天癸方对多囊卵巢综合征大鼠性激素及胰岛素抵抗的影响

邓 晶，王 敏，罗 菁，应伊丽

（武汉市第一医院，武汉 430022）

多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome，PCOS）约有50%～60%PCOS患者伴有胰岛素抵抗[1]。研究[2]指出，高胰岛素血症、胰岛素抵抗会加重PCOS各种病理生理改变，诱导PCOS各种远期并发症。祖国医学将PCOS归属于“月经后期”“不孕”等范畴，认为此病病机为脾肾两虚、痰瘀互结。本研究就通过采用天癸方治疗胰岛素抵抗的PCOS大鼠模型，为中医药治疗胰岛素抵抗PCOS提供循证医学依据。

1 实验材料与方法

1.1 动物及饲料 选择健康雌性大鼠50只，分成5组，每组均为10只，均为雌性，体质量40～80 g，均由上海市实验中心提供，采用单笼饲养笼系统饲养。饲料均购自上海同济大学实验动物中心。高脂饲料参考文献[3]自行配置。硫酸普拉睾酮钠溶液按照100 mg硫酸普拉睾酮钠和10 mL注射用水配置而成；二甲双胍按每日0.38 g/kg混悬液配制而成。

1.2 建模方法 参考文献[4]建立胰岛素抵抗PCOS模型，采用21 d断乳的未成年雌性大鼠予颗粒喂养，自由饮水，适应性喂养2 d。2 d后正常对照组进行颗粒喂养，自由饮水，余4组均高脂饲料连续喂养80 d。从第60天开始按照大鼠每日体质量给予皮下注射硫酸普拉睾酮钠溶液，剂量为9 mg/d进行，连续20 d，第20天抽取静脉血，检测T、LH、FSH、FINS、FBG、E2含量水平，计算出ISI，对不符合胰岛素抵抗型PCOS大鼠模型者剔除，正常对照组则每日皮下注射0.4%注射用水，连续20 d。

1.3 分组及给药方法 天癸方由苍术、胆南星、紫河车、丹参、益母草、茯苓、香附、半夏、淫羊藿、熟地黄、石斛、山药、麦冬、巴戟天、葛根组成，比例为15:20:15:20:10:10:10:15:20:15:10:10:10:10:30。以每日6 mL/kg给药，均灌胃处理。建模成功后分为正常对照组、模型组、中药治疗组、西药治疗组、中西医结合治疗组。分别予蒸馏水0.4 mL灌胃、蒸馏水0.4 mL灌胃、中药天癸方3 mL灌胃、二甲双胍0.38 g/(kg·d)灌胃、中药天癸方3 mL+二甲双胍0.38 g/(kg·d)灌胃， 每日上午9: 00开始用药，连续给药 20 d 后处死。

1.4 观察指标 连续治疗20 d后，阴道涂片提示为大鼠失去动情期，末次给药，禁食1 d后用2%戊巴比妥钠0.3 mL腹腔麻醉，成功后腹主动脉取血3 mL，以3 000 r/min离心5 min后分离血清，在-80℃下备用。采用化学免疫发光法检测T、LH、FSH、E2。取大鼠卵巢，用10%多聚甲醛液固定后常规打蜡包埋1 d后取切片，用免疫组织化学分析法检测血清IGF-1水平。采用葡萄糖氧化酶法检测FBG，采用放射免疫法检测FINS。ISI和HOMA-IR计算方法参考文献[5]进行。ISI计算方法为1/FINS×FBG，HOMA-IR计算方法为FBG×FINS/22.5，评估胰岛素敏感性和胰岛素抵抗情况。

1.5 统计学处理 应用SPSS 15.0统计软件进行统计学处理。计量资料结果采用均数±标准差（）表示，两组样本对应数据采用独立样本t检验，计量资料采用χ2检验，多组间比较采用F检测，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 实验结果

2.1 各组在血清学相关指标比较 模型组在血清T、LH、LH/FSH、IGF-1、E2上较正常对照组显著升高，FSH显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05），说明造模成功。与模型组比较，中药组、西药组、中西医结合治疗组在T、LH、LH/FSH、IGF-1、E2上较模型组显著下降，FSH则显著升高，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），而中西医结合治疗组较中药组、西药组在以上指标上改善更加显著，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 各组在血糖和胰岛素抵抗指标比较 正常对照组在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平上显著低于其他4组（除模型组ISI水平最低外）（P＜0.05），模型组在FBG、FINS、HOMA-IR水平上最高，ISI水平最低，与其他组别比较差异有统计学意义（P＜0.05），中药组和西药组在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平差异无统计学意义（P＞0.05），而中西医结合治疗组在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平上改善最显著，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 各组在血清学相关指标比较 （ ，n = 10）

