参知健脑胶囊对脑缺血大鼠局部脑血流量的影响

马克信，韩振蕴，张韩瑜嘉，马大勇，苏 芮，张裴姝

（1.中国中医科学院眼科医院，北京 100040；2.北京中医药大学，北京 100029；3.北京中医药大学东直门医院，北京 100070；4.中国中医科学院临床基础医学研究所，北京 100070；5.北京中医药大学东方医院，北京 100078）

血管性痴呆（vascular dementia，VD）是指各种脑血管疾病引起的大脑功能障碍而产生的一种慢性进行性获得性认知功能损害综合症[1]。VD是继阿尔茨海默病后位列第二的老年期痴呆的常见病因[2]。VD的发病机制与脑血管病的病灶波及额叶、颞叶皮层以及边缘系统有关。随着医疗卫生条件的改善及人口结构老龄化日益严重，世界范围内VD发病率日益增高[3-4]；我国65岁以上的老年人痴呆的发病率为0.039%，其中血管性痴呆占68.5%居首位[5]，脑卒中生还者中约1/3患有VD[6]。VD不但严重影响患者的生活质量，还给其家庭、社会带来了沉重的负担，因而寻找有效治疗VD的药物已刻不容缓。近年来，脑血流量及代谢机制成为VD领域研究热点[7]。既往研究[8]表明，在低灌注状态及低代谢状态下认知功能可发生减退，笔者前期研究[9-10]也发现参知健脑胶囊能改善拟VD动物模型的学习记忆功能。因而，本研究通过观察参知健脑胶囊对低灌注大鼠脑局部血流（regional Cerebral Blood Flow，rCBF）的影响，探讨其对血管性痴呆的治疗作用机制。

1 实验材料

1.1 药物 参知健脑胶囊，实验用其中试产品（不含赋形剂），由北京中医药大学中药学院生产，批号：20110901；金纳多（银杏叶提取物片）40 mg/片，德国威玛舒培博士药厂生产，批号：1650711。

1.2 动物 成年SD大鼠60只，雌、雄各半，体质量200～250 g，由斯贝福（北京）实验动物科技有限公司提供，合格证号：SCXK（京）2011～0004。在中国中医科学院西苑医院实验室动物房分笼喂养，每笼5只，每天给予标准饲料，清洁自来水自由饮用。动物房环境温度 22～24 ℃，相对湿度约70%，适应性饲养 1 周后进行实验。

1.3 仪器 PeriFlux System 5000激光多普勒血流仪，瑞典Premed公司；FM3545微型电钻，美国FOREDOM公司。

2 实验方法

2.1 造模方法 借鉴de la Torre JC 等创立的双侧颈总动脉永久结扎法（two vessel occlusion，2VO）[11]构建模型。将大鼠用4%水合氯醛，以1 mL/100 g体质量麻醉后，仰卧固定在手术台上，常规消毒，颈正中切口，分离双侧颈总动脉，穿丝线备用。切开大鼠头顶部皮肤，于囟门后2 mm、右5 mm处电钻磨薄颅骨，泰乐胶将单光纤探头粘于头骨上。仰卧位于泡沫板上，光纤接418-1探头，连接于Perimed激光多普勒血流测定仪记录rCBF。切开气管，插管，接呼吸机，通入医用氧气和异氟烷，维持麻醉深度稳定。rCBF稳定10 min后，结扎双侧颈总动脉，造成脑缺氧。缺氧10 min后十二指肠注射受试药物，连续记录120 min。整个操作过程使大鼠肛温保持37℃左右，防止低温的脑保护作用。术后死亡的大鼠被剔除本研究，并补足相应的大鼠数目。

2.2 分组及给药 将60只大鼠随机分为6组，分别为假手术组、模型组、金纳多组、参知健脑胶囊低、中、高组；每组10只，雌、雄各半。除假手术组、模型组给予等体积（5 mL/kg）生理盐水外，其余各组分别给予金纳多20 mg/kg和参知健脑胶囊40、120、360 mg/kg。

