血液分析仪散点图在分析嗜碱性粒细胞假性升高中的应用*

姚丽娟 罗以勤 王力 孙余会 黄凤萍 李丽

·论著·

血液分析仪散点图在分析嗜碱性粒细胞假性升高中的应用*

姚丽娟 罗以勤 王力 孙余会 黄凤萍 李丽

目地 分析白细胞分类通道（DIFF）和嗜碱性粒细胞通道（WBC/BASO）散点图的典型变化，判断嗜碱性粒细胞（Baso）假性升高，探讨其临床应用价值。方法 收集46例住院患者经手工涂片复检确认的Baso假性升高样本的白细胞分类数据信息和散点图，分析导致假性升高的原因及归纳典型散点图变化。结果 Baso假性升高干扰主要来源于异型淋巴细胞（Abn-L）、中性中毒颗粒（TG）和采血不当3种原因，以Abn-L干扰较常见（56.5%）。Baso假性升高具有典型Abn-L或TG的DIFF和WBC/BASO散点图者，经外周血涂片镜检均可检出异淋或TG，白细胞分类计数（DC）发现异常增高的部分均来源于Abn-L或TG；当具有正常DIFF图，异常WBC/BASO典型采血不当散点图时，外周血涂片镜检分类均正常，临床重新规范抽取样本送检后结果均正常。结论 对于外周血Baso计数存在假性升高的样本，实验室可通过仪器提供的典型散点图快速判断升高来源并指导复检，为临床提供准确可靠的实验数据。

嗜碱性粒细胞 散点图 嗜碱性粒细胞计数

嗜碱性粒细胞（Baso）是一类主要与过敏、炎症和蠕虫等寄生虫病相关的低丰度血液细胞群[1]。由于与肥大细胞有相似的表型，这一细胞谱群曾一度被临床和实验室忽略，迄今为止仍对Baso的作用知之甚少。近年来，Baso在过敏反应和免疫调节等方面作用[2，3]的发现，使研究者们逐渐对其关注。研究发现Baso计数不仅可作为有效评估系统性红斑狼疮活动性的生物指标[4]，在预测甲硫咪唑[5]诱导的粒细胞缺乏症患者的恢复实验中，Baso计数水平降低可能预示预后不良，因此，随着研究深入，Baso计数对临床疾病的评估和预后将会得到广泛的应用前景。然而在实际工作中，国内各级医院虽已普及全自动血细胞分析仪，精密度和准确度已大大提高，但在临床实际检测中仍发现有较多的不明确的干扰现象会导致假性结果的发生，尤其是Baso假性升高的现象更常见，因此，本研究重点对Baso假性升高的外周血EDTA-K2抗凝样本进行分析，探讨嗜碱性粒细胞假性升高的原因及相关散点图变化规律。

材料与方法

1 材料 收集本院住院患者2016年1月～2017年3月EDTA-K2抗凝血常规样本46例，样本满足条件为：首检时嗜碱性粒细胞百分比＞1%，绝对值＞0.06×109/L，经过涂片复查均为正常值（即嗜碱性粒细胞百分比0～1%，绝对值0～0.06×109/L）的假阳性者。

2 仪器与试剂 仪器为Sysmex XE-5000全自动血液分析仪，自动推片机SP-1000i购自日本希森美康医用有限公司；双目显微镜购自日本Olympus公司；EDTA-K2（乙二胺四乙酸二钾）真空抗凝管购自上海科华生物技术有限公司，试剂、质控品为全自动血液分析仪全套原厂配套相关试剂，瑞特-姬姆萨复合染液购自珠海贝索生物技术有限公司。

3 检测方法 样本采集：均由病房医生采集患者静脉EDTA-K2抗凝血2 ml，室温保存由专人送至检验科；样本检测：采用仪器法，严格按照仪器操作规程、检验科血常规检测SOP文件和临床检验操作规程的相关规定，确保仪器处于最佳工作状态，并每日使用3水平（高值、中值、低值）质控品监控仪器日常运行，所有样本均为2 h内检测完毕。涂片镜检复查：当Baso%＞1%，Baso绝对值＞0.06×109/L时将样本进行推片机退片、染色，选取2名有经验的检验人员在油镜下浏览全片后，对体、尾交界区域进行白细胞分类计数，所有操作均遵循《全国临床检验操作规程》规范操作。

结 果

1 血液分析仪散点图 血细胞分析仪白细胞分类模式DIFF和WBC/BASO散点图和正常样本散点图见图1，其DIFF通道可将白细胞分为4个细胞群（LMNE），典型细胞散点图的各细胞的区域分界清晰，表示仪器对细胞的典型特征如细胞大小、细胞内容物分辨良好。

