flotillin—1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

杨秦 蒋传命 周雨

摘 要：目的：初步探讨flotillin-1蛋白的表达和临床意义，为深入研究其分子机制奠定基础。方法： 首先通过定时定量PCR、分析flotillin-1蛋白表达量，然后分析在医院调阅的120名非小细胞肺癌病人的各临床指标与其癌组织中flotillin-1蛋白的表达之间的关系。结果：非小细胞肺癌病人的癌组织中有更高的flotillin-1蛋白表达，并且flotillin-1蛋白的表达与肿瘤尺寸、肿瘤分期和淋巴结转移有显著关联（P<0.05），而与年龄、性别、吸烟史及组织学分型没有显著性关联（P>0.05）。

关键词：flotillin-1蛋白；临床意义；非小细胞肺癌；

肺癌是世界上致死率最高的癌症，每年全世界有约140000人被诊断为肺癌[1，2]。这其中85%都是属于非小细胞肺癌（NSCLC）。超过50%非小细胞肺癌患者都有侵袭和远处转移现象。尽管现在三种最常见的方法：手术切除、化疗和放疗已经广泛用于非小细胞肺癌的治疗，但是5年生存率任然非常的低[3]。复杂的遗传因素、后天因素、微环境因素在肿瘤的生存和侵袭中发挥了重要的作用。更好的对肿瘤发生过程中的分子机制的了解产生了新的治疗方法和技术。

fotillin蛋白家族也被称作Reggie蛋白家族是细胞膜脂阀结构的标记蛋白。flotillin蛋白家族包含两个同源蛋白flotillin-1和flotillin-2[4，5]。flotillin-1在很多的上皮起源组织中都和肿瘤的发生有重要的关系。比如过去的研究中发现Flotillin-1蛋白在非小细胞肺癌中特异的过度表达[6]，并且过表达Flotillin-1会激活Aurora-B激酶活性。Aurora-B激酶活性增强后进一步促进细胞微管和着丝粒的不正确联结，导致基因组的不稳定。种种迹象都表明flotillin-1在非小细胞肺癌的发生过程中扮演了重要的作用。本次研究从flotillin-1在非小细胞肺癌中在表达出发，探讨fotillin-1蛋白在非小细胞肺癌分子机制和临床意义。

1 材料和方法

1.1 实时定量PCR

1.1.1引物

fotillin-1正向引物序列：CCCATCTCAGTCACTGGCATT

fotillin-1反向引物序列：CCGC CAACATCTCCTTGTTC

β-actin正向引物序列：TGGCACCCAGCACAATGAA

β-actin反向引物序列：CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA

1.1.2 扩增方法

在医院收集病人手术切除的组织物，用液氮冰冻保存。将一定量的癌組织和癌旁组织碾磨后按常规方法提取DNA，然后反转录。具体反转录的条件为：95℃解链10分钟，然后95℃每次10秒，连续40个循环。59℃退火20秒，最后72℃延长10秒。

1.2病人和标本。

病人的档案和石蜡包被的组织标本来自120个被诊断为非小细胞肺癌的病人。这些病人在2015-2016年间接受肺癌切除手术。临床信息都在表1里。这些病人在接受手术之前从没有接受过化疗和放疗。所有的信息来自于电话访问和办公室访问。病人没3个月接受一次胸片检查，每6个月一次CT检查。其它病人的记录包括临床资料、术前检查结果、手术记录、病理组织资料和TNM分期等。

2 结果

表1：非小细胞肺癌病人肺癌组织fotillin-1蛋白表达与临床特点的关联性分析。从表中可以看出flotillin-1蛋白的表达与肿瘤尺寸、肿瘤分期和淋巴结转移有显著关联（P<0.05），而与年龄、性别、吸烟史及组织学分型没有显著性关联（P>0.05）。

3 讨论

本次研究发现flotillin-1蛋白在癌组织中有更高的表达量，。并且与癌旁组织的表达存在显著差异。这在某种程度上说明flotillin-1蛋白可能与非小细胞肺癌的发生有着密切的联系。而flotillin-1蛋白的表达水平与肿瘤尺寸、肿瘤分期和淋巴结转移有显著关联进一步证明其重要作用。根据其它的报道证明：在结肠癌、乳腺癌中都发现了类似于非小细胞肺癌中的类似情况。这是很有意思的现象。

flotillin-1蛋白的研究还处于初步阶段。其参与癌症发生和发展的机制不甚清楚。这次的工作在一定程度上初步揭示flotillin-1蛋白机制和对非小细胞肺癌研究的价值。因为我们认为它很可能是一种新的非小细胞肺癌标志物并最终用于临床的诊断和治疗，所以接下来的工作将深入探讨其所参加的信号通路以揭示其具体作用机制。

参考文献：

[1]Jemal A， Bray F， Center MM， Ferlay J， Ward E， Forman D. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin. 2011；61：69–90. doi：10.3322/caac.20107.

[2]Jemal A， Siegel R， Ward E， Murray T， Xu J， Smigal C， et al. Cancer statistics， 2006. CA Cancer J Clin. 2006；56：106–30.

[3]Schiller JH， Harrington D， Belani CP， Langer C， Sandler A， Krook J， et al. Comparison of four chemotherapy regimens for advanced nonsmall cell lung cancer. N Engl J Med. 2002；346：92–8. doi：10.1056/NEJMoa011954.

[4]Bickel PE， Scherer PE， Schnitzer JE， Oh P， Lisanti MP， Lodish HF. Flotillin and epidermal surface antigen define a new family of caveolae-associated integral membrane proteins. J Biol Chem. 1997；272：13793–802. doi：10.1074/jbc.272.21.13793.

[5]Babuke T， Tikkanen R. Dissecting the molecular function of reggie/flotillin proteins. Eur J Cell Biol. 2007；86：525–32.

[6]Santamaría A， Castellanos E， Gómez V， Benedit P， Renau-Piqueras J， Morote J， et al. PTOV1 enables the nuclear translocation and mitogenic activity of flotillin-1， a major protein of lipid rafts. Mol Cell Biol. 2005；25：1900–11. doi：10.1128/MCB.25.5.1900-1911.2005.

作者简介：

杨秦（1981-），男，副教授，博士生，主要从事生物化学和分子生物学教学和科研。

基金项目：本文系2016年邵阳市科技局资助科研项目“Flotillin-1在非小细胞肺癌中的分子机制和临床意义”，编号2016ZD20。