3 实验结果

假手术组大鼠不结扎颈总动脉，脑血流量基本保持不变。2VO大鼠脑血流量急剧下降，幅度为55%～65%，与假手术组比较差异有统计学意义（P＜0.01），并于造模后120 min内持续下降，在给药后30、60、90、120 min观测时点，rCBF值与假手术组比较差异均有统计学意义（P＜0.05， P＜0.01）。给药后，对照药金纳多组大鼠rCBF的下降受到抑制，给药后30、60、90、120 min时与模型组比较差异有统计学意义（均P＜0.01）；参知健脑3个剂量组给药后30、60、90、120 min时与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），与对照药金纳多相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1（插页一）。

表1 对大鼠rCBF的影响（ ，n = 10）

表1 对大鼠rCBF的影响（ ，n = 10）

注：与假手术组相比较， # P＜0.05，## P＜0.01；与模型组相比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

rCBF下降幅度 /%缺血前 缺血后 30 min 60 min 90 min 120 min假手术组 0 2.89±12.48 -6.08±6.58 -10.17±12.86 -13.51±15.22 -14.20±16.30模型组 0 -64.07±10.04## -14.86±10.91# -36.91±12.43## -47.38±15.56## -59.41±15.04##金纳多组 20 0 -61.84±10.98## -7.24±21.72 -8.13±28.15△△ -11.61±29.72△△ -12.85±31.05△△参知健脑低剂量组 40 0 -54.45±9.05## 0.95±24.90 3.33±31.30△△ -2.17±41.31△△ -7.06±39.65△△参知健脑中剂量组 120 0 -60.02±7.51## 0.55±10.26△△ -12.44±19.54△△ -24.87±23.09△ -31.80±25.30△△参知健脑高剂量组 360 0 -54.50±9.22## -6.70±11.57 -16.24±18.08△△ -23.90±23.48△ -29.76±24.31△△组 别 剂量/（mg/kg）

4 讨论

近年来，脑血流慢性持续性下降在 VD 发病机制中的作用逐渐受到关注，rCBF的改变能反应脑代谢的变化，而后者与脑功能紧密相关，因此，脑血流及代谢是评价脑功能的理想指标。研究发现，VD 的痴呆程度与脑血流量和代谢率下降呈正相关，即脑血流灌注下降越低，认知功能障碍越明显，提示脑血流量储备功能降低是 VD 发生的主要原因[12]，因而改善脑灌注，特别是与记忆功能相关的关键部位的脑灌注对改善VD动物认知功能有重要作用。本实验通过2VO法建立大鼠低灌注模型，并不能模拟VD慢性认知功能缺失状态，本研究选用该模型主要用以模拟低灌注VD大鼠的缺血状态。但SD大鼠具有完整的 Willis 环，完全结扎双侧颈总动脉后可以通过侧支循环代偿，造成稳定的不完全性前脑缺血，脑的幕上部分血流优先减少，脑干灌注良好，因而，能更接近脑灌注不足的状态，还可维持大鼠生命中枢的基本功能[13]。

参知健脑胶囊是基于王永炎院士等[14-16]提出的“正虚毒损脑络”的血管性痴呆病因病机理论基础上研发而来的。该方组方精当，由人参、知母、赤芍的提取物按一定比例优化配伍而成[17]，具有扶正、通络、祛毒的功效。金纳多（银杏叶提取物片）具有抑制血小板聚集、黏附，降低血液黏度，改善脑血液循环，增加缺血区的血流灌注，使脑组织氧和营养物质增加的作用[18]；系统评价显示[19]银杏叶提取物治疗VD可能优于常规内科基础疗法、GABA类药物及丹参制剂。VD作为目前唯一可防治的痴呆类型[20]，早期预防和改善中枢供血治疗是实现VD可逆的途径之一。本研究选取金纳多作为阳性对照，旨在从血液循环等角度对比研究参知健脑胶囊可能的作用机制。本团队前期研究已证实参知健脑胶囊能改善低灌注痴呆大鼠的认知功能，其疗效优于金纳多。本研究表明，参知健脑胶囊在给药后30～120 min可明显抑制脑缺血大鼠rCBF的下降，治疗作用与金纳多相似，提示参知健脑胶囊治疗VD可能与其改善脑部缺血状态有关。

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