2 BASO假性升高类型 在本研究的46例Baso假性升高样本中发现主要有3种典型干扰Baso计数类型（见表1），其中异型淋巴细胞（Abn-L）、中性粒细胞毒性颗粒（TG）所致的Baso计数的干扰经外周血涂片镜检复查后均检出Abn-L和TG，且经过分类计数发现Baso计数均正常，增高的部分均分别来源于Abn-L和TG。还有6例样本经过血涂片复检确认WBC/BASO分类正常的不明原因Baso假性升高者，通过与临床联系重新规范抽取样本后进一步检测，结果均为正常，在本研究中将此6例样本归类为采血不当干扰检测组。此外，还有1例涂片检测见肿瘤样细胞，因仪器提供的信息表征不够典型，不予归类。

3 引起Baso假性升高典型散点图 由Abn-L、TG采血不当引发Baso假性增高的细胞散点图均有较典型的特征。如图2A所示，Abn-L干扰时DIFF图中A区与B区分界不清，出现D区，A区一直延伸至D区的上方，随着Abn-L增多D区散点密度明显增大，血液涂片染色可见Abn-L。TG包括退行性变化干扰时（图2B），C区明显增宽可能会出现E区并与之分界不清，各部分区域均交叉重叠明显，E区在C上方局限分布，向上延伸不明显，这2种在WBC/BASO散点图并不易区分，均显示Baso散点密度增大。而在6例采血不当的样本检测时未见明显异常的DIFF图，但WBC/BASO图中可见G区可延伸至H区且呈散在分布。

图1 白细胞分类散点图

表1 引起Baso假性升高检测的主要干扰类型（n=45）

讨 论

外周血Baso计数有3种方法[6]，即手工涂片法、仪器法和流式细胞仪法。手工涂片法尽管存在方法学的局限性，但至今仍是无可取代的金标准。流式细胞仪法是利用单克隆抗体检测而具有高精密度和无可比拟的统计优越性而与手工涂片法相媲美，但其不够经济，不适用于普查。仪器法能同时计数多种细胞，具有高精密的和高通量的特征，可符合大部分血细胞检测要求，适合临床检测需要，但对Baso的分类和计数却不够稳定，Amundsen[7]等用3类不同原理的血液分析仪与流式细胞仪（FCM）相关性比较时，发现3类血液分析仪Baso计数均达不到满意水平。本研究旨在对已通过手工涂片复查确认的假性Baso计数升高的样本进行散点图分析，探讨其规律能否有效减低Baso假性计数的漏检和提高检验者复检效率，为提升检验数据的质量提供参考。

XE-5000已采用专用BASO计数通道，用溶血素溶解红细胞、血小板，将Baso以外的白细胞处理成裸核后利用体积的差异区分细胞群，联合DIFF通道的聚次甲基荧光染料结合细胞内核酸作用已大大提高Baso计数的准确性，但仍存在各种干扰现象。本研究发现Baso假性升高主要是由Abn-L、TG和采血不当引起，Abn-L干扰为主要干扰类型（56.5%）。Abn-L干扰的DIFF图较典型，在常规检验中较易识别，与多数人的研究较一致[8]，DIFF图均表现为典型的Abn-L细胞增多，时常与淋巴细胞的延伸处相连而不能分割，WBC/ BASO图中H区增大且与G区分界不清，淋巴细胞受到病毒的刺激导致细胞大小，形态及染色质等改变使其在散射光、荧光强度均有所增加，少量异常细胞用仪器法难以分辨以致误统计入Baso细胞群，血细胞涂片复检时发现，20例样本中只有2例异型淋巴细胞＞14%，其余的均＜14%，白细胞分类发现Baso假性升高的细胞均为Abn-L。仪器同时有Abn Ly/L_B1?和Baso+报警提示的有13例，7例仅有Abn Ly/L_B1?报警提示，说明仪器法对异常淋巴细胞的分辨率较高，在实际工作中，可参考典型仪器散点图，即可考虑Baso的升高属于假性升高。TG增多的散点图多伴有核左移现象且多出现幼稚细胞区，本研究不讨论典型血液病样本幼稚细胞过多时带来的各类细胞计数干扰现象，有研究表明[9]当IG%≤0.6时可认为是正常标本不需复检，本次TG增多样本IG%均≤0.6，认为TG增多由感染引起，且感染的程度不同，DIFF图的表现有差异，典型的图中C区离散度增大，同时经常伴有局限不延展E区出现，且C区与ABC区分界不清甚至局部融合，涂片镜检常可见TG，但分类后发现Baso假性升高的部分均来源于TG，一方面说明仪器法无法准确对TG进行分辨，另一方面提示在此情况下，可粗略浏览全片，检出TG而未见其他异常时可直接认为Baso升高属于假性升高。在本次观察中值得注意的是6例因标本采集不当导致Baso假性升高，DIFF图没有明显异常，但WBC/ BASO图中G区虽不与H区融合，但G区散点图一直散在延伸到H区的周围，H区离散度明显增大，仪器有4例提示血小板异常，但血涂片均无明显的血小板聚集现象，血细胞分类正常，重复几次均得到相同的结果，在不含特殊的WBC/BASO通道的Sysmex-800i仪器中检测时，Baso%可升高到6%～10%，与临床联系后重新采集样本均恢复正常，因此，在临床工作中如遇到DIFF图无明显变化，而WBC/BASO图有G区的散在延伸，Baso%轻度升高的现象可考虑样本可能受到药物的影响使血液抗凝效果不佳或采集样本不畅，未能将样本及时充分混匀，均需重新规范采集样本检测才能保证检验结果的准确性。

