西平Fig 1　HPLC chromatogramsA - samples in serum， B - blank serum， C - standard substance； 1 -lamotrigine， 2 - 10-hydroxy carbamazepine

2.3准确度与精密度

分别测定拉莫三嗪0.80、8.00、40.00 μg·mL-1；10-羟基卡马西平1.12、14.00、56.00 μg·mL-1；各添加3个浓度水平的血清标本，5个平行样本按照“1.3”项下方法处理进样，计算平均加样回收率及日内精密度（RSD）；每个样本重复进6针，计算RSD；样本连续测定5 d，计算日间精密度。结果显示，本方法测定血清拉莫三嗪与10-羟基卡马西平的准确度均符合血药浓度检测条件；日内精密度均＜ 3%，日间精密度＜ 5%，详见表1。

表1　血清中拉莫三嗪与10-羟基卡马西平的准确度、精密度. n = 5Tab 1　The recoveries and precision of lamotrigine and 10-hydroxy carbamazepine. n = 5

2.4稳定性实验

取低、中、高浓度各3个平行样品，处理后将上清液在室温分别放置4、24、48 h后重复测定，计算变异系数（CV%）；将配置好的血清质控标本置于- 4 ℃冰箱分装保存，每隔1周复测1次，3个水平分别测3组平行样品，计算CV%。结果显示，拉莫三嗪和10-羟基卡马西平的血清标本在上述情况下稳定性良好，测定值CV%均＜ 10%。

2.5临床应用

采用HPLC法为本院数例服用拉莫三嗪和奥卡西平的癫痫患儿进行血药浓度监测，共计150例。拉莫三嗪的治疗浓度范围为3 ～ 15 μg·mL-1，奥卡西平单羟基代谢产物治疗浓度范围为12 ～ 36 μg·mL-1。其中服用拉莫三嗪患者57例，血药浓度在治疗范围内的为49例；低于治疗范围的5例，超出治疗范围的3例（未出现中毒反应）。服用奥卡西平患者91例，其中血药浓度在治疗范围内的85例，超出治疗范围能够控制病情的6例（未出现中毒反应）。两药联用的患者有2例。根据检测结果，询问患儿病史，记录服用当前剂量后是否有癫痫发作，结合患儿实际情况，对28例服用拉莫三嗪，71例服用奥卡西平的患者用药剂量做了适当调整。血药浓度监测结果表明抗癫痫药物在不同患者中具有较大的个体差异，对其进行血药浓度监测非常重要。

3　讨论

本研究过程中，为了兼顾拉莫三嗪与10-羟基卡马西平的检测灵敏度，选择225 nm作为检测波长，避免了内源性物质的干扰。有文献报道，血浆前处理采用固相萃取技术，费用高且操作繁琐。本方法采用有机溶剂蛋白沉淀，操作简单，耗时短，成本低，准确度高。采用甲醇和水作为流动相，可延长仪器及色谱柱使用寿命，降低成本。

本研究建立了HPLC法快速同时检测拉莫三嗪与奥卡西平有效代谢物血药浓度方法，使用该法监测本院门诊及住院癫痫患儿的血药浓度，并根据以上原则对其进行药物调整，使患儿病情得以控制。在药物治疗过程中，影响因素众多，由于存在个体差异，临床上有时难以依据剂量预测机体反应。因此，认识药物体内过程的规律性，掌握治疗药物监测的原理和适应范围，确定个体化用药的最适方案，才能真正确保临床用药的安全性和有效性。

［1］ 梅昕，童波，郭玲玲，等.拉莫三嗪与丙戊酸钠先后致皮疹、红细胞巨幼化及高敏综合征［J］.中国药物应用与监测，2014，11（2）：125-127.

［2］ Wheless JW， Clarke DF， Arzimanoglou A， et al. Treatment of pediatric epilepsy： European expert opinion， 2007［J］. Epileptic Disord， 2007， 9（4）： 353-412.

［3］ 李世绰，吴立文.癫痫病分册［M］/中华医学会.临床诊疗指南.北京：人民卫生出版社，2007：100-168.

［4］ 黄春燕，郭代红，朱曼.154例患者664次万古霉素血药浓度监测分析［J］.中国药物应用与监测，2014，11（2）：68-71.

［5］ 温爱萍，李哲，李任，等.HPLC法测定人血浆中游离亚胺培南浓度［J］.中国药物应用与监测，2015，12（3）：151-154.

［6］ 黄晓会，刘艳，张健.HPLC法测定人血清中万古霉素及去甲万古霉素浓度及临床应用［J］.中国药物应用与监测，2014，11（2）：92-94.

Study on the role of clinical pharmacists for determination of the concentration of lamotrigine and oxcarbazepine metabolite in serum and individual administration

ZHAO Xing-hui1， CHEN Jun-jun2， SHEN Yan-lin2， HUANG Ke-hang2， MA Zhuo-tang2，HUANG Xiao-hui2
（1. Department of Pharmacy， Xuzhou Children's Hospital， Xuzhou221006， China； 2. Department of Pharmacy， Xinhua Hospital， Shanghai Jiao Tong University School of Medicine， Shanghai200092， China）

Objective： To establish the high performance liquid chromatography （HPLC） method for simultaneous determination the concentration of lamotrigine and oxcarbazepine metabolite in serum， in order to provide individualized drug administration by monitoring drug concentration. Methods： Lamotrigine and oxcarbazepine metabolite were used as internal standard for each other. The chromatographic column was Hypersil BDS C18column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm）. The mobile phase was consisted of methanol-water （45 ： 55）. The flow rate was 1 mL·min-1. The detecting wavelength was 225 nm using diode array detector. The column temperature was 25 ℃. The injection volume was 10 μL. Results： As for lamotrigine， the average method recovery rates of three concentrations （0.80， 8.00， 40.00 mg·L-1） were 95.7%， 100.9% and 99.6%， respectively. As for oxcarbazepine metabolite， the average method recovery rates of three concentrations （1.12， 14.00， 56.00 mg·L-1） were 97.1%， 101.5% and 100.3%，respectively. The intra-day relative standard deviation （RSD） was less than 3%， and inter-day RSD was less than 5%. Conclusion：The HPLC method was proved to be simple and precise with a good resolution， which was suitable for the therapeutic drug monitoring （TDM） and pharmacokinetic study of lamotrigine and oxcarbazepine metabolite.

Oxcarbazepine； Lamotrigine； Individual administration； Therapeutic drug monitoring （TDM）； High performance liquid chromatography （HPLC）

R917

A

1672 - 8157（2016）05 - 0274 - 03

上海市高校青年教师培养资助基金项目（ZZjdyx13091）

黄晓会，女，药师，主要从事临床药理学研究。E-mail：huangdi456@126.com

赵兴辉，男，主管药师，主要从事临床药学工作。E-mail：xuexue831005@sina.com

（2016-03-14

2016-06-10）