表1 各组在血清学相关指标比较 （ ，n = 10）

注：与对照组比较，# P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05

组 别 T/（ng/mL） FSH/（miu/mL） LH/（miu/mL） LH/FSH IGF-1 E2（ng/L）正常对照组 4.62±0.56 2.51±0.22 3.51±0.64 1.79±0.14 8.45±1.24 573.12±112.34模型组 17.84±2.45# 1.72±0.14# 5.79±1.05# 3.94±0.92# 28.94±4.11# 1213.45±167.34#中药组 9.33±1.13#△ 2.11±0.17#△ 4.51±0.72#△ 2.31±0.79#△ 17.11±3.24#△ 899.46±134.33#△西药组 9.31±1.02#△ 2.02±0.12#△ 4.78±0.76#△ 2.61±0.72#△ 12.45±2.89#△ 875.67±126.75#△中西医结合治疗组 6.32±0.74#△ 2.49±0.19#△ 4.05±0.59#△ 1.63±0.45#△ 10.12±1.86#△ 689.45±119.46#△

表2 各组在血糖和胰岛素抵抗指标比较 （ ，n = 10）

表2 各组在血糖和胰岛素抵抗指标比较 （ ，n = 10）

注：与对照组比较，# P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05

组 别 FBG/（mmol/L） FINS/（μg/L） ISI HOMA-IR正常对照组 3.14±0.48 12.56±0.25 0.26±0.31 1.78±0.25模型组 5.78±0.67# 23.13±0.34# 0.23±0.15# 5.67±0.37#中药组 4.33±0.41#△ 17.89±0.31#△ 0.27±0.17#△ 3.62±0.34#△西药组 3.81±0.25#△ 15.11±0.24#△ 0.27±0.19#△ 2.48±0.29#△中西医结合治疗组 3.71±0.21#△ 11.34±0.21#△ 0.31±0.18#△ 2.11±0.24#△

3 讨论

从中医角度分析PCOS，病因病机为脾肾两虚、痰瘀互结，为本虚标实证，标为痰瘀阻滞胞宫所致。结合相关文献[6-8]，可从三个方面分析，其一是脾失健运，水湿不化，痰湿内生，痰湿阻滞形成血瘀，痰瘀互结，阻闭冲任胞脉，日久蕴而化毒，形成痰瘀毒交织现象；其二脾肾两虚、运化无力，水谷精微不能化生，则郁而化热，出现阴虚内热现象；其三肾阳亏虚，温煦作用乏力，则全身机体功能下降。从PCOS上看，胰岛素抵抗时体内过多葡萄糖、胰岛素和游离脂肪酸破坏机体阴阳平衡，属于亢则害，这种害就造成体内蓄积过多[9]。而胰岛素受体和受体抵抗后，造成受体功能和结构改变，胰岛素功能逐渐丧失，故出现高糖代谢紊乱。临床治疗调补脾肾、清除痰瘀邪毒同时要应用清热解毒药物以顺应阴阳消长平衡[10]。

在本方中，紫河车、淫羊藿、熟地黄、石斛、山药、巴戟天温补肾阳、通阳化气、填精补肾；苍术、胆南星、茯苓、半夏祛湿化痰、利水渗湿杜绝生痰之源，加上丹参、香附疏肝理气、活血化瘀；益母草活血调经、利尿消肿，广泛运用在妇科疾病中，麦冬、葛根生津止渴。诸药共奏调补脾肾、化痰祛瘀、清热解毒。结合本次结果，天癸方在改善胰岛素抵抗PCOS疗效上和二甲双胍相似，两者合用后在T、LH、IGF-1、E2水平上显著下降，能改善FBG、FINS、ISI、HOMAIR水平，这证实中药能促进胰岛素抵抗敏感指数下降，能降低血清中FINS含量水平，能减少IGF-1合成，阻断雄激素合成，降低血清雄激素水平，促进卵巢功能恢复。另外一方面能促进LH合成，诱导排卵[11-12]。报道[13-14]称，天癸方中的补肾中药能减少胰岛素抵抗，减轻高脂毒性和炎症反应，减少葡萄糖酶转化，纠正胰岛素抵抗，降低高胰岛素血症。

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