在实际工作中，各种干扰因素的影响如环境的温度、湿度，电流、试剂的稳定性，以及异常细胞的出现使仪器无法正确辨别，常导致低丰度细胞群的假性分类升高。如何保证Baso计数的准确性，使其真正能在临床应用，关键在于我们对每个数据细节上的把握，熟练掌握仪器的性能，真正的利用好仪器的各项提示信息，特别是总结和归纳散点图的规律和意义，结合专业知识和临床检测经验及时发现异常，快速针对性对可疑结果复查，才能在临床门、急诊大量样本需求下提供准确的化验结果。

图2 三种干扰因素典型散点图

1 Siracusa MC，Kim BS，Spergel JM，et al.Basophils and allergic inflammation[J].J Allergy Clin Immunol，2013，132（4）：789-801.

2 Lachmann G，von Haefen C，Wollersheim T，et al.Severe perioperative hyperglycemia attenuates postoperative monocytic function，basophil count and T cell activation[J].Minerva Anestesiol，2017，doi:10.23736/S0375-9393.17.11638-x.

3 MacGlashan D Jr.Expression profiling of human basophils：modulation by cytokines and secretagogues[J].PLoS One，2015，10（5）：e0126435.

4 Liang P，Tang Y，Fu S，et al.Basophil count，a marker for disease activity in systemic lupus erythematosus[J].Clin Rheumatol，2015，34（5）：891-896.

5 Onose H，Uchida T，Sato J，et al.Monocyte and Basophil Counts as Predictors of Neutrophil Count Recovery in Patients with Thiamazole-Induced Agranulocytosis[J].Exp Clin Endocrinol Diabetes，2017，125（1）：49-52.

6 Borzova E1，Dahinden CA.The absolute basophil count[J].Methods Mol Biol，2014，1192：87-100.

7 Amundsen EK，Henriksson CE，Holthe MR，et al.Is the blood basophil count sufficiently precise，accurate，and specific?：three automated hematology instruments and flow cytometry compared[J].Am J Clin Pathol，2012，137（1）：86-92.

8 王晓鸥，陈晓剑，舒旷怡，等.Sysmex XE2100血液分析仪散点图对检测异型淋巴细胞的价值[J].检验医学，2012，27（5）：379-381.

9 刘英杰，葛凤华，张丽艳.Sysmex XE-5000血液分析仪对幼稚粒细胞结果评价分析[J].临床医药实践，2014，23（7）：519-520.

Application of Scatter Diagram of Hematology Analyzer to Survey of False Increase of Basophil Count

Yao Lijuan，Luo Yi-qin，Wang Li，et al.
Department of Laboratory Medicine，the Affiliated Provincial Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230001

Objective To analyze the change of the scatter plots of white blood cell and basophilic granulocyte count channels （WBC/BASO）and explore the resean for false elevation of basophils count. Methods The data of scatter diagram of false elevation in Baso counts were collected that had been verified by manual counting in blood smears of 46 impatients. Results Three factors contributed to the false increase of Baso count，including abnomal lymphocyte（Abn-L），neutrophil toxic granules （TG）and improper blood collection. Among them，Abn-L interference dominates（56.5%）. All of the samples of false elevated Baso counts with typical differential luekocye counts and Abn-L or TG WBC/Baso scatter diagram presented abnormal lymphocyte count or TG by manual counting in periphera blood smears. Differential leukocyte counting （DC）showed that the abnormal increase was originated from Abn-L or TG. Conclusion The samples with false increase of Baso count should be comfirmed by instrumental typical scatter diagram to provide orientation of repeated detection and correct data for clinical use.

Basophil Scatter diagram Basophil count

R331.1+4

A

1671-2587（2017）04-0368-04

2017-02-19）

（本文编辑：王敏）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.04.017

*本课题受安徽省自然科学基金赞助项目（No.1608085-MH229）资助

230001 合肥，安徽省立医院检验科

姚丽娟（1978–），女，安徽庐江人，主管检验师，硕士，主要从事临床检验、分子生物学诊断，（E-mail）chinavip166@